华支睾吸虫溶血磷脂酶基因的识别、克隆和序列分析

目的　筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并将所发现的华支睾吸虫溶血磷脂酶 (csLysoPLAH)基因编码区克隆到原核表达质粒PGEX 4T 1和真核表达质粒pcDNA3上 ,为进一步研究其功能奠定基础。　方法　对华支睾吸虫cDNA文库进行随机筛选并测序 ,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifsan、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析。根据PGEX 4T 1和 pcDNA3上的克隆位点及所发现的csLysoPLAHcDNA编码序列设计引物 ,进行PCR扩增 ,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX 4T 1和真核表达载体 pcDNA3上。构建的PGEX 4T 1 csLysoPLAH、pcDNA3 csLysoPLAH重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。　结果　发现csLysoPLAH基因 ,完整阅读框含 70 8个碱基 ,编码 2 3 5个氨基酸 ,理论分子质量为 2 5 .2 62 8ku ,理论pI为6.0 3。序列分析表明 ,csLysoPLAH编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,csLysoPLAH具有磷脂酶 /羧酸酯酶保守功能域和完整的脂酶保守功能域 ,并含有丝氨酸酯酶特征性的标签肽 (即GXSXG)。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。　结论　发现华支睾吸虫溶血磷脂酶基因 ,并成功构建原核和真核重组表达质粒。     

造血干细胞移植后肝静脉闭塞病的诊治进展

肝静脉闭塞病(VOD)是移植早期出现的严重并发症,早期的诊断治疗对高危患者非常重要。既往人们的诊断主要局限于临床和影像学,近几年来,血液学的检查尤其是纤溶酶原活化物抑制物-1和透明质酸对于VOD的早期诊断,低分子量肝素对VOD的预防性应用与去纤苷对重度VOD的治疗日益受到重视。本文主要就当前VOD的诊断、预防和治疗的新进展进行了综合的论述。     

达格列净干预不同时长对2型糖尿病小鼠胰岛β细胞保护作用的研究

目的探讨达格列净干预不同时长对db/db小鼠胰岛β细胞功能和形态学的影响。方法 20只13周龄雄性db/db小鼠分为4组, 分别给予达格列净(1 mg/kg)或溶媒(水)每日灌胃干预6或12周, 即对照干预6周组、达格列净干预6周组、对照干预12周组和达格列净干预12周组, 每组5只小鼠。检测小鼠体重、空腹血糖、口服葡萄糖耐量试验血糖、空腹血浆胰岛素水平等代谢指标。采用免疫荧光染色分析β细胞面积及其占比。组间比较采用独立样本t检验。结果与各自对照组相比, 不同时长的达格列净干预组小鼠体重差异均无统计学意义(P>0.05), 但空腹血糖和口服葡萄糖耐量负荷后血糖水平均显著降低(P<0.05), 且达格列净干预12周组比达格列净干预6周组效果更显著。与对照干预12周组相比, 达格列净干预12周组显著升高空腹血浆胰岛素水平[分别为(21.60±2.76)和(7.03±1.80)ng/ml, P=0.004], 但达格列净干预6周组则未见该效应。免疫荧光染色分析显示, 与对照组相比, 达格列净干预12周组显著增加β细胞面积[分别为(14 554.5±1 426.5)和(11 165...     

亚临床甲状腺功能异常与心血管疾病的关系

临床研究显示,亚临床甲状腺功能异常与心血管疾病之间存在密切的关系.亚临床甲状腺功能减退通常伴有血脂异常、高凝状态、纤维蛋白溶解活性减低等心血管疾病危险因素,其与动脉粥样硬化、冠心病和心血管死亡的风险显著相关.另一方面,亚临床甲状腺功能亢进与心房颤动发生风险显著相关,但与心血管死亡风险的相关性尚不清楚.对于亚临床甲状腺功能异常进行治疗是否能够带来心血管获益,目前尚无确切结论.     

