不同光强对川贝母生长发育和总生物碱的影响

目的 研究不同光照强度处理对川贝母生长发育、生理指标和鳞茎产量及总生物碱量等的影响,为川贝母的合理栽培生产提供一定理论依据.方法 用人工气候箱控制光强度,观察不同光照强度(3 000、6 000、9 000和12 000 lx)下川贝母的生长发育变化,检测其叶片叶绿素、可溶性糖、丙二醛和脯氨酸量,并测定鳞茎产量以及总生物碱的量.结果 6 000 lx贝母生长发育较好,干物质积累较多,总生物碱量也较高.光照强度过高或过低,干物质量积累量均大幅度降低.不同光照强度下可溶性糖、丙二醛、脯氨酸量差异均不显著.结论 6 000 lx的光照强度较适宜川贝母的生长.     

龙胆科藏药“蒂达”类的DNA条形码鉴定研究

应用ITS2序列对多基原龙胆科藏药"蒂达"进行DNA条形码鉴定,为保障该类药材的准确鉴定及其临床用药安全提供科学依据。以青藏高原地区龙胆科中獐牙菜属Swertia、花锚属Halenia、扁蕾属Gentianopsis、喉毛花属Comastoma、肋柱花属Lomatogonium 5个属,共计13个种,151份实验样本为研究对象,提取"蒂达"药材的基因组DNA、扩增ITS2序列并双向测序。采用Codon Code Aligner V3.7.1对测序峰图进行校对拼接。ITS2序列经比对后长度为231 bp,13个种共31种单倍型,G+C平均含量达61.40%。最小距离法和NJ树结果显示,龙胆科藏药"蒂达"类11个种能够各自聚为一支相互区分,并表现出良好的单系性,二叶獐牙菜和华北獐牙菜不能准确鉴定。ITS2序列可准确、稳定的鉴别龙胆科藏药"蒂达"类药材,从而为进一步构建复杂多基原藏药品种真伪鉴别方法提供了科学参考。     

高温促进黄花蒿中青蒿素生物合成的机制研究

黄花蒿Artemisia annua又名青蒿,是中国传统中药,其有效成分青蒿素是一种含过氧桥基团结构的倍半萜内酯类化合物,是一种能有效抗疟的药物。很多理化因子例如盐分、水分、光照、植物激素等均能诱导黄花蒿中次生代谢产物青蒿素的合成,温度作为一种重要的生长因素对青蒿素的合成也有极大地影响。该文旨在研究高温诱导对黄花蒿中青蒿素生物合成的影响。将黄花蒿幼苗放置在25,40℃条件下,分别在0,3,12,36 h后取样,利用液相色谱-质谱联用法测定各个样品中的青蒿素含量;提取样品的总RNA,进行转录组测序并且利用实时荧光定量PCR技术定量分析青蒿素合成途径及竞争途经关键酶基因的表达。结果显示40℃处理3,12,36 h后,青蒿素质量分数分别提高20%,42%,68%;FDS,ALDH1,CYP71AV1和ADS的表达量分别上调4. 3,3. 3,2. 5,1. 9倍,SQS和BPS的表达量下调了37%和90%。综上,高温可以通过促进青蒿素合成途径合成酶基因表达量,并且抑制青蒿素竞争途径合成酶基因的表达量从而促进青蒿素的生物合成。     

三七PnUGT1基因的全长cDNA克隆和生物信息学分析

本研究通过对三七的转录组高通量测序结果进行分析,采用5’-RACE和RT-PCR方法,对其中一条可能参与三萜皂苷合成的UDP-糖基转移酶基因转录本(Pn02086)进行全长克隆,预测了该基因编码蛋白的理化性质、保守结构域等,并对其进行了进化分析。通过全长克隆,得到一条开放阅读框为1 488 bp的cDNA序列,命名为PnUGT1,GenBank登录号JX018210。该基因编码495个氨基酸,蛋白分子量为55.453 kD,属于不稳定蛋白。二级结构中α-螺旋占36.16%、β-折叠占11.31%、无规卷曲占52.53%。InterProScan预测该蛋白具有7个保守结构域,包括在植物次生代谢产物中相关糖基转移酶特有的PSPG保守基序。该蛋白不具有信号肽和跨膜区,最有可能定位在细胞质中。序列比对和进化关系分析表明,该蛋白和蒺藜苜蓿三萜合成相关的UDP-糖基转移酶AAW56092的亲缘关系较近,PSPG保守区域的相似性为66%。该基因在三七叶中表达量较在花、茎和根中的表达量高。推测PnUGT1基因可能参与了三七皂苷的合成。     

银桑菊固体饮料的HPLC指纹图谱

目的:银桑菊固体饮料的质量标准,建立其HPLC指纹图谱。方法:采用HPLC法对10批银桑菊固体饮料样品进行分析,以Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长268 nm,流速1.0 m L·min-1,柱温35℃,进样量10μL;利用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2.0版)标定共有峰和相似度评价。结果:建立了银桑菊固体饮料的HPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,10批样品的相似度均0.9,并指认了3个峰分别为绿原酸、甘草苷、木犀草苷。结论:该法操作简便可靠,所建立的HPLC指纹图谱重复性良好,可用于银桑菊固体饮料的质量评价。     

