肝病患者外周血血管生成素-2定量检测的临床价值分析

目的 观察肝病患者外周血中血管生成素-2(Ang-2)的表达水平,探讨与肝癌(HCC)发展关系及临床价值.方法 收集不同肝病患者外周血标本,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测Ang-2浓度,并分析与血管内皮生长因子(VEGF)相互关系.结果 肝病患者血Ang-2水平,正常对照组为(17.4±2.6)ng/ml、急性肝炎组为(23.5±6.5)ng/ml、慢性肝炎组为(20.9±7.1)ng/ml,肝硬化组为(25.5±5.8)ng/ml和肝癌组为(40.8±3.5)ng/ml;Ang-2水平随肝病进展呈进行性增加,肝癌组明显高于对照组和良性肝病组(P<0.001),且Ang-2与VEGF改变呈显著正相关(r=0.769,P=0.026);如以血Ang-2>35ng/ml为界,肝癌组95%异常,肝硬化组1例异常(2.9%),其他组未见异常,与AFP联检对肝癌具有互补诊断价值.结论 Ang-2过表达与肝癌发展密切相关,且有助于肝癌的诊断与鉴别.     

肝癌组织缺氧诱导因子-1α的动态表达特征及其临床价值

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及转录异常对肝癌的临床价值.方法 以肝癌模型观察肝病理学、HIF-1α转录及表达水平的动态变化;以自身配对法收集手术切除的肝癌和癌周组织,抽提总RNA并扩增分析HIF-1α mRNA表达;以免疫组织化学和Western blot分析HIF-1α表达、胞内分布及临床病理学特征.根据不同资料采用方差分析、确切概率法、Pearson或Spearman等级相关分析进行统计学分析. 结果癌变过程中肝HIF-1α仅和HIF-1αmRNA均呈梯度表达.在对照组、变性组、癌前组和癌变组中,肝HIF-1α阳性率为0、77.8%、88.90/o和100%;HIF-1α/β-肌动蛋白比值为0.16±0.02、0.29±0.04、0.52±0.03和0.84±0.02,均显著高于对照组(P=0.000).人肝癌组织HIF-1α阳性率为80.0%(28/35),癌旁为100%(35/35),且与瘤体大小呈正相关,与分化程度呈负相关,与肿瘤数目及HBsAg阳性无关.结论 HIF-1表达与肝癌发生、发展相关,是肝癌治疗的分子靶目标.     

肝癌缺氧诱导因子-lα异常表达与靶向干预的临床价值研究

分析肝癌组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达特征及沉默HIF-1α对癌细胞增殖的影响。方法:以免疫组化法分析自身配对的肝癌及癌周组织中HIF-1α表达。HepG2细胞转染靶向HIF-1α的miRNA干扰质粒,RT-PCR、Western blot检测HIF-1α基因及蛋白水平变化;酶联免疫吸附法检测培养液血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素（ANG）-2表达;阿霉素预处理后,以Annexin V-FLUOS/PI双染法分析HepG2细胞凋亡率,并检测细胞周期改变。结果:肝癌及周围组织HIF-1α呈棕黄色颗粒状表达,定位于胞浆和胞核,其特征是癌旁组织全数表达高于癌灶组织（80.0%,χ2=22.35,P<0.001）,癌灶组织HIF-1α表达与肿瘤大小相关。HepG2细胞转染靶向HIF-1α miRNA干扰质粒后72 h,HIF-1α在转录水平下降87%,蛋白水平下降56%;培养液中VEGF和ANG-2表达水平分别减少54%和36%;HepG2细胞凋亡率为（22.46±0.61）%,G1期和S期比率分别为（61.49±1.12）%和（22.40±0.58）%;联合阿霉素后HepG2细胞凋亡率为（36.99±0.88）%,G1期和S期比率分别为（65.68±0.91）%和（19.47±1.34）%。结论:肝癌组织HIF-1α过表达与肝癌发展相关,沉默HIF-1α可有效调控下游血管生成相关基因表达,抑制癌细胞增殖,改善化疗药物敏感性。      

大型医院电子病历信息系统的设计及实现

从理念框架．系统框架,数据集成,权限与安全控制、身份索引及临床路径构成等方面,介绍了以电子病历为核心的三甲医院信息平台设计的基本理念与流程,从质量控制、信息共享等方面阐述了电子病历系统设计流程与功能。结合某三甲医院信息平台中电子病历信息系统实际案例,介绍了结构化电子病历系统的设计构成、使用优势及其效果,以及存在不足之处。     

