高尔基体分泌型聚集素的表达在肝细胞癌进展中的作用

肝细胞癌(HCC)是连续、多中心、多病因的发展过程。现今已有多种药物投入HCC临床试验,但因其具有高侵袭和高转移能力,预后并不理想。阐述了聚集素(CLU)的结构特点及生物学特性;介绍了分泌型聚集素(sCLU)与HCC发生发展关系的研究进展,指出聚集素过表达可促进肝癌转移,诱导上皮间质转换,抑制肝癌细胞凋亡并可导致耐药。此外简介了第二代反义核酸药物Custirsen的分子结构,在体外可下调HCC侵袭能力。提出sCLU可从多方面促进HCC的发生发展,其分子机制值得进一步探究。     

鼠肝脏癌变过程中GGT及其同工酶的表达与动态变化

本文对化学致癌剂２－ＦＡＡ诱发鼠肝癌过程中，膜结合γ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ）及其同工酶的表达与动态变化进行了研究，Ｗｉｓｔａｒ大鼠经２－ＦＡＡ喂饲后，经病理学及的组织化学证实，在肝脏由癌前病变到癌变过程中，肝细胞大量表达ＧＧＴ并分泌入血。肝组织ＧＧＴ，实验各组均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），接近胎鼠肝ＧＧＴ水平，血中ＧＧＴ呈持续住增加．早期升高速度慢于ＡＤＡ，ＧＳＴ和ＡＬＴ，正常鼠肝及血ＧＧＴ仅为单一区带，肝癌鼠肝与血清ＧＧＴ也呈动态改变，显示正常鼠和胎鼠肝ＧＧＴ的双重特征，研究结果提示鼠肝癌时ＧＧＴ大量表达，且有癌胚性质，且血中同工酶异常区带出现较早，检测其同工酶有助于对鼠肝癌的早期诊断。     

人、鼠肝癌形成过程中GGT活性变化及其诊断意义

为了探讨γ -谷氨酰转移酶 (GGT)在人、鼠肝癌形成过程中活性变化对肝癌的诊治意义 ,对 30例肝癌病人肝癌组织及鼠肝癌模型肝组织GGT活性进行了检测和分析比较。结果 :组织中GGT活性表现为人肝癌组织较癌周组织明显升高 (P <0 .0 1) ;鼠化学诱癌过程中从正常到癌前病变到癌变的肝组织依次明显升高 ,三种不同组织间的比较差异均有显著性(P <0 .0 1)。结论 :人、鼠肝癌形成过程中GGT活性呈同步升高趋势 ,GGT为反映肝细胞癌变的标志酶。动态观察GGT活性变化有助于肝癌的早期诊断     

肝细胞性肝癌膜联蛋白A2异常表达的临床病理学特征及意义

目的 分析膜联蛋白A2（ANXA2）在肝细胞性肝癌（HCC）患者中表达的临床病理学特征及对HCC的诊断价值.方法 以自身配对法收集术后肝癌的癌灶、癌旁组织和远癌组织,以Western blot法检测组织中ANXA2的表达,以定量PCR分析ANXA2 mRNA转录水平,以免疫组化法分析ANXA2在细胞中定位;分组收集肝癌、良性肝病患者和健康人群外周血,以ELISA法定量外周血中ANXA2表达水平.结果 无论是ANXA2还是ANXA2 mRNA,HCC癌灶组织中ANXA2表达显著高于癌旁和远癌组织（P〈0.001）;ANXA2在HCC癌灶组织中定位于胞质和胞膜,癌旁组织中定位于胞质,而远癌组织中未见明显表达;HCC患者血ANXA2表达水平,显著高于良性肝病或健康人群（P〈0.01）,但与转移性肝癌组间未见明显差异.临床病理学特征：血ANXA2表达与HBV感染（t=6.820,P〈0.001）、伴肝外转移（t=3.191,P=0.002）、门静脉癌栓（t=2.859,P=0.005）、中低程度分化（P〈0.001）和TNM分期相关（t=5.594,P〈0.001）,但与患者性别、年龄、肿瘤大小和AFP水平间未见明显相关;血ANXA2与AFP联合检测,可提高肝癌诊断阳性率（96.52%）.结论 ANXA2过表达有助于肝癌的诊断与鉴别.     

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨shRNA干预磷脂酰肌醇蛋白多糖（GPC）-3基因转录对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将GPC-3-shRNA插入pGPU6／GFP／Neo质粒,转染人肝癌tlepG2细胞,以Western Blot和荧光定量PCR分别分析GPC-3蛋白和mRNA表达;以nTr法分析HepG2细胞增殖;以流式细胞术、Annexin—V—PE／7-AAD及细胞凋亡-DNA ladder等分析细胞周期及细胞凋亡率。结果shRNA1转染HepG2细胞,GPC-3mRNA沉默效率为89．3％,与GPC-3蛋白下调一致;以shRNA转染HepG2细胞,增殖抑制率为71．1％;细胞周期阻滞在G1期,细胞凋亡率达65．6％。结论资料显示shRNA干预GPC-3基因转录,可显著抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。     

