体外反搏对休克狗循环紊乱的治疗作用

复制狗重症失血性休克模型,用彩色显微电视录相装置和微循环多参数分析系统,观察体外反搏对失血性休克大循环与微循环效应。结果,体外反搏使休克时下降的中心静脉压和平均动脉压迅速回升。反搏后120分钟,休克时紊乱的球结膜微循环(口径、流速、流量)恢复到接近正常,半数动物存活3天以上。提示体外反搏可改善失血性休克循环功能。显著提高存活率。     

应用亲和磷酸蛋白质组学筛选氧化应激重塑型LPS通路的侯选信号分子

目的： 研究低剂量LPS刺激的Thp-1细胞在有或无H₂O₂预处理时磷酸化蛋白组的差异，以初步筛选氧化应激重塑型LPS通路中的新信号分子。方法： 使用PMA刺激Thp-1单核细胞36 h使之分化成为成熟的巨噬细胞，静息36 h后，先以等体积的培养基或100 μmol/L H₂O₂刺激1 h，再以培养基或10 μg/L LPS刺激 30 min。采用PMAC ( phosphoprotein metal affinity column)富集各组细胞的磷酸化蛋白质，经超滤除盐后进行二维凝胶电泳，比较LPS组和H₂O₂+LPS组的磷酸化蛋白图谱的差异，并挑选部分斑点进行质谱鉴定。结果： 相对于LPS组（仅用LPS刺激的细胞)，在H₂O₂+LPS组（LPS刺激前经H₂O₂提前处理的细胞)中，有29个磷酸化蛋白斑点在双向电泳图谱中表现出可重复的差异，其中，17个斑点发生了上调（包括新出现的斑点），12个发生了下调（包括消失的斑点）。我们已经鉴定出其中5个差异蛋白，这些蛋白参与多种多样的细胞过程例如蛋白质降解、信号转导和蛋白质折叠等。其中，在H₂O₂+LPS组中显著下调的proteasome beta-4亚基与LPS信号传递关系密切。结论： 亲和磷酸蛋白组学有效减少了高丰度的结构蛋白的干扰并增加了信号分子检出的可能性。上述５个蛋白尤其是proteasome beta-4亚基可能是氧化应激重塑型LPS通路的重要调节分子。     

人FAT10蛋白过表达诱导饥饿状态下HEK 293细胞发生凋亡

目的:采用flag标记的人FAT10蛋白研究人FAT10蛋白对HEK293细胞的影响。方法:将FAT10基因片段克隆到载体pcDNA3-flag上,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,用脂质体转染HEK293细胞,用Western blotting方法检测外源性FAT10正常培养状态和饥饿状态下的HEK293细胞中的表达情况;并用XTT法和DNA ladder法观察正常培养和饥饿状态下HEK293细胞的凋亡情况。结果:重组质粒在HEK293细胞中高效表达,但在正常培养状态下和饥饿状态下表达情况不同。饥饿状态下,过表达FAT10的HEK293细胞存活率显著低于对照细胞,并且出现DNA ladder现象。结论:成功构建了带Flag标签的FAT10真核表达质粒,可在HEK293细胞中高效表达;FAT10过表达促进饥饿状态的HEK293细胞发生凋亡。     

用T7噬菌体展示筛选系统筛选与靶蛋白相结合的蛋白

目的 :建立有效的T7噬菌体筛选系统 ,筛选与靶蛋白 (信号分子 )有结合关系的多肽或蛋白。方法 :以p38MAPK、PRAK为靶蛋白 ,分别用不同的介质 (ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂 ) ,通过结合 -洗脱 -扩增 3个步骤 ,筛选噬菌体cDNA文库 (T7人肝和 /或人肺cDNA文库 )。结果 :选择第四轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆 ,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断 ,回收PCR产物并进行顺序 ,将获得的序列在美国国立卫生院 (NIH)的GenBank数据库中进行同源序列比较 ,获得若干编码蛋白的序列。在这些蛋白中有激酶、转录因子、细胞骨架…     

HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析

目的：在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白D（gD2）胞外区基因,检测其免疫原性。方法：以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4代重组杆状病毒（P4）,通过Western blotting法鉴定蛋白表达情况,采用空斑实验检测重组病毒滴度,将P4代重组病毒作为种子大量感染sf9细胞,上清经镍柱亲和层析进行纯化,将纯化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠（gD2组）,以PBS作为阴性对照（PBS组）,ELISA检测小鼠血清中gD2特异性IgG滴度。结果：PCR鉴定和DNA测序,重组表达质粒gD2-Bacmind构建正确,空斑实验检测重组病毒滴度为2.0×10⁹ pfu·mL^-1,纯化的gD2重组蛋白在相对分子质量37000处出现目标条带,纯度达90%以上。第6周gD2组小鼠免疫血清中gD2特异性IgG抗体滴度Log10平均值达到4.34,与PBS组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：利用昆虫-杆状病毒表达系统表达的gD2胞外区蛋白具有良好的免疫原性,可作为HSV-2疫苗的候选。     

腹腔镜阑尾切除术治疗急性阑尾炎患者的疗效及安全性评析

目的:分析腹腔镜医治急性阑尾切除术的疗效和安全性评析.方法:选自该院86例急性阑尾炎病患,随机分组:观察组43例病患采用腹腔镜治疗,对照组43例病患通过传统开腹治疗,比较两组术后恢复情况、白细胞数目(WBC)变化及不良症状.结果:观察组病患手术时间和出血量均少于对照组;观察组病患术后恢复情况明显优于对照组(P＜0.05);观察组WBC水平显著低于对照组;不良症状发生率明显低于对照组(P＜0.05).结论:腹腔镜在急性阑尾炎手术中,降低不良反应发生率,疗效显著.     

2009-2013年江山市无偿献血者血液感染性指标检测结果分析

目的 了解浙江省江山市无偿献血者血液感染性指标检测情况,探讨降低血液不合格率的对策.方法 选择2009-2013年浙江省江山市24114名无偿献血者,运用酶免疫分析系统检测乙肝表面抗原、丙型肝炎抗体、梅毒螺旋体抗体、人类免疫缺陷病毒抗体,并进行统计学分析.结果 江山市近5年无偿献血者血液感染性指标检测不合格率为1.79％;各年份的HBsAg阳性率、抗-HCV阳性率比较,差异均无统计学意义(x2=7.23,P＞0.05);抗-TP阳性率比较,差异有统计学意义(x2=9.65,P＜0.05);17例抗-HIV初筛阳性者有1例确证试验阳性.结论 江山市无偿献血者血液抗-TP、HBsAg阳性率处于较高水平,献血者中也发现1例HIV确认阳性者,为尽量避免感染性血液采集,应加强献血前征询和血液筛查,建立长期固定低危献血者队伍,提高检测水平,确保血液安全.     

额颞大骨瓣开颅切口在颅脑外伤手术中的应用

我科自 1998年 1月～ 1999年 11月应用额颞大骨瓣开颅切口处理额颞广泛脑挫裂伤并颅内血肿 5 3例 ,现报告如下。1　临床资料1 1　一般资料　本组男 37例 ,女 16例 ;年龄 15～ 6 3岁 ,平均 34 2岁。单纯广泛脑挫裂伤 6例 ,脑挫裂伤并脑内血肿2 5例 ,合并硬脑膜外血肿 4例 ,硬脑膜下血肿 18例 ,均为额颞部病变。合并原发脑干损伤 8例。ＧＣＳ评分 ,3～ 8例 2 6例 ,9～ 12分 12例 ,13～ 15分 5例。术前发生小脑幕切迹疝2 3例。1 2　手术方法　采用改良的翼点入路 ,始于耳屏前 1ｃｍ颧弓上缘 ,于耳廓上方向后上方延伸至顶结节 ,然后向前达前额部…     

树型分类及其应用

目的 探讨树型分类方法在流行病学队列资料分析中的应用价值。方法 依据人群的同质性将总人群根据某一变量（在流行病学分析中,通常为危险因素）分成不同的亚人群（在不同的亚人群中疾病的发生根率不同）。结果 各危险因素在疾病发生中的作用、作用方式、危险因素间的交互作用的估计;疾病高危人群的筛选。结论 树型分类对多元分类资料进行分析时,不涉及参数推断,原理简单,尤其适用于有共线性的资料处理。在疾病的危险因素分