性激素受体在肝癌患者癌组织和癌旁组织中的表达及意义

目的探讨雌激素受体(ER)和雄激素受体(AR)在肝癌患者癌组织和癌旁组织中的表达及意义。方法选择2007—2009年南通大学附属海安医院收治的肝癌患者45例,收集肿瘤切除后新鲜肝脏标本,按照自身配对法留取患者的癌组织和癌旁组织(距癌灶边缘5 cm)各45份。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ER和AR mRNA的表达,灰度比较法进行mRNA定量分析,以RT-PCR产物电泳进行定性分析;蛋白印迹法(WB法)检测ER和AR的表达,以相应的内参条带灰度值进行校正,获得相对蛋白表达量。结果 ER mRNA在肝癌患者癌组织中阳性表达37例,癌旁组织中阳性表达25例,差异有统计学意义(χ2=3.986,P<0.05);其阳性表达率在不同肿瘤分化程度、不同性别、浆膜侵犯与否、不同肿瘤直径、HBsAg阳性与否间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);ARmRNA在肝癌患者癌组织中阳性表达38例,癌旁组织中阳性表达23例,差异有统计学意义(χ2=11.447,P<0.05);其阳性表达率在浆膜侵犯与否和不同肿瘤直径间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。ER mRNA在肝癌患者癌组织中的相对表达量为(0.2746±0.0828),癌旁组织中为(0.1891±0.0536),差异有统计学意义(t=5.8149,P<0.05);AR mRNA在肝癌患者癌组织中的相对表达量为(0.4642±0.2204),癌旁组织中为(0.1987±0.1719),差异有统计学意义(t=6.3720,P<0.05)。mRNA电泳显示,部分肝癌患者癌组织和癌旁组织同时表达ER或AR,部分仅在癌组织表达ER或AR,或仅在癌旁组织表达ER或AR。ER在肝癌患者癌组织中阳性表达41例,癌旁组织中阳性表达18例,差异有统计学意义(χ2=26.031,P<0.05);AR在肝癌患者癌组织中阳性表达43例,癌旁组织中阳性表达17例,差异有统计学意义(χ2=33.800,P<0.05)。ER在肝癌患者癌组织中的相对表达量为(0.68±0.02),癌旁组织中为(0.51±0.01),差异有统计学意义(t=8.84,P<0.05);其表达水平在不同性别、浆膜侵犯与否、HBsAg阳性与否间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。AR在肝癌患者癌组织中的相对表达量为(0.73±0.01),癌旁组织中为(0.49±0.01),差异有统计学意义(t=9.12,P<0.05);其表达水平在不同肿瘤分化程度、不同性别、不同肿瘤直径、HBsAg阳性与否间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。蛋白电泳图显示,肝癌患者癌组织中ER或AR表达的条带强度明显强于癌旁组织。结论肝癌患者癌组织中性激素受体mRNA阳性表达率和蛋白表达水平均较高,其表达与肿瘤直径、肿瘤分化程度、浆膜侵犯、性别及HBV感染密切相关,在肝癌的发生、发展中起重要作用。研究性激素受体在肝癌患者外周血中的表达及其作用机制有助于肝癌的诊断、治疗及预后判断,可能成为潜在的肝癌治疗新靶点。     

膜联蛋白A2异常表达与消化道肿瘤发生、发展的关系

联蛋白(annexin,ANX)是一类受Ca2+调节、能够结合带负电荷膜磷脂的蛋白超家族,家族有12个成员(A1-A11,A13),它们的基因定位及相互作用蛋白见表1[1],蛋白分子包含数个长重复序列的同源性区域,每个长重复序列由70个氨基酸组成,含有凸面和凹面.凸面面向胞膜,包含钙离子和磷脂结合位点,凹面包含氨基末端和羧基末端,广泛存在于细胞质膜下、储Ca2+细胞器附近、核内及细胞基质中并参与一系列细胞活动,如胞吐、胞吞、细胞增殖、分化和凋亡、细胞骨架活动、信号转导等.其中ANX A2具有RNA结合的特性,与DNA合成、复制有关,其表达异常与消化道肿瘤发生发展关系密切,如介导凋亡、诱导分化等.     

miRNA沉默缺氧诱导因子1α基因对HepG2细胞增殖的抑制作用

目的 探讨以miRNA沉默缺氧诱导因子1 α(HIF-1 α)基因,观察其对肝癌细胞株(HepG2细胞)增殖的抑制作用.方法 构建靶向HIF-1 α基因miRNA干扰载体,转染HepG2细胞,以定量PCR和Western blot分析靶基因和蛋白的表达;构建含缺氧反应元件双荧光素酶报告基因检测转染后相对光单位值;酶联免疫吸附法定量检测血管内皮生长因子和血管生成素2的表达;细胞凋亡及增殖周期以流式细胞仪和膜联蛋白/碘化丙啶(V-FITC/PI)双重染色法分析.采用t检验和两因素方差分析及q或q'检验分析计量资料.结果 HepG2细胞在转染HIF-1 αmiRNA后72 h,HIF-1 α在转录和翻译水平上分别下降87%和56%双荧光素酶报告基因减少46%,血管内皮生长因子和血管生成素2分别减少54%和36%;癌细胞凋亡率为22.46%±0.61%(P＜0.01),G1和S期比例分别为61.49%±1.12%和22.40%±0.58%;联合阿霉素处理后,凋亡率增至36.99%±0.88%,G1、S期比例分别为65.68%±0.91%和19.47%±1.34%.结论 HIF-1 α miRNA可抑制HIF-1 α基因表达,联合阿霉素有效调控肝癌细胞周期,促进凋亡、抑制增殖.