一株新的急性髓系白血病细胞系SH-2的建立及其鉴定

Objective To establish and characterize a novel human myeloid leukemia cell line SH-2. Methods Bone marrow mononuclear cells(BMMNC) isolated from a AML-M2 patient, who failed to ob-tain complete remission after chemotherapy and allogenic bone marrow transplantation were passed in a long term IMDM culture medium supplemented with 20% fetal calf serum. Stromal cells were retained and rh-IL-3was added in the culture system. A new human myeloid leukemia cell line SH-2 was successfully established with a cytogeuetic characteristics of a loss of Y chromosome(- Y), a derivative chromosome 16 resulting from unbalanced translocation between chromosome 16 and 17, monosome 17, trisomy 19 and p53 alteration. Vari-ous methods were employed to characterize SH-2 cell line. Results SH-2 cells has been maintained without cytokine and stromal cells for more than 3 years without EB virus and mycoplasma contamination. SH-2 cells had the basically same morphological, immunophenotypic and cytogenetic features as the patient' s leukemia cells did, such as myeloid morphology, an immunophenotype of CD13+ , CD33+ , CD56+ , CD16/56+ and a hypodiploid karyotype of 45, X, - Y, der(16) t(16;17) (q24;q12) , - 17, + 19, which were gradually de-creased and replaced by the near-tetraploid cells with a karyotype of 73 - 102 (80), XX, - Y, - Y, del (lq31) ×2, der(16)t(16;17) (q24;q12) ×2, - 17, - 17, + 19, + 19. FISH and multiple FISH delineated all the abnormalities and revealed a loss of one p53 allele due to monosomy 17. DNA direct sequencing detec-ted a point mutation of CAG to CAT at codon 576 of exon 5 in another p53 allele. RT-PCR showed that SH-2 cells expressed apoptosis-related genes (bcl-2, Fas, GST- π and p21) rather than MDR-related genes. Short tandem repeat PCR provided powerful evidence for the derivation of SH-2 cell line from the patient' s leukemia cells. SH-2 cells had certain colony formation and tumorigenic capacities in nude and SCID mice. Conclu-sion SH-2 is a new myeloid leukemia cell line with a unique biology background, and will provide a useful tool for leukemia research.     

间充质干细胞治疗急慢性移植物抗宿主病的研究进展

间充质干细胞（MSCs）是具有自我更新和多向分化潜能的非造血成体干细胞,具有组织修复、支持造血、免疫调节等多种功能。实验及临床研究显示,在异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）中,应用MSCs预防和治疗移植物抗宿主病（GVHD）效果显著,安全可靠。本文就MSCs在治疗急、慢性GVHD方面的研究进展作一综述。     

脂多糖对孤独症大鼠行为学发育的影响及病理机制

目的：探讨发育早期感染对孤独症症状的影响,建立丙戊酸钠SD大鼠孤独症样模型,分析发育早期脂多糖暴露对其孤独症样行为的影响及病理机制。方法：随机选取9只SD孕鼠中的6只于孕12.5天给予丙戊酸钠600mg/kg腹腔注射建立孤独症模型,另外3只孕鼠作为对照组,给予生理盐水腹腔注射。模型组孕鼠产仔后,第20天随机挑选一半仔鼠作为丙戊酸钠加脂多糖组,给予脂多糖2mg/kg腹腔注射,另一半生理盐水腹腔注射作为丙戊酸钠组,注射生理盐水的孕鼠的子代为对照组。采用随机数字法在3组中随机选取仔鼠各8只,在生后43天进行旷场实验、埋珠实验、Y型迷宫实验和三箱社交实验。生后50天3组仔鼠额叶脑组织进行HE染色和透射电镜病理检测,海马组织进行HE染色。结果：旷场实验、埋珠实验、Y型迷宫实验、三箱实验结果显示,丙戊酸钠组较对照组的活动总距离长、跨格子数多、埋珠个数多、关闭臂进入次数少、关闭臂探索路程少、关闭臂探索时间少、社交性和社交偏好性降低（P<0.05）;丙戊酸钠加脂多糖组较丙戊酸钠组的活动总距离长、跨格子数多、埋珠个数多、关闭臂进入次数少、关闭臂探索路程少、社交性和社交偏好性降低（P<0.05...     

