莲必治注射液的过敏性研究

摘 要 目的: 研究两种不同纯度的莲必治注射液在被动皮肤过敏试脸(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)和全身主动过敏试验(active systemic anaphylaxis,ASA)中是否有过敏反应。方法: 按照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》的试验方法对两种不同纯度的莲必治注射液进行被动皮肤过敏试验和全身主动过敏试验研究。结果:被动皮肤过敏试验中两种莲必治液均有过敏反应。在全身主动过敏试验中,莲必治A 高剂量组有2只动物出现弱阳性,而莲必治B 高剂量组1只出现弱阳性,5只出现阳性反应,2只出现过敏反应的极强阳性反应,其他未见过敏反应。结论:莲必治注射液所引发的过敏反应可能与其所含的杂质有关。     

多遗传学终点的遗传毒性试验组合的建立

目的：建立Ames波动试验、中国仓鼠肺成纤维（CHL）细胞体外微核试验和小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验（MLA）方法,探讨其作为一套新的遗传毒性试验组合检测化合物诱变性的可能性。方法：在Ames波动试验中,用TA100沙门氏菌进行96孔板的Ames波动试验,非活化条件下以叠氮钠（SA）、活化条件下以环磷酰胺（CP）染毒处理,计数阳性孔数并进行卡方检验。在CHL细胞体外微核试验中,非活化条件下用丝裂霉素C （MMC）分别染毒处理4和24 h,活化条件下用CP染毒4 h,计数2000个细胞中含微核的细胞数,并进行卡方检验。在MLA中,小鼠淋巴瘤细胞经清除自发突变后,非活化条件下用MMC、活化条件下用CP分别染毒处理3 h,计算相对存活率（RS）、相对悬浮增长率（RSG）、相对总增长率（RTG）、平板效率PE0、PE2、突变率（MF）、小集落比例（SC）。2结果：Ames波动试验中SA和CP在各自试验条件下阳性孔数均较对照组显著增加（χ^2＞6.63,P＜0.01）,量效关系明显。CHL细胞体2外微核试验中,MMC和CP在各自试验条件下均引起微核率显著升高（χ^2＞6.63,P＜0.01）,量效关系明显。MLA中MMC和CP在各自＋/-试验条件下均引起L5178Y 3.7.2C-tk^＋/- 细胞的PE、RS、RSG和RTG呈剂量依赖性下降,MF呈剂量依赖性升高,高出溶剂对照的2倍以上。结论：此3种短期遗传毒性试验方法可互为补充、相互验证,其组合应用可提高检出化合物遗传毒性的准确性,有望得到进一步推广应用。     

赛替派诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中不同形态集落来源细胞的研究

背景与目的:研究赛替派转化人支气管上皮细胞株(Humanbronchialepithelialcellstrain2B,BEAS-2B)过程中两种不同形态集落来源的细胞株的细胞构成和成瘤性的变化情况。材料与方法:赛替派转化BEAS-2B细胞过程中产生两种形态学上差异明显的集落,对其分离培养,细胞建株,分别命名为BEAS-S(HumanbronchialepithelialcellstrainS)和BEAS-C(HumanbronchialepithelialcellstrainC)细胞,连续传代,同时通过特异免疫细胞化学染色了解细胞构成的改变,结合细胞凝集性和锚着独立性的变化进行分析。结果:BEAS-C细胞随着传代,基底细胞标志物质蛋白34βE12表达增强,同时其细胞凝集性和成瘤性也增强;而BEAS-2B和BEAS-S细胞的细胞构成及成瘤性在传代过程中改变不明显。结论:基底细胞可能是人支气管上皮细胞恶性转化的干细胞,同时两种细胞集落形态的差异性也为人源细胞转化的形态学研究提供参考价值。     

国外药物毒理学发展趋势分析与展望

近年来国外药物毒理学发展迅速,在研究思路和观念、技术和手段、策略和方法上发生了巨大转变,其主要表现为：研究过程和实验操作逐步走向规范化、标准化;逐步采用体外筛选评价模型代替整体动物实验;在药物开发、申的、临床监测的各个环节发挥药物毒理学的主动指导作用;研究对象从患群体转向个体;基因技术全面进入药物毒理学各个研究领域;利用毒代动力和其他分子细胞生物学新的概念和方法研究药物毒性作用机制或进行药物毒性的风险评价。     

马兜铃酸致突变及致癌性研究进展*

“中草药肾病”事件之后，马兜铃酸肾毒性受到了全球学者的关注，而随着马兜铃酸肾病患者伴发泌尿系统肿瘤报道的日渐增多，阐明其致突变和致癌机制也成为其毒性研究的另一焦点，马兜铃酸Ⅰ和Ⅱ是马兜铃酸的2种主要成分，为明确的遗传毒性致突变物，现重点围绕其在体内的代谢活化过程、DNA加合物形成、分布特点及导致癌基因突变等阐述马兜铃酸致突变致癌分子机制的研究现状。     

