自建色谱法血药浓度监测靶值建立及与不同方法测定水平的比较——以硫唑嘌呤代谢物和卡马西平为例

目的：探索自建色谱法血药浓度监测靶值的建立;对比色谱法和免疫法在血药浓度测定的水平差异。方法：选择安徽医科大学第一附属医院硫唑嘌呤代谢物和卡马西平血药浓度监测分别作为实验室自建色谱法和不同测定方法的项目代表。回顾性分析硫唑嘌呤代谢物部分质控数据,以即刻质控法初步建立室内靶值,Westgard多规则质控对该项目开展常规质控;43例卡马西平样本分别由实验室HPLC和全自动生化分析仪以及第三方医学实验室,通过相关和回归分析评价检验方法一致性。结果：硫唑嘌呤代谢物项目在第16次质控监测提示告警,第17次失控记录也证实其存在异常离群。常规检测过程中累积失控2次即2_2s及1_3s记录各1次。三水平质控品累积变异系数分别为8.85%、7.46%和4.73%。3组卡马西平血药浓度测定数据均为非正态分布,其中实验室免疫法测定质量浓度结果最高（中位数为6.00 μg·mL^-1）,第三方实验室测定结果次之（中位数为5.50 μg·mL^-1）,而实验室色谱法测定结果最小（中位数为3.80 μg·mL^-1）。第三方实验室与实验室免疫法、第三方实验室与实验室色谱法以及实验室色谱法与免疫法其3组方法比较的秩相关系数分别为0.984、0.975和0.956,Passing-Bablok回归方程分别为：y=0.298+0.817x,y=-0.246+1.539x,y=-1.009+1.947x。结果表明,以上测定方法的一致性较好。结论：即刻质控法可用于自建色谱法血药浓度监测的简易室内质控程序。色谱法和免疫法在卡马西平血药浓度测定中存在基线水平差异。     

莪术油抗流感病毒和呼吸道合胞病毒作用的实验研究

莪术油为姜科植物蓬莪术、广西莪术或温郁金的根茎经水蒸汽蒸馏而得到的挥发油,主要含有莪术醇、莪术二酮等,具有明显的抗肿瘤[1]、抗病毒[2]等作用,莪术油葡萄糖注射液作为抗病毒药在临床应用多年,但对莪术油口服给药的有效性却未见报道,本文通过体内、外实验研究莪术油抗流感病毒(IV)和呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.     

保护性自噬对顺铂诱导人乳腺癌 MCF-7细胞凋亡的抑制作用探讨

目的：探讨顺铂对乳腺癌 MCF-7细胞自噬的影响及自噬在顺铂诱导凋亡中的作用。方法顺铂处理乳腺癌 MCF-7细胞,MTT 检测细胞增殖的能力,Hoechst 33342染分析细胞的凋亡,吖啶橙染色分析细胞的自噬,Western blot 分析自噬蛋白 LC3Ⅰ／Ⅱ和 p62的表达和凋亡蛋白多聚 ADP-核糖聚合酶 PARP 表达。结果顺铂呈时间和剂量依赖性抑制乳腺癌 MCF-7细胞的增殖,并且凋亡细胞数量随顺铂浓度的递增而增加;同时顺铂能诱导微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白的增加,p62蛋白的减少以及酸性自噬溶酶体的增加,顺铂联合氯喹明显增加了 LC3Ⅱ和 p62的蛋白的表达;与单药顺铂相比,自噬抑制剂氯喹明显降低细胞存活率（89．17％±2．56％）vs （74．63％±1．51％）,（P ＜0．05）,而且 PARP 蛋白发生了明显的裂解（P ＜0．05）。结论顺铂诱导乳腺癌 MCF-7细胞保护性自噬,抑制自噬可以增加顺铂诱导乳腺癌 MCF-7细胞凋亡,自噬抑制剂联合顺铂为乳腺癌提供了新的治疗策略。     

三七总皂苷口含片的含量测定

目的:建立三七总皂苷口含片含量的高效液相测定方法。方法:采用高效液相法进行梯度洗脱,色谱柱为HypersilNH2(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相为乙腈-1%磷酸二氢钾溶液,流速为1.0 mL/m in,检测波长203 nm,柱温为35°C。结果:三七总皂苷中4种皂苷的线性都良好(r=0.999 9),线性范围人参皂苷Rg1 0.093 75~6μg,人参皂苷Re 0.011 72~0.75μg,三七皂苷R1 0.023 44~1.5μg,人参皂苷Rb1 0.140 6~9μg。结论:本文建立的方法简便,重现性好,能同时测定三七总皂苷中的4种主要成分,可用于三七总皂苷口含片的质量控制。     