胰岛素样生长因子-I受体异常激活与肝癌靶向治疗

肝细胞恶性转化和癌变过程中,胰岛素样生长因子-I受体（IGF-IR）异常活化。IGF-IR过表达既可作为肝癌早期诊断的标志,又可作为肝癌靶向治疗的新靶点,且具有应用前景。本文对IGF-IR信号通路异常激活及分子靶向治疗肝癌等的研究进展作了综述。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3转录干预对肝癌细胞侵袭和血管新生的抑制作用

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (GPC-3)特异性短发夹RNA (shRNA)对肝癌细胞侵袭和血管新生的抑制作用与机制.方法 将GPC-3特异性shRNA转染肝癌细胞,检测GPC-3 mRNA及蛋白表达的变化;分析其对细胞增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响.样本均数两两比较采用独立样本t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析.结果 shRNA转染肝癌细胞的效率大于80％,GPC-3 shRNA1转染HepG2、MHCC-97H和Huh7肝癌细胞后,GPC-3 mRNA水平分别为2.13±1.10、4.94±0.59、3.66±0.32,与空白对照组的19.34±0.90、20.24±1.61、13.97±1.15相比,t值分别为21.786、15.473、15.004,P值均＜0.001,差异均有统计学意义,且GPC-3 shRNA1可明显诱导细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖、运动及侵袭能力.HepG2、MHCC-97H和Huh7肝癌细胞干扰组β-连环蛋白mRNA表达分别为6.82±0.21、4.01±0.52和5.47±0.90,与阴性对照组的12.52±0.30、12.03±0.98、12.45±0.26比较,t值分别为26.903、12.578和12.870,P值均＜0.001,差异均有统计学意义;Glil mRNA水平分别为9.78±1.35、10.78±1.15和10.93±0.97,与阴性对照组的6.49±0.72、6.80±0.79、10.03±0.97比较,t值分别为-3.730、-4.918和-3.083,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.GPC-3 shRNA1还可下调HepG2和MHCC-97H细胞胰岛素样生长因子Ⅱ和血管内皮生长因子表达.结论 GPC-3shRNA1可下调GPC-3 mRNA水平,通过Wnt/β-连环蛋白和Hedgehogs信号通路抑制癌细胞迁移、侵袭和血管新生,提示GPC-3为肝癌基因治疗潜在的分子靶目标.     

肝组织及血ANXA2表达异常对肝癌诊断与鉴别的价值

目的分析乙肝病毒(HBV)感染相关原发性肝癌(PHC)组织及血膜联蛋白亚组分(annexin A2,ANXA2)水平及其临床价值。方法以自身配对法分别收集HBV相关肝癌术后的癌、癌旁和远癌组织,以免疫组化法分析肝组织ANXA2蛋白表达与细胞分布、荧光定量PCR检测ANXA2mRNA表达,以ELISA法定量肝病患者血ANXA2水平。结果肝癌组织ANXA2表达见于胞浆和胞膜,癌旁组织见于胞浆;癌组织ANXA2表达无论在蛋白还是mRNA水平都显著高于癌旁组织(P<0.001);肝癌患者血ANXA2水平显著高于良性肝病(F=498.221,P<0.001);伴肝外转移、门静脉癌栓患者血ANXA2明显异常;与中分化、低分化程度显著相关;HBV感染与非感染组间差异非常明显(t=6.820,P<0.001);如以血ANXA2≥18ng/ml为界,与AFP联合诊断肝癌阳性率达96.5%。结论 ANXA2过表达有助于PHC的诊断与鉴别。     

GPC-3特异性短发夹型RNA干预基因转录对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察磷脂酰肌醇蛋白多糖（GPC）-3基因特异性短发夹型RNA（shRNA）对HepG2细胞增殖的抑制作用。方法设计、合成和筛选GPC-3特异的高抑制率shRNA并构建质粒;观察shRNA沉默GPC-3基因对肝癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果成功构建了4种GPC-3 shRNA干扰质粒,以脂质体介导分别转染HepG2细胞后,筛选出的shRNA干扰质粒抑制率最高达89.3%;以该高效GPC-3 shRNA质粒转染HepG2细胞24h、48h和72h后,细胞增殖较对照组分别下降了33.2%、56.0%和71.1%（P〈0.05）,细胞多被阻滞在G1期;HepG2细胞凋亡率达65.6%,显著高于对照组（约为5%,P〈0.05）。结论 GPC-3特异性的shRNA可有效降低HepG2细胞中GPC-3基因转录水平,抑制增殖并促进其凋亡。因此,GPC-3可望成为肝癌基因治疗的靶目标。     

骨折愈合修复过程中血管内皮生长因子的表达及其动态改变

目的：通过研究骨折愈合过程中骨痂组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)的基因表达水平的动态变化，探讨VEGF对骨折愈合的影响。方法：实验于2004-01／10在南通大学实验动物中心完成。采用RT-PCR方法检测大鼠骨折不同阶段(3，6，12，24，48d)骨痂组织中VEGF基因的表达及动态变化。结果：VEGF mRNA在骨折后3d开始表达，24d达到高峰，其与B—actin表达量比值在骨折后3，6，12，24，48d分别为0．654-0．22，0．784-0．23，3．814-1．04，5．204-2．15，0．984-0．46，其中12d组、24d组与3d组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)，48d组与3d组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：VEGF参与调节骨折愈合的修复并可能在骨愈合中起重要作用.