重组腺相关病毒载体介导成纤维细胞生长因子2基因诱导缺血心肌血管新生

探讨重组 2型腺相关病毒载体介导 2型成纤维细胞生长因子基因诱导家兔缺血心肌血管生成的作用。实验对象为 2 0只新西兰兔 ,手术建立心肌缺血模型后随机分为成纤维细胞生长因子基因治疗组和对照组 ,分别向缺血区域心肌注射成纤维细胞生长因子腺相关病毒或磷酸盐缓冲液。 4周后取心肌及肝、肾等器官组织标本 ,采用逆转录聚合酶链反应检测目的基因mRNA的表达 ;制作组织学切片以观察组织病理改变 ,于高倍镜下计数缺血区域微血管数目。结果发现转染的 2型成纤维细胞生长因子基因在缺血心肌中有表达 ,成纤维细胞生长因子基因治疗组缺血区域单个高倍视野内的微血管数为 12 .0± 1.4条 ,对照组为 4 .5± 1.5条 ,二者差异具有显著性 (P <0 .0 1)。 2型成纤维细胞生长因子基因治疗组的肝脏、肾脏、脾脏、角膜和睾丸标本中均未发现 2型成纤维细胞生长因子基因的表达 ,病理检查也未发现组织结构异常。说明腺相关病毒载体介导的 2型成纤维细胞生长因子基因可以有效地转染入家兔缺血心肌 ,并具有明显的诱导缺血心肌血管生成的作用 ,且基因表达仅限于心肌。     

关节乐胶囊质量研究

目的 探讨建立控制关节乐胶囊质量的方法.方法 采用薄层色谱法(TLC)对中药川芎和赤芍进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)对补骨脂素和异补骨脂素进行含量测定.结果 TLC特征斑点明显、专属性强.补骨脂素在0.008 2～0.205 0 mg/ml(r=0.999 8)、异补骨脂素在0.013 0～0.325 0 mg/ml(r=0.999 7)的检测浓度间具有良好的线性关系,平均回收率分别为93.21%(RSD=4.039%,n＝6),98.67%(RSD=1.520%,n＝6).结论 所建标准可用于关节乐胶囊的质量控制.     

间接脑血管重建术治疗烟雾病12例临床分析

目的间接脑血管重建术治疗烟雾病。方法12例经DSA证实为烟雾病患者,手术采用脑-硬脑膜-动脉-肌肉-血管融合敷贴术(EDAMS)进行治疗。结果12例患者随访6~18个月,平均13.5个月,均未再发生脑缺血或脑出血。9例术前有神经功能障碍的患者术后恢复正常。复查DSA或MRA,除2例术前相同外,其余10例颅底异常血管网不同程度减少并伴侧支血管形成(改善率达83.33%)。结论EDAMS治疗烟雾病安全、近期有效。     

新生儿水平横胃45例X线诊断

水平横胃为新生儿期呕吐的常见原因之一,其临床上与胃扭转相似,X线表现也与器官轴型胃扭转相似。本文收集我院2006年1月至2008年3月病史完整的水平横胃患者45例的资料,对其X线表现进行回顾性分析,以帮助基层医生提高对水平横胃的X线诊断与鉴别诊断能力。     

柞蚕杀菌肽对人肝癌细胞的损伤作用

对昆虫免疫防御的研究表明，给昆虫以非特异性的刺激会诱导昆虫产生包括杀菌肽、抗菌蛋白、溶菌酶等在内的多种免疫活性蛋白．作为其中的主要成份，杀菌肽最先从天蚕中分离纯化并命名。这是一类分子量4000，长33～39个氨基酸残基，富含碱性氨基酸．对热稳定的小肽；不仅可以杀伤革兰氏阳性阴性菌、病毒、     

介导RNAi的tRNAVal启动子质粒载体的建立

目的 构建以tRNA^Val启动子控制shRNA转录引发RNAi的质粒载体。方法 从人基因组中用PCR方法扩增出tRNA^Val基因片段，人工突变去除3′末端数个碱基，连以Linker序列，用此经过改造的tRNA^Val启动子，构建控制针对荧光素酶的shRNA转录载体pUC-tRNA^Val lueRi，与pMAMneoLuc共转染BHK-21细胞，观察对荧光素酶表达的影响。结果 pUC-tRNA^Val lucRi可以高效特异性抑制pMAMneoLuc中荧光素酶的表达，效率达97．1％～99．5％。结论 tRNA^Val启动子载体可以高效转录shRNA，引发哺乳动物细胞RNAi现象。     

逆转录病毒载体转移HyTK基因联合应用Ganciclovir对瘢痕成纤维细胞的体外杀伤作用

逆转录病毒载体转移ＨｙＴＫ基因联合应用Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ对瘢痕成纤维细胞的体外杀伤作用柯正，伍志坚，吴小兵，赵健，韩虹，时安平，彭朝晖１型单纯疤疹病毒胸腺激酶基因（ＨＳＶ－１ＴＫ）和潮霉素磷酸转移酶基因（Ｈｙ）相融合的ＨｙＴＫ基因克隆至逆转录病毒...     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒的构建及鉴定

目的：构建Ad5F35-LMP2重组腺病毒.方法：分别以EcoR Ⅰ单酶切pSH-LMP2和pDC316,将LMP2目的基因片段和线性化的pDC3l6连接,克隆构建pDC3l6-LMP2,以PCR和酶切的方法鉴定插入方向正确.pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架pBHG-fiber5/35共转染293细胞构建重组腺病毒Ad5F35-LMP2,PCR及间接免疫荧光进行鉴定.结果：经PCR和酶切鉴定证实pDC3l6-LMP2构建成功.pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实重组腺病毒Ad5F35-LMP2构建完成,间接免疫荧光鉴定LMP2蛋白能在细胞膜上有效表达.结论：本实验成功构建了含EB病毒LMP2全序列的Ad5F35-LMP2重组腺病毒,为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用Ad5F35-LMP2重组腺病毒对鼻咽癌患者进行基因免疫治疗奠定了基础.     

一种通过表皮生长因子受体介导的基因转移系统

目的发展一种针对表皮生长因子过量表达的肿瘤细胞的基因转移系统。方法人工合成了一种Ｎ端含多个赖氨酸残基，Ｃ端为人表皮生长因子（ＥＧＦ）的受体结合域的３３肽，此合成肽（Ｋ９Ｅ肽）既具有ＤＮＡ结合活性，又能为细胞表面ＥＧＦ受体所识别并内在化。Ｋ９Ｅ肽与萤火虫荧光素酶表达质粒ｐＥＢｌｕｃ按一定比例结合形成核酸复合物，以此为基础，利用受体介导的基因转移技术，组建了外源基因转移系统。结果核酸复合物直接加入于类上皮癌细胞Ａ４３１的培养液中，４８小时后可从细胞裂解液中测出荧光素酶的显著表达。结论该系统可特异性地将外源基因导入ＥＧＦ受体过量表达的肿瘤细胞。