木香、川木香、土木香、青木香和红木香药材的ITS2条形码分子鉴定

通过分析木香、川木香、土木香、青木香、红木香药材的ITS2（internal transcribed spacer 2）条形码序列,探讨木香类药材鉴定新方法。对60份样品提取基因组DNA,PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,采用 MEGA5.0 软件进行序列比对,计算种内和种间遗传距离（K2P）,构建邻接树（neighbor-joing tree,NJ Tree）。结果表明,无论是菊科的木香、川木香、土木香,还是马兜铃科的青木香和五味子科的红木香,ITS2序列种内变异均小于种间变异,ITS2序列所有单倍型比对后长度为272 bp,变异位点达到162个;遗传距离显示物种种内平均K2P远远小于种间平均K2P;NJ树结果显示木香、川木香、土木香、青木香和红木香药材可明显区分,且能鉴别川木香的2个基原物种。因此,ITS2序列可用于鉴定木香、川木香、土木香、青木香、红木香药材,为临床安全用药提供依据。     

258例儿童先天性十二指肠梗阻诊治的回顾性分析

目的：收集258例先天性十二指肠梗阻的病例资料,分析并总结该病在儿童不同年龄段的临床特点和诊治要点。方法：收集我院2003年至2012年间收治的258例先天性十二指肠梗阻病例,对临床病例资料进行分组回顾性分析,总结临床特点及诊治要点。结果：（1）先天性十二指肠梗阻多在新生儿期发病（ ?字2=10.658 3,P=0.005）;（2）胆汁性呕吐（76.36%）是本病最突出的临床症状（?字2=37.482 1,P=0.000）;（3）腹部平片、腹部超声多普勒及上消化道造影对本组病例的阳性发现率分别为78.57%、73.71%和100%,有显著性差异（P=0.000）;（4）先天性肠旋转不良、十二指肠闭锁或狭窄、环状胰腺是先天性十二指肠梗阻最常见的病因;先天性十二指肠梗阻一经确诊,应尽早手术,预后好（本组治愈率96.88%）。结论：先天性十二指肠梗阻诊断成立应尽早手术,预后多较好。     

宫颈小细胞神经内分泌癌临床病理分析

目的:探讨宫颈小细胞神经内分泌癌(small cell neuroendocrine carcinoma of the cervix,SCNCC)的临床病理和免疫表型。方法:复习4例SCNCC的临床病理资料,并将其组织学特征、免疫表型和预后与宫颈鳞癌进行比较。结果:SCNCC的发病年龄平均38.5岁,多表现为接触性出血或阴道不规则流血、排液。组织学特征为肿瘤细胞小而圆,胞质少,核染色质深染,核仁不明显,分裂象多见,可见坏死,肿瘤细胞呈片状浸润。免疫表型显示4例均表达至少一种神经内分泌标志。4例SCNCC的发病年龄低于宫颈鳞癌,淋巴结转移率高于宫颈鳞癌,近期随访结果显示预后较宫颈鳞癌差。结论:宫颈小细胞神经内分泌癌是一种少见的高度恶性肿瘤,具有独特的病理形态特征,预后较差。免疫组化染色有助于确诊。     

小儿嵌顿性腹股沟斜疝143例的治疗体会

目的　探讨小儿嵌顿性腹股沟斜疝的治疗体会。方法　分析 1993～ 2 0 0 2年我院收治的嵌顿性腹股沟斜疝 14 3例。结果　本组 14 3例中手法复位者 2 8例 (占 2 0 % ) ,手术探查者 115例 (占 80 % ) ,其中疝内容物为肠管者 10 3例 (占 89% )。手法复位后肠穿孔者 3例 (占 2 % ,均为手法复位后 9h内出现气腹症 ) ,术后应激性溃疡者 1例 ,术后中毒性肠麻痹 1例 ,本组患儿均治愈出院。结论　对于小儿嵌顿性腹股沟疝 ,应准确判断病情 ,如能手法复位可采取复位处理 ,手法复位成功后应观察 6～ 8h ,防止肠穿孔的发生 ,以后再择期手术治疗。如不能手法复位 ,积极手术探查 ,术中认真仔细 ,术后多能取得好的疗效。对于 <1月的小婴儿 ,以积极手术探查为首选治疗方案 ,不要盲目试行手法复位     

192例0～3个月先天性肠无神经节细胞症婴儿临床分析

目的：探讨钙视网膜蛋白在3个月内婴儿先天性肠无神经节细胞症（HD）的临床诊断价值;对采用经肛门直肠结肠斜形切除吻合术治疗3个月内婴儿HD进行随访及疗效评价。方法2008年1月至2014年10月该院确诊并行了经肛门直肠结肠切除斜形吻合术或肠造瘘术治疗3个月内婴儿HD 192例,收集其病案资料,并行根治术中期随访,评价其肛直肠功能及生活质量。结果192例 HD患儿中,139例行经肛门直肠结肠切除斜形吻合术,53例行肠造瘘术。术前诊断依据典型病史、体格检查及辅助检查,包括钡剂灌肠、直肠肛管测压和直肠吸引活检钙视网膜蛋白免疫组织化学染色,阳性率分别为80．1％、92．1％、97．9％。66例（60．5％）获中期随访,小肠结肠炎2例（3．0％）,污粪2例（3．0％）,无便秘复发、大小便失禁、肛门狭窄,男性患儿均有阴茎勃起现象,生长发育与正常婴幼儿相当。门诊随访25例,生化检查均在正常范围,15例钡剂灌肠检查显示肠道形态恢复良好;直肠肛管测压11例,10例（90．9％）肛门松弛反射恢复正常,1例未见松弛反射。结论钙视网膜蛋白免疫组织化学染色检查可作为3月内婴儿 HD术前诊断的金标准;经肛门直肠结肠斜形切除吻合术设计符合生理,并发症少,中期疗效满意,适合0～3个月小婴儿根治术。