Abstract：

Objective To investigate the effect of miRNA silencing HIF-1 α gene on the proliferation of HepG2 cells. Methods The eukaryotic expression plasmids of HIF- 1α miRNA and report gene containing hypoxia-reponse element were constructed and trasnfected into HepG2 cells. The expressions of HIF-1 α gene and protein were determined by real time-PCR and Western blotting. The expressions of HIF1 α, vascular endothelial growth factor (VEGF) and angiopoietin-2 (Ang-2) were quantitatively detected by ELISA. The alterations of cell cycles and apoptosis rate were quantitatively measured by flow cytometry and Annexin V-FITC/PI double dyeing assay. Results 72 h after transfection the downregulations of HIF-1 α mRNA and protein were 87% and 56% respectively, and the decrease of target gene was 46% in the report gene, 54% in VEGF and 36% in Ang-2, respectively. The apoptotic ratio of HepG2 cells was 22.46 ± 0.61%(P ＜ 0.01). The cell cycle changed greatly at the ratio of G1 (61.49 ± 1.12%) and S (22.40 ± 0.58%, P ＜0.01). After being combined with doxorubicin, the apoptotic ratio increased to 36.99 ± 0.88% and the ratios of G1 and S phases were upregulated to 65.68 ± 0.91% and 19.47 ± 1.34% respectively. Conclusion HIF-1α miRNA or / and doxorubicin can regulate the growth cycles of HepG2 cells, promote the cell apoptotosis and inhibit the cell proliferation.     

肝病患者外周血HIF-1α定量检测的临床价值分析

目的：定量检测肝病患者外周血缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达水平,以探讨血HIF-1α浓度作为肝细胞性肝癌（HCC）诊断及预后监测的临床价值。方法：收集不同肝病患者外周血220份及正常健康对照外周血27份,以酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测肝病患者血清HIF-1α表达水平,与AFP对照分析其临床意义。结果：在肝病发展过程中,血清HIF-1α表达呈梯度增加,HCC患者血HIF-1α表达显著高于良性肝病患者（P〈0.001）,与肿瘤大小、有无肝外转移明显相关（P〈0.05）,与患者的年龄、性别、AFP浓度及HBsAg阳性与否间差异无统计学意义（P〉0.05）。受试者工作曲线显示,血HIF-1α面积水平为0.909,血HIF-1α表达水平异常,有助于HCC的诊断。结论：HIF-1α过表达与HCC的发生、发展相关,外周血HIF-1α异常是HCC诊断和转移监测的良好标志物。     

沙利度胺抑制血管内皮生长因子表达对肝细胞癌变的影响

目的动态观察沙利度胺对血管内皮生长因子（VEGF）表达干预对肝细胞癌变的影响。方法将SD大鼠分为诱癌组、诱癌干预组和正常对照组进行动态观察VEGF的表达。诱癌组及诱癌干预组以含2-乙酰氨基芴（2-FAA,0．05％）的颗粒饲料喂饲诱发肝癌。诱癌干预组同时以沙利度胺（100mg/kg体重）灌胃。诱癌鼠及诱癌干预鼠每两周处死一组。并以正常鼠作对照。以病理组织学（HE染色）观察肝细胞形态学变化、免疫组织化学和EHSA法分析VEGF表达变化。结果诱癌组肝细胞出现颗粒样变性、不典型增生、大量癌巢结节,而诱癌干预组形态变化明显受抑;正常肝仅有较低水平VEGF表达,诱癌组肝VEGF表达进行性增加,与肝组织学改变一致,显著高于正常组：在诱癌干预组VEGF表达则显著低于诱癌组的同期水平：且癌变干预组鼠肝癌发生率明显低于诱癌组。结论沙利度胺抑制肝VEGF表达、可推迟肝细胞癌变的发生。     

血清GGT、GGT/ALT及AFP检测对肝脏良恶性疾病的临床价值

目的:探讨检测血清GGT、GGT/ALT以及AFP对肝脏良恶性疾病的临床价值。方法:采用全自动生化仪检测114例肝脏良、恶性疾病患者GGT、ALT活性,采用酶标仪检测AFP活性。结果:原发性肝癌组GGT活性高于慢性肝炎组和肝硬化组(P<0.05);胆道梗阻组GGT活性显著高于急性黄疸型肝炎组(P<0.01)、慢性肝炎组(P<0·01)、肝硬化组(P<0.01)及肝癌组(P<0.05);原发性肝癌组GGT/ALT比值显著高于肝硬化组(P<0.05)、急性黄疸型肝炎组(P<0.01)、慢性肝炎组(P<0.01)。原发性肝癌病例进行AFP和GGT联检可提高阳性率。结论:血清GGT、GGT/ALT比值以及AFP联合检测可有效辅助鉴别肝脏良恶性病变。