脾内免疫后制备抗人IgG单克隆抗体

为了得到抗人IgG特异性IgM类单克隆抗体(McAb),给BALB/c小鼠一次脾内注射20μl/(1mm/ml)纯化的,人IgG进行免疫。四天后,将脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。该免疫方案与长程免疫方案比融合杂交瘤细胞少,但分泌特异性McAb的阳性杂交细胞比例高。使用纯化的人IgG_1、IgG_2、IgG_3、IgG_4、IgA、IgM、IgE及K和λ轻链进行固相酶免疫法分     

单克隆抗体治疗家兔实验性单纯疱疹性角膜炎

单纯疱疹性角膜炎(HSK)是感染性角膜炎中最主要的致盲性眼病,病程迁延,患者痛苦。该病多由单纯疱疹病毒1型(HSV-1)引起,药物局部治疗是目前治疗该病的主要方法。常用药物有疱疹净、无环鸟苷等抗代谢药,但疗效不够显著,并有细胞毒性等副作用。本文将抗HSV糖蛋白单克隆抗体(McAb)应用于家兔实验性单纯疱疹性角膜炎的治疗,现将初步结果报告如下。     

单纯疱疹病毒糖蛋白单克隆抗体对致死性腹腔感染BALB/c幼鼠的被动保护作用

用单纯疤疹病毒(HSV)Ⅰ型SM44株和Ⅱ型SaV株分别腹腔感染BALB/c小鼠,于感染前后不同时间经腹腔注射HSV单克隆抗体(McAb)观察6株McAbs对致死性腹腔感染小鼠的被动保护作用。结果4株McAbs(2C5、1A12、Mad-2、1D10)对HSV-Ⅰ感染的小鼠有保护作用,5株McAbs(2C5、1A12、2A8、1D10、CH-A9)对HSV-Ⅱ感染的小鼠有保护作用。体内保护作用与体外的中和活性相关;并分析了McAbs在中和试验中有无补体参与条件下的保护能力。还证实了HSV糖蛋白在急性感染病程中其型特异性和型共同性抗原决定簇在体内的表达。     

抗HSV糖蛋白单克隆抗体可变区基因的克隆和序列测定

选用具有动物体内高保护作用的抗ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性糖蛋白Ｃ（ｇＣ）单克隆抗体１Ａ１２，从其杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５为引物反转录合成ｃＤＮＡ，用一对鼠抗体通用ＶＨ引物和一对Ｖ引物进行ＰＣＲ，扩增出１Ａ１２ＶＨ和１Ａ１２ＶＬ基因，并分别克隆入ｐＵＣ１８质粒中，序列分析结果表明，１Ａ１２ＶＨ基因由３３６ｂｐ组成，编码１１２个氨基酸，隶属于小鼠重链第３组亚组（Ｄ）；１Ａ     

单克隆抗体作单纯疱疹病毒糖蛋白的特性鉴定以及临床应用

应用本室制备的8株抗单纯疱疹病毒糖蛋白单克隆抗体(抗HSV McAb)进行了系列研究,①鉴定出一种新的HSV糖蛋白g30K、gC的一种新形式,以及gC和gD;②建立了HSV感染的临床标本作抗原抗体分型检测的McAb-ELISA双夹心法,检测961份标本效果良好,并己在全国各地一些医疗单位推广使用;③证明McAb治疗家兔实验性单纯疱疹性角膜炎(HSK)有显著效果,并探讨其治疗机理主要为中和作用和ADCC效应;④对部分志愿者用McAb治疗单纯疱疹性角膜炎、妇女生殖器疱疹和小儿口腔疱疹性糜烂,取得明显疗效。     

抗HSVgc单克隆抗体V_2基因的扩增、克隆及序列测定

本文从分泌具有高中和活性和高保护作用的抗ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性糖蛋白Ｃ的鼠源性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞１Ａ１２中提取胞浆总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５为引物逆转录合成ｃＤＮＡ，用一对鼠抗体Ｋ链通用引物进行ＰＣＲ，扩增出１Ａ１２ＶＬ基因，并克隆入ｐＵＣ１８质粒中。序列分析结果表明，１Ａ１２ＶＬ基因由３３０ｂｐ组成，编码１１０个氨基酸，隶属小鼠轻链ｋ链４组。     

单纯疱疹病毒糖蛋白C的鉴定

业已发现的单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白有6种即gB、gC、gD、gE,gG和gH。糖蛋白C(gC)既可诱生中和抗体,也能诱导细胞免疫,gC-1还起到补体C3b受体的作用。本文采用放射免疫沉淀试验和用HSV-1/HSV-2型间重组株作物理图谱等方法,鉴定出6株单克隆抗体(McAb)的靶抗原为gC。 6株抗HSV的MeAbs 1A12、1C4     

放射免疫沉淀试验鉴定单纯疱疹病毒糖蛋白C

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型、2型(HSV—1/HSV-2)型间重组株作物理谱图的方法.鉴定出抗HSV的单克隆抗体(McAb) 1A12、Mad-2、2D11、CM-D3、2A8和1C_4的靶抗原是一组分子量在105～130Ka之间的糖蛋白,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.536～0.682遗传单位之间,与gC的编码基因部分重叠。故认为这些McAbs的靶抗原为gC,其中,Mad-2和CM-D3分别为HSV-1和HSV-2型特异性,其靶抗原分别为gC-1和gC-2。ELISA阻断试验结果表明,4株型共同性McAbs 1A12、2D11、2A8和1C4.抗gC上4个独立的抗原位点。     

腹水和抗血清中抗原特异性免疫球蛋白含量的测定

本文介绍一种测定腹水或/和抗血清中抗原异性免疫球蛋白含量的快速而敏感的方法。此法是先亲和分离特异性免疫球蛋白,然后用放射免疫分析法测定分离的免疫球蛋白。 用微孔微量滴定板Millipore Millititer TM—过滤系统进行多样本的同时分析,将免疫吸附剂加入微量滴定—HA板孔中,于96孔聚苯乙烯板中收集抗原特异性免疫球蛋白洗脱     

单纯疱疹病毒2型药物敏感性测定及其阿昔洛韦耐药株的建立

目的应用空斑抑制试验测定单纯疱疹病毒2型(HSV-2)药物敏感性,并建立体外耐药病毒株。方法将HSV-2接种于乳兔肾细胞中,加入不同浓度的阿昔洛韦(ACV),培养72h后固定、染色、清点空斑数并计算药物的半数抑制浓度(IC50),通过IC50来判断HSV-2的药物敏感性。将HSV-2在含ACV环境中连续培养9代,分别在第3,6和9代测定其IC50。结果ACV对HSV-2标准株Sav毒株的IC50为1.1μg/mL。HSV-2在含ACV的环境中连续培养3代后即产生了耐药性,第3,6和9代的IC50分别为8.4μg/mL,56.9μg/mL和121.3μg/mL。结论空斑抑制试验是测定病毒药物敏感性的有效、实用的方法,建立的体外耐药病毒株可用于HSV-2的耐药性研究。