Fascin真核表达载体的构建及其在肺癌A549细胞中的表达

目的：构建fascin基因的pcDNA3.1（＋）表达载体pcDNA3.1（＋）-fascin,将其转染肺癌A549细胞,观察其表达,并检测转染前后细胞内F-肌动蛋白（F-actin）的变化。方法：应用RT-PCR从Hela细胞中扩增fascin基因,酶切后和真核表达载体pcDNA3.1（＋）重组,获得重组表达载体pcDNA3.1（＋）-fascin。经酶切、电泳,DNA测序鉴定后,将其及对照空载体转染肺癌A549细胞,采用Western blotting检测fascin在A549细胞中的表达情况;免疫荧光染色后采用激光共聚焦显微镜观察fascin对F-actin的影响。结果：成功克隆fascin基因片段,并将其重组到pcDNA3.1（＋）载体中,经酶切及DNA测序鉴定正确。pcDNA3.1（＋）-fascin转染A549细胞,Western blotting鉴定转染后fascin在A549细胞中高表达。激光共聚焦显示fascin基因能够在A549细胞内促进F-actin形成丝状突出。结论：成功构建了pcDNA3.1（＋）-fascin真核表达载体,并将其转染肺癌A549细胞;激光共聚焦观察显示fascin能够促进A549细胞内F-actin形成丝状突出,可能是促进A549细胞转移的结构基础之一。     

胸腔镜剑突肋缘下及纵劈胸骨胸腺扩大切除术治疗重症肌无力合并胸腺瘤临床疗效的倾向性评分匹配研究

目的 分析胸腔镜剑突肋缘下及纵劈胸骨胸腺扩大切除术治疗重症肌无力合并胸腺瘤的临床疗效、安全性及可行性。方法 回顾性分析2011年12月—2021年12月在空军军医大学唐都医院胸外科同一诊疗组行手术治疗的重症肌无力合并胸腺瘤患者的临床资料,按照手术入路分为胸腔镜剑突肋缘下胸腺扩大切除术组（胸腔镜组）和纵劈胸骨胸腺扩大切除术组（纵劈组）。比较两组患者的临床资料。结果 共纳入456例患者,其中纵劈组51例,男30例、女21例,年龄23～66(49.5±11.8)岁;胸腔镜组405患者经倾向性评分匹配后纳入51例患者,男28例、女23例,年龄26～70(47.2±12.2)岁。两组均顺利完成手术,胸腔镜组无术中转开胸。胸腔镜组在手术时间、术中出血量、胸腔引流时间、术后住院时间、患者满意度评分、疼痛评分、并发症方面优于纵劈组（P<0.05）。两组在术中淋巴结清扫站数、术中淋巴结清扫枚数、术后肌无力缓解情况方面差异无统计学意义（P>0.05）。结论 对于重症肌无力合并胸腺瘤患者,胸腔镜剑突肋缘下胸腺扩大切除术的手术彻底性、安全性不亚于纵劈胸骨术式,但其更加微创化,是一种有效的手术方式。     

COMHON量表和Braden量表在ICU纵隔术后患者压力性损伤风险评估中的比较

目的比较COMHON量表和Braden量表在ICU纵隔手术后患者压力性损伤风险评估中的预测效能。方法便利选取胸腔外科行纵隔手术治疗后入住ICU的232例患者为研究对象,采用COMHON量表和Braden量表对其进行压力性损伤风险评估。结果在72 h观察期内共29例(12.5%)患者发生压力性损伤,分期均为1期。使用两种量表评估时,压力性损伤组与非压力性损伤组量表总评分差异有统计学意义(均P0.01)。Braden量表ROC曲线下面积为0.747,当总分为13.5分时,约登指数为0.522,预测价值最大;COMHON量表ROC曲线下面积为0.976,当总分为9.5分时,约登指数为0.828,预测价值最大。结论 Braden量表和COMHON量表均可有效评估ICU纵隔手术后患者压力性损伤发生风险,而COMHON量表的预测效能高于Braden量表。     