伊布替尼血药浓度检测方法的建立及临床应用

目的 建立检测伊布替尼血药浓度的方法并应用于临床。方法 以泽布替尼为内标,血浆样本以固相萃取柱处理后,采用高效液相色谱（HPLC）法检测伊布替尼的浓度。以Agilent 5 TC-C18(2)为色谱柱,乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液（43∶57,V/V）为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为40℃,进样量为20μL,运行时间为25 min。采用上述方法测定9例非霍奇金淋巴瘤患者第30天用药后2 h时血浆中伊布替尼的浓度。结果 伊布替尼检测质量浓度的线性范围为10～500 ng/mL(R 2=0.998 9),定量下限为10 ng/mL;批内、批间精密度试验的RSD均不高于12.77%;提取回收率分别为74.80%、97.70%,RSD均小于2.90%;稳定性试验的RSD均小于7.10%。9例患者的血药浓度为15.341～279.628 ng/mL。结论 所建立的HPLC法简单、快捷,可用于伊布替尼血药浓度的测定。     

肾移植患者基因多态性对五酯胶囊增加他克莫司血药浓度的影响

目的:探讨肾移植患者CYP3A4、CYP3A5等基因多态性对五酯胶囊增加他克莫司血药浓度的影响。方法:选取2015年8月-2018年11月于安徽医科大学第一附属医院进行肾脏移植手术并行门诊复查的汉族肾移植患者194例,根据其是否联合使用五酯胶囊分为单药组(107例)和联合组(87例)。单药组患者术后口服他克莫司胶囊0.1～0.15 mg/kg,bid+吗替麦考酚酯胶囊0.5～0.75 g,bid或麦考酚钠肠溶片360～540 mg,bid+醋酸泼尼松片10 mg,qd;联合组患者在单药组基础上加服五酯胶囊2粒,bid。两组患者均用药至少7 d。收集患者的性别、年龄等临床资料;采用酶放大免疫分析技术检测他克莫司稳态血药谷浓度,并计算血药谷浓度/日剂量(C/D)值;采用聚合酶链反应检测患者CYP3A5基因rs4646457、rs15524、rs776746,CYP3A4基因rs4646437、rs2242480、rs35599367,ABCB1基因rs1128503,ABCC2基因rs3740066,NR1I2基因rs3814055,POR基因rs1057868,PPARA基因rs4253...     

茵栀黄分散片处方优化与溶出度考察

目的:优选茵栀黄分散片处方,并考察其溶出度。方法:以崩解时限为评价指标,以交联聚维酮(PVPP)、交联羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、微晶纤维素(MCC)用量为考察因素,采用正交设计优选处方。结果:PVPP、CCNa、MCC的用量分别为10%、6%、40%,制得的分散片在3min内完全崩解且能通过2号筛,2min左右累积溶出百分率即可达到标示量的80%以上。结论:所选处方合理,制得的分散片崩解时限符合要求。     

血小板胞内摄取莪术二酮的实验研究

目的:通过对血小板胞内摄取莪术二酮的研究,为进一步阐明莪术中抗血小板活性成分的作用途径提供实验依据。方法:建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法检测血小板中莪术二酮的浓度并对其方法学进行验证;体外实验采用人洗涤血小板与不同浓度莪术二酮共培养,LC-MS/MS筛选血小板胞内摄取莪术二酮的最佳条件。体内实验通过采集莪术二酮溶液灌胃小鼠的血样和莪术油注射液滴注的临床患者血样,分步离心法提取血小板,LC-MS/MS检测血清与血小板胞内莪术二酮浓度。结果:莪术二酮质量浓度在1～200 ng·mL^-1范围内呈现良好线性(r=0.997 5);定量限为0.4 ng·mL^-1;方法的批内精密度与批间精密度均<5.0%,准确度均<8.8%;提取回收率在93.1%～110.2%。体外实验结果显示在血小板计数相同的条件下,莪术二酮(1、0.5、0.25 mmol·L^-1)均能在血小板裂解液中检测到;体内实验结果显示灌胃小鼠和给药患者的血小板裂解液、血清中均检测有莪术二酮;实验证明莪术二酮在体内外均可被血小板结合和摄取。结论...     

免疫抑制剂血药浓度与肾移植术后腹泻的关联性分析

目的 探讨免疫抑制剂霉酚酸酯（MMF）、他克莫司（FK506）血药浓度与肾移植术后腹泻之间的关系。方法 选取2015年8月至2017年8月在安徽医科大学第一附属医院行肾移植手术的146例受者,根据术后是否发生腹泻分为两组,未发生腹泻的患者为非腹泻组（83例）、发生腹泻且大于1次者为腹泻组（63例）,测定受者的霉酚酸谷浓度（MPA-C₀）和FK506谷浓度（FK506-C₀）,记录术后出现的腹泻情况,运用统计软件分析MPA-C₀和FK506-C₀与腹泻间的关系。结果 腹泻组与非腹泻组之间MPA-C₀差异无统计学意义（P>0.05）,FK506-C₀差异有统计学意（P<0.001）;ROC曲线分析显示,FK506-C₀仅在术后1个月差异有统计学意义（曲线下面积0.607,P<0.05）,FK506 C₀<11.15 ng/mL是术后1个月发生腹泻的截断值,敏感度51.90%,特异性63.60%;MPA-C₀与FK506-C₀对腹泻发生不存在交互作用（P>0.05）。结论 MPA-C₀与腹泻的发生没有关联性,而较高的FK506-C₀易导致肾移植术后腹泻,其中术后1个月FK506-C₀ <11.15 ng/mL是发生腹泻的的最佳截断值。