pET15b-PEP-1-CAT原核表达质粒的构建及PEP-1-CAT融合蛋白的表达与纯化

目的构建pET15b-PEP-1-CAT原核表达质粒,并表达、纯化得到融合蛋白PEP-1-CAT,为防治与氧化应激有关的疾病奠定基础。方法设计并合成两端分别带5出l和Bgl II酶切位点的CAT引物,用PCR方法以pZeoSV2（＋）-CAT质粒为模板,特异性扩增CAT会长cDNA。将扩增的CATcDNA与dATP反应,利用TaqDNA聚合酶具有的非模板依赖性末端转移酶活性在CATcDNA的3＇末端加“A”并纯化．然后应用TA克隆策略将纯化后的CATcDNA插入至中间载体pGEM-TEasy Vector中得到pGEM-T-CAT。人工合成编码PEP-1的双链寡核甘酸,两端分别引入Nde I和Xho I酶切位点,将其插入pET15b中得到重组质粒pET15b-PEP-1。pGEM-T-CAT和pET15b-PEP-1分别经Sal I-Bgl II和Xho I-BamH I双酶切,利用同尾酶（Sol I与Xho I,Bgl II与BamH I）能酶切产生相同黏性末端的特性,将回收得到的CATcDNA片段与pET15b-PEP-1相连,构建出重组质粒pET15b-PEP-1-CAT,经PCR及酶切鉴定,并通过核苷酸序列测序证实。将鉴定正确的pET15b-PEP-1．CAT重组质粒转化BL21（DE3）,用IPTG诱导目的蛋白表达。然后利用重组蛋白N端的组氨酸“标签”（His-tag）对其进行金属螯合亲和层析纯化。结果测序分析证实,克隆入pET15b的PEP-1序列与设计合成的PEP-1由序列一致,CAT序列与GeneBank中登录号为“AY028632”的CATcDNA序列一致。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,pET15b-PEP-1-CAT在E-coli中获得可溶性高表达,经Ni^2＋-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了PAGE纯的融合蛋白PEP-1-CAT,并在体外检测到其具有特异的过氧化氢酶活性,活性值为77.15U／g,结论成功构建了原核表达载体pET15b-PEP-1-CAT,并经表达、纯化得到可以天然活性形式穿透细胞的重组过氧化氢酶蛋白,从而为防治心肌缺血再灌注损伤等与氧化应激有关的疾病奠定了基础。     

中西医联合康复治疗对急性期脑卒中并发抑郁患者的治疗效果研究

目的探究中西医联合康复治疗对急性期脑卒中并发抑郁患者的治疗效果。方法选取我院收治的急性期脑卒中后抑郁患者310例,随机分为观察组和对照组。对照组给予常规康复治疗,观察组给予中西医联合康复治疗。比较两组患者治疗前后神经功能NIHSS评分和抑郁HAMD评分,和治疗后两组患者抑郁情绪、睡眠障碍、迟缓、焦虑和疑病因子评分。结果与治疗前比较,治疗后两组患者的NIHSS评分和HAMD评分均明显减小(P0.05);与对照组比较,观察组治疗后的NIHSS评分和HAMD评分均较低(P0.05)。治疗后观察组抑郁情绪、睡眠障碍、迟缓、焦虑和疑病5个因子评分水平显著低于对照组(P0.05)。结论中西医联合康复治疗对于急性期脑卒中后抑郁患者有很好的临床治疗效果,有利于脑卒中患者康复。     

遗传性凝血因子X缺乏症一例

患者男，26岁，约6岁起反复出现四肢软组织肿痛，伴间断血尿，偶有鼻出血，后发展至左大腿肿痛，不能行走，在外院诊断资料不详，曾给予输注新鲜血浆、冷沉淀后症状缓解，2周前出现左侧大腿肿痛，运动后及直立位时加重，平卧位时可缓解。既往否认肝炎、结核病、糖尿病等病史，     

可溶性ST2、NT-proBNP对心力衰竭诊断及预后评估的价值※

摘要：目的：通过对心力衰竭（Heart failure,HF）不同心功能分级的患者NT-proBNP、可溶性ST2血清学水平的检测,来探究其与心衰诊断及预后的关系。方法：选取我院就诊的心衰患者共119例作为心衰组,选取同期住院的非心衰患者共54例作为对照组,测量其血清可溶性ST2、NT-proBNP水平,并对其进行一年随访,记录其再住院及死亡情况。并对相关结果进行统计学分析。结果：随着 NYHA 心功能分级升高,血清NT-proBNP、可溶性 ST2水平逐渐升高。可溶性ST2的水平有利于优化心功能分级。NT-proBNP、可溶性 ST2 及两者联合应用诊断心力衰竭的ROC 曲线下面积分别为 0.833 、0.683和0.83。NT-proBNP、可溶性 ST2 及两者联合应用预测心衰患者1年内发生不良预后的ROC 曲线下面积分别为 0.698 、0.773和0.738。NT-proBNP、可溶性 ST2 及两者联合应用预测心衰患者1年内死亡的ROC曲线下面积分别为 0.766、0.844和0.792。结论：可溶性ST2对心衰的诊断价值不如NT-proBNP,但在预后方面可溶性ST2显著优于NT-proBNP,是心衰预后不良的独立预测因子。     