药物毒理学研究新进展

药物毒理学是现代毒理学中研究药物的毒副作用机制、评价新药安全性的分支学科,主要目的在于指导药物合成和临床合理用药,降低药物的毒副作用及减少因毒性导致的新药研发失败。现就药物毒理学研究的新思路、发现毒理学的发展和全程式新药安全性研究评价新模式的特征以及药物毒理学研究的新方法作简要阐述。     

大黄中游离蒽醌对HK-2细胞系的毒性作用研究*

目的:观察大黄中大黄素等游离蒽醌对人近曲小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用及毒性作用机制。方法:体外培养HK-2细胞,利用MTT法评价大黄素等对HK-2细胞的增殖抑制作用,观察不同浓度药物对细胞形态和LDH释放率的影响,利用TUNEL染色检测大黄素等对HK-2细胞凋亡的影响,细胞线粒体膜电位和活性氧(ROS)生成的检测采用流式细胞技术,分别以DCFH-DA和罗丹明-123为荧光探针。结果:大黄素、大黄酸和大黄素甲醚作用HK-2细胞48 h后,明显抑制细胞增殖,其IC50值分别为130.65,82.97和76.02μmol.L-1,芦荟大黄素轻微抑制HK-2细胞增殖,大黄酚作用不明显。大黄素、大黄酸和大黄素甲醚能够导致细胞皱缩和空泡化,LDH漏出率增加以及促使细胞凋亡,3种蒽醌均使细胞的线粒体膜电位降低,而ROS生成减少,80μmol.L-1大黄素预处理细胞能够明显降低H2O2引起的ROS升高。结论:大黄素、大黄酸和大黄素甲醚可能是大黄中主要的肾毒性物质,能够引起HK-2细胞的凋亡,其机制可能涉及线粒体膜电位途径,但是不包括ROS生成途径。     

用血红蛋白-酶释放比色法测定巨噬细胞的吞噬功能

作者建立了一种在微量板上直接用邻苯二胺氧化比色法定量测定腹腔巨噬细胞吞噬功能的方法。以抗体包被绵羊红细胞为吞噬靶细胞。对该方法的原理、巨噬细胞吞噬动力学及抗体稀释度的影响等进行了研究;并与鸡红细胞吞噬试验（显微镜计数法）作了对比。     

二乙基亚硝胺对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

为研究二乙基亚硝胺(DEN)对淋巴细胞增殖的影响,来用噻唑兰(MTT)比色法测定了静止及激活的T及B淋巴细胞的增殖率.结果表明DEN灌胃染毒1周(2.5,5和10mg/kg)可抑制由ConA和PHA所诱导的脾T细胞增殖;其抑制率为ConA7%～49%,PHA 8%～48%,DEN对脂多糖诱导的B淋巴细胞增殖呈双向性,即低浓度时增强,高浓度时抑制增殖.绿茶水溶性提取物可拮抗或阻断DEN对淋巴细胞增殖的抑制作用.     

高通量测序和实时荧光定量PCR分析何首乌肝损伤与肠道微生物组的关系

目的采用Illumina高通量测序技术和实时荧光定量PCR（Real-Time PCR,RT-PCR）法研究何首乌（PM）致肝损伤与肠道微生物组间的关系,并验证两种定量方法的一致性。方法雄性SD大鼠随机分为5组：对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+对乙酰氨基酚（APAP）组、PM组和LPS+PM组;大鼠尾iv给予4.0 mg/kg LPS建立肝损伤模型,各组相应每天1次ig给予0.625 g/kg APAP和12 g生药/kg PM,记录大鼠体质量;分别于造模后2、14 h、5和8 d,对大鼠粪便中细菌16SrRNA基因的V4高变区进行Illumina高通量测序,根据测序结果得出的差异物种,采用RT-PCR进行验证;取造模后8 d大鼠肝脏组织,HE染色,光学显微镜观察。结果大鼠肝脏病理学检查结果显示,与对照组比较,LPS组大鼠存在肉芽肿,PM组无异常病变;与LPS组比较,LPS+PM大鼠肝细胞出现轻度变性和微小肉芽肿增多,LPS+APAP组可见微小肉芽肿和淋巴细胞浸润。Illumina高通量测序结果提示,与对照组比较,随着PM给药次数增加,单独给予PM的大鼠肠道微生物无显著变化;LPS+PM组表现为肠球菌科和毛螺旋菌科细菌逐渐增加,乳杆菌属细菌减少,且与LPS组有差异;RT-PCR结果显示,与对照组比较,随着PM给药次数的增加,单独给予PM的大鼠肠道微生物无显著变化;LPS+PM组肠球菌科、毛螺旋菌科细菌数显著增加（P<0.05）,乳杆菌属细菌数显著减少（P<0.05）,且与LPS组比较有显著差异。结论 PM肝损伤大鼠存在不同程度的菌群失衡,且Illumina高通量测序和RT-PCR检测结果具有良好的一致性,但Illumina高通量测序技术可获得更多的微生物信息,更具优势。