搏，还是不搏？——外科医生面临的困境

医疗费用高,“看病贵”和“看病难”是长期困扰中国医疗服务的痼疾,面对生命质量低下的重症贫困患者,是否应该手术施救？这样一个问题的答案应该是毫无疑问的。这是一个涉及医疗原则、医学伦理及社会医疗保障等多方面的难题。因此,完善医疗救助,加强医疗保障体系,增强政府、医疗机构及社会力最关注,对于缓解贫困患者的医疗施救问题具有重要作用。     

同种异体近交系小鼠原位气管移植模型的建立

目的:建立近交系小鼠同种异体原位气管移植模型.方法:供受体体质量配对后,C57BL/6 和BALB/c小鼠随机分为2组,每组各10对,A组为C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)组,B组BALB/c(供体) →BALB/c(受体)组,昆明种小鼠10对作为C组即KM(供体) →KM(受体)组. 利用颈前肌肉及周围组织被覆移植气管提供血供建立同种异体小鼠原位气管移植模型. 使用HE染色以及扫描电镜对同种异体小鼠原位气管移植模型进行评估,观察比较上皮积分、淋巴细胞计数以及无核软骨细胞/全部软骨细胞等指标.结果:A, B组全部存活,C组存活6只. A, C组移植气管均发生一定程度的排斥反应,B组无排斥反应发生. A, B, C三组上皮积分分别为: 1.094±0.120分,2.872±0.059分及0.995±0.444分;无核软骨细胞数/骨细胞总数比值分别为:(27.22±1.09)%, (10.60±1.01)% 及(31.40±6.43)%;淋巴细胞计数分别(20.18±1.31)个/HPF,≤5个/HPF及(22.55±4.87)个/HPF. A, B组及C,B组各项指标相比均有统计学意义,而A,C组相比则差异无统计学意义;且C组各数值离散程度均大于A组.结论:成功建立了C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)小鼠原位气管移植模型. 近交系及封闭群模型均能反应移植气管的各种病理生理变化,但封闭群模型稳定性较近交系差.     

小细胞肺癌的外科治疗

目的　探讨以手术为主的综合疗法对小细胞肺癌的临床治疗效果。方法　回顾性分析 84 5例小细胞肺癌临床资料 :其中 5 73例广泛期病变均采用化疗或放疗 ;局限期病变 2 72例 :化疗或 /和放疗 5 0例 ;手术 术后化疗 4 8例 ;术前化疗 手术 术后化疗或 /和放疗 174例 ;比较分析、评价不同方法的疗效。结果　广泛期病变 1、2、3年存活率分别为 13%、6 .8%、0 % ;局限期病变 :化疗组和术后化疗组 1、3、5年存活率分别为 74 .2 %、31.2 %、4 .3%和 87.5 %、4 6 .6 %、31.9% ,二组间 1年存活率无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,3、5年的存活率差异显著 (P <0 .0 5 ) ;而术前先化疗、后手术 ,术式包括肺叶切除、全肺切除、支气管 /肺动脉袖式切除重建 ,术后再化疗 /放疗的 174例 ,其 1、3、5、10年存活率分别为 88.4 % ,5 8.9% ,4 9.5 % ,11.5 %。颅内、肝脏和骨髓广泛转移为影响长期存活的主要原因。结论　小细胞肺癌对化疗和放疗均敏感 ,广泛期病变已无手术适应症 ,应采用以化疗 /放疗为主的保守治疗。而局限期小细胞肺癌则应选择以手术为主、辅以术前、术后化疗 /放疗的综合方法 ,可获得较为满意、甚至长期存活的临床效果     

全肌肉分离单孔胸腔镜治疗自发性气胸的临床疗效及其对氧化应激反应与疼痛介质分泌的影响

目的 研究全肌肉分离单孔胸腔镜治疗自发性气胸的临床疗效.方法 采用回顾性分析方法,以2020年1月至2021年1月入院的90例自发性气胸患者为研究对象,根据治疗方式分为研究组(45例)与对照组(45例);研究组行全肌肉分离单孔胸腔镜治疗,对照组行三孔胸腔镜手术治疗.比较两组术前与术后3d血气指标[动脉血氧分压(PaO2...     