两种消毒液对凯迪康硅橡胶尺寸精度的影响

目的测试消毒液对凯迪康硅橡胶尺寸精度的影响。方法使用重、轻体成分的加成型硅橡胶采用两次法分别制取同一实验模具的印模,随机平均分为3组,每组15个。对照组:清水冲洗,实验组1:使用2%戊二醛浸泡消毒,实验组2:使用84消毒液浸泡消毒。灌注石膏模型,用游标卡尺测量主模型及石膏模型上各标志点的距离,对测量数据进行统计学分析,用χ2比较所取印模经过浸泡后对水晶牙模复制精度上的差异。结果两种消毒液浸泡的印模与对照组印模在对水晶牙模复制精度上效果相同,三者之间差异无统计学意义。在线性变化率上比较,浸泡消毒液的印模的BC、DE值变化率均比对照组要大,但与原始数据差异无统计学意义。结论凯迪康加成型硅橡胶印模材料使用2%戊二醛溶液和有效氯浓度为0.3%的84消毒液溶液浸泡消毒,不影响其印模精度。     

精神分裂症患者的躯体疾病风险及防治进展

目的探讨精神分裂症患者的躯体疾病风险以及临床防治方法,以供临床参考。方法回顾性分析我院201 1年1月至201 1年12月收治的200例住院精神分裂症患者的躯体疾病发生情况,并总结临床治疗方法。结果我院200例精神分裂患者,共发生躯体疾病40例,占20%。其中包括心律失常16例,高脂血症7例,糖尿病7例,高血压5例,胆结石5例。结论对长期住院的精神分裂患者,其发生躯体疾病情况较多,临床应提高对患者此情况的重视程度,做到合理治疗。     

PEP-1肽介导人过氧化氢酶转导入人脐静脉内皮细胞

目的:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730),研究PEP-1肽介导人过氧化氢酶穿透细胞的能力。方法:构建原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT,将其在基因工程菌中表达出N端带有6个组氨酸“标签”(His-tag)的重组蛋白,并通过金属螯合亲和层析对其进行纯化,然后将纯化得到的PEP-1-CAT融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,通过Western blot来分析其转导能力。结果:测序分析证实,原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT重组成功。SDS-PAGE和Western blot结果表明,PEP-1-CAT在E.coli中获得了高效表达,经Ni2+-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了融合蛋白PEP-1-CAT,并在体外检测到其具有特异的过氧化氢酶活性,活性值为77.1 U/g。将其加入到体外培养的内皮细胞培养基中,发现它能以剂量依赖及时间依赖的方式转导入细胞内,并能保持酶活性达48 h。结论:PEP-1-CAT融合蛋白能高效地转导入人脐静脉内皮细胞,为防治各种与氧化应激损伤有关的疾病开辟了新的途径。     

丙泊酚结合右美托咪定对老年手术患者气管插管反应影响

[目的]分析丙泊酚结合右美托咪定对老年手术患者气管插管反应影响,为临床患者诊疗提供一些借鉴。[方法]选取2016年8月至2018年2月间在我院行全身麻醉择期腹腔镜胆囊切除手术患者94例,随机数字表法分成2组,观察组(47例)泵注右美托咪定剂量为0.6μg/kg,对照组(47例)泵注20 mL生理盐水,而后行麻醉诱导。记录患者意识消失时间及患者使用阿托品及麻黄碱状况,观察患者在进入手术室(T0)、气管插管前(T1)、气管插管后即刻(T2)及气管插管后3分钟(T3)HR、BIS数值、MAP、舒张压(DBP)及静脉压(SBP)改变状况。[结果]观察组患者意识消失时间为(27.02±2.61)s,对照组为(40.22±2.94)s,差异有统计学意义(P<0.05);与T0时刻相比,观察组T1至T3、对照组T1、T3时刻MAP、BIS、HR、DBP及SBP显著下降,与T1时刻相比,对照组T2时刻MAP、BIS、HR、DBP及SBP显著上升,观察组患者T3时刻MAP、BIS、HR、DBP及SBP低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组使用阿托品有5例(10.64%),对照有14例(29.79%);观察组使用麻黄碱有2例(4.26%),对照组有13例(27.66),差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]老年手术患者在行麻醉诱导时采用小剂量丙泊酚结合右美托咪定可有效降低气管插管反应,提高麻醉安全性。     

以图文式«住院患者跌倒防范手册»作为工具书的 品管圈活动对降低患者跌倒发生率的影响分析

以图文式?住院患者跌倒防范手册?作为工具书的 品管圈活动对降低患者跌倒发生率的影响分析     

离体和在体大鼠心肌细胞凋亡模型的建立

目的建立离体和在体心肌细胞凋亡模型。方法离体模型:原代培养大鼠心肌细胞进行饥饿处理24 h后,培养液换成Hank's平衡液,同时进行缺氧处理,30 min后恢复到正常氧状态再培养2 h,固定,TUNEL染色,计数凋亡细胞;细胞总DNA抽提,agrose凝胶电泳,观察DNA ladder的产生。在体模型:150 g左右的WKY大鼠麻醉,固定,气管插管,开胸,冠状动脉左前降支结扎30 min,再灌注2 h后,心脏取出,冰冻切片,进行TUNEL染色,观察危险区细胞凋亡。结果原代培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧处理引起大量心肌细胞凋亡,TUNEL染色阳性,DNA电泳有明显梯状条带,在体大鼠心脏冠状动脉左前降支结扎/再灌注造成心肌梗死,梗死周边危险区有大量凋亡细胞产生。结论离体细胞缺氧/复氧处理和在体大鼠心脏冠状动脉左前降支结扎/再灌注都能导致心肌细胞发生凋亡,这两种凋亡模型具有操作简单、成功率高等特点,可以用于心肌梗死机制的研究以及保护心肌药物的筛选。