单倍体相合骨髓移植小鼠GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体克隆谱型的分子特征

本课题通过单倍体相合骨髓移植小鼠模型,研究GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体谱型特点,以及GVHD靶器官克隆性T细胞的TCRBV CDR3分子特征。建立单倍体相合异基因移植小鼠GVHD模型,应用RT—PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、回肠等组织移植前后TCRBV20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质。对于寡克隆表达的TCRBV家族在长泳道测序胶上电泳,对部分单克隆条带测序,得到一组肝脏、皮肤、回肠在移植后不同时间与GVHD相关的TCRBV CDR3的分子。结果表明：单倍体相合骨髓移植小鼠在移植后14天临床开始出现典型的GVHD表现。移植后受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞。肝脏、皮肤、回肠等GVHD的靶器官中部分克隆性增生的T细胞TCRBV CDR3分子存在一些C’末端保守的CDR3氨基酸基序（motif）。结论：单倍体相合异基因移植后发生GVHD的组织可出现T细胞单克隆及寡克隆增生,GVHD相关T细胞克隆共用一些保守的TCRBV CDR3基序,识别类似的抗原。     

8例不随意运动型脑瘫儿童感染后严重扭转痉挛护理

<正>不随意运动型脑性瘫痪主要是由于早产或核黄疸导致一种严重的神经残疾,临床表现难以控制的手足徐动症状,给日常生活和护理带来极大的挑战。急性扭转痉挛,又称肌张力风暴,是一组难以控制的肌张力障碍性疾病[1]。不随意运动型脑瘫儿童,在流行性感冒等感染性疾病时,可出现肌严重的扭转痉挛持续状态。我科2008年6月~2013年10月收治4732例脑瘫儿童中,8例感染后出现了严重的扭转痉挛。经过心理护理、康复护理、疼痛管理以及睡眠管理等综合护理措施,取得了显著的改善,现报告如下。     

异基因骨髓移植和非清髓性干细胞移植嵌合形成过程的比较

目的 研究异基因骨髓移植（allo-BMT）和非清髓性干细胞移植（NST）两种移植方式在供体细胞嵌合状态的形成及转归上的差异,探讨早期供体细胞植入的关键因素。方法 对20例接受allo-BMT和18例NST的患者进行回顾性比较,研究两组患者疾病类型、干细胞来源、预处理方案和移植物抗宿主病预防方案。用复合扩增荧光标记STR-PCR结合毛细管电泳方法对移植后＋7、＋14、＋21d,＋1、＋3、＋6、＋9、＋12个月的嵌合体进行动态检测。结果 （1）NST组在受体年龄、单个核细胞（MNC）、CD34^＋及T细胞数量上均明显高于BMT组,造血重建方面,中性粒细胞绝对值恢复时间与BMT组无差别,但血小板恢复明显早于BMT组。（2）NST组患者供体细胞完全嵌合状态（FDC）的建立比BMT组早（1个月vs 3个月）,移植后早期（＋1个月）FDC比例亦明显高于BMT组（38．9％vs 20%）,而混合嵌合状态（MC）的发生率明显低于BMT组（61．2％ vs 80％）,移植1个月后各时间段两组在嵌合体形成上均无显著性差别。（3）氟达拉滨为基础的NST预处理方案与标准预处理方案相比并未延迟供体细胞的植入。（4）NST组慢性移植物抗宿主病的发生率明显高于BMT组（80％vs 50%,P〈0．01）,与NST组输入高剂量的CD34^＋细胞相关。结论 在供体细胞早期植入和嵌合体形成的过程中,移植物中造血干细胞和T细胞数量至关重要,并可能起决定性作用。