EGFR 19-Del上调Fn14及JAK/STAT的表达促进非小细胞肺癌的发生发展

目的：本研究检测Fn14、p-JAK1、p-STAT1在EGFR 19-Del的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系中的表达,并探讨EGFR 19-Del对Fn14及JAK1/STAT1表达的调控作用,以期为EGFR 19-Del之NSCLC的发展机制研究奠定基础。方法：采用EGFR TKI(吉非替尼)处理HCC827细胞系(EGFR 19-Del)、H1975(L858R)及H292细胞系(正常肺上皮细胞),Western blot法检测Fn14、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达。结果：相比于H1975和H292细胞系,Fn14、p-JAK1及p-STAT1基因和蛋白在HCC827细胞系中有较高的表达水平。对比未经吉非替尼处理的HCC827细胞系,经抑制剂处理后的HCC827细胞系中Fn14、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达明显受到抑制,而在H292细胞系中无此现象。由此说明,EGFR 19-Del对Fn14及JAK/STAT信号分子的表达具有调控作用。结论：EGFR 19-Del可能通过上调Fn14及JAK/STAT信号分子的表达促进NSCLC的发生发展,而Fn14可能是EGFR 19-Del之NSCLC潜在的治疗靶点。     

p16-INK4alpha重表达对人食管癌细胞系EC109生长的抑制作用

目的探讨用腺病毒介导野生型的p16基因在食管癌细胞系表达,研究重表达野生型p16基因对食管癌细胞系EC109生长的抑制作用,为寻找食管癌致癌机制的研究及其基因治疗提供理论基础.方法用基因重组技术,将pcDNA3-p16中的野生型p16基因用Kpn I/BamH I进行双酶切,克隆入腺病毒表达载体pAdCMV中,将重组质粒pad-CMV-p16与腺病毒质粒JM17用Lipofectamime 2000共转染293细胞,产生重组腺病毒.用重组腺病毒感染人食管癌细胞系EC109,在感染后的不同时段,用免疫荧光、打点杂交方法检测p16基因在细胞中的表达用MTT法及流式细胞仪观察p16基因的表达对食管癌细胞株生长的影响.结果经酶切鉴定野生型p16基因克隆入腺病毒表达载体中,与JM17共转染293细胞后,可产生具有感染活性的重组腺病毒,用重组腺病毒感染食管癌细胞株EC109细胞后,可抑制食管癌细胞的生长,同对照组相比其最大抑制率可达52.7%.Multipcycle分析软件分析对细胞周期影响表明,处于G0～G1期的细胞为41%～63%感染后的细胞经Dot blot和Westernblot杂交证实,有外源的p16mRNA及蛋白的表达.结论重组腺病毒可将野生型p16基因导入人食管癌细胞系EC109中,野生型p16基因在p16基因功能缺失的细胞中重表达能抑制癌细胞恶性生长.p16基因功能缺失是食管癌致癌因素之一     

重构型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶对人肺癌A549细胞的凋亡作用

目的　探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 (Caspase) 3基因对人肺癌A5 49细胞的凋亡诱导作用。方法　构建Caspase 3的真核表达载体pEGFP Caspase 3 ,转染A549细胞株。用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )、免疫组织化学等方法检测转染后A549细胞中Caspase 3基因的表达。用荧光显微镜、电镜、四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色方法观察Caspase 3对A5 49细胞的抑制、凋亡作用。结果　Caspase 3基因在A5 49细胞中有表达 ;形态学观察证实转染后 48h的细胞株有细胞凋亡 ;转染Caspase 3后 2 4～ 48h细胞生长明显受到抑制。结论　重构型Caspase 3基因对人肺癌A5 49细胞有致凋亡作用。