培养大鼠海马胆囊收缩素阳性神经元的电生理学特性

目的 探索海马内胆囊收缩素(CCK) 阳性（CCK⁺ ）神经元的电生理学特性。方法 用整合有CCK启动子-绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒对培养海马CCK⁺神经元进行标记,应用全细胞膜片钳技术对标记CCK⁺神经元的电生理学特性进行研究。结果 CCK⁺神经元的胞体长径为(22.85±0.77)μm,短径为(16.21±0.42)μm (n=20),静息电位 (RMP)为(-55.90±1.30)mV,膜电容 (Cm)为(45.77±2.06)pF,膜阻抗 (Rm)为(711.00±46.69)MΩ; CCK+神经元500 ms内100 pA去极化电流诱发动作电位的发生频率为(26.17±3.41)Hz (n=12); CCK⁺神经元的自发抑制性突触后电流的发生频率［(5.26±0.71)Hz, n=7］显著高于自发兴奋性突触后电流的发生频率［(3.24±0.62)Hz, n=6］。 结论 CCK⁺神经元的相关电生理学特征可能与其在中枢神经系统内重要的调节功能相关。     

骨髓增生异常综合征患者外周血Th22细胞水平的变化及意义

目的:研究Th22细胞在骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中的表达水平,并探讨其意义.方法:①用流式细胞术分别检测MDS较高危组、较低危组及正常对照组外周血中Th22细胞所占比例.②用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测各组外周血中IL-22、TGF-β、TNF-α、IL-6的表达水平.③用半定量RT-PCR分别检测各组外周血中Th22细胞的相关转录因子IL-22 mRNA的表达水平,并逐层分析比较.结果:MDS较高危组、较低危组Th22细胞比例、IL-22、TNF-α、IL-6、TGF-β、IL-22 mRNA的表达水平分别为(0.53±0.13)％、(13.51±3.87) ng/L、(146.74±29.74) ng/L、(77.58±16.23) ng/L、(5.21±1.65)ng/L、0.29±0.06和(0.85±0.21)％、(16.13±4.82) ng/L、(182.34±37.55) ng/L、(95.62±20.28) ng/L、(7.46±2.17) ng/L、0.38 ±0.07,均低于正常对照组的(1.24±0.31)％、(19.72±6.55) ng/L、(238.32±50.41) ng/L、(137.95 ±.27.08) ng/L、(9.65±2.78) ng/L、0.49±0.09,差异有统计学意义(P＜0.05),MDS较低危组Th22细胞比例、IL-22、TNF-d、IL-6、TGF-β、IL-22 mRNA的表达水平均高于较高危组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MDS患者体内Th22细胞数量减少,可能与MDS的发生发展呈负相关,提示MDS患者体内TNF-α、IL-6的表达减低及负向免疫细胞增多可能抑制Th22细胞的分化发育.     

下腰椎L4/5与L5/S1节段Coflex动态固定的有限元模型试验设计

目的 模拟临床手术,探讨Coflex动态稳定装置在下腰椎L5/S1退变性疾病中应用的可行性。方法 在第2代中国数字化人体“男性23号”数据集平台上,选取下腰椎骶骨数字模型,运用CAX相关软件建立下腰椎及Coflex应用于下腰椎的3组有限元模型(健康者下腰椎模型、Coflex固定L4/5节段模型及Coflex固定L5/S1节段模型);根据脊柱三柱加载理论和下腰椎生理运动,采用直立、前屈和后伸3种生理载荷分别进行计算、验证和对照分析。结果 建立了健康者下腰椎骶骨有限元模型、Coflex固定L4/5节段有限元对照模型、以及Coflex固定L5/S1节段有限元试验模型。根据3组有限元模型对照试验的稳定性和相容性等各种生物力学指标,发现两种动态内固定方式的下腰椎具有相近的生物力学效果。结论 本有限元模型对照试验的设计为研究下腰椎L5/S1节段Coflex动态固定手术提供了生物力学循证依据,对Coflex植入L5/S1节段这一新手术的临床应用具有指导意义。     

SH-SY5Y细胞凋亡过程中Cpne5蛋白表达的变化

目的探讨Cpne5蛋白在SH-SY5Y细胞凋亡中表达量的变化。方法显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测凋亡率,鉴定A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡及血清剥夺诱导凋亡的模型;免疫印迹法检测两种凋亡过程中Cpne5蛋白表达量的变化。结果 10μmol/L A23187诱导SH-SY5Y细胞24h,细胞出现皱缩、凋亡率增加。A23187诱导0.5h,Cpne5蛋白表达量即出现明显的上升,持续至12h;在24h时Cpne5蛋白表达量回落至诱导前水平。血清剥夺72h的SH-SY5Y细胞24份,凋亡率为23.2±2.1%,与对照组1.1±0.1%比,差异有统计学意义（P〈0.01）。免疫印迹结果表明,SH-SY5Y细胞分别经血清剥夺1h、6h、12h、24h、72h对Cpne5蛋白表达量无明显变化。结论 A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡早期Cpne5蛋白表达量有显著变化;提示Cpne5基因可能参与凋亡调控的钙信号通路。     

小鼠Cpne5基因mRNA水平的表达分布及其在胚胎的表达定位

目的明确小鼠Cpne5基因在mRNA水平的组织表达分布及其在胚胎的表达定位。方法提取新生、成年小鼠主要脏器的总RNA,利用RT-PCR法检测Cpne5 mRNA的表达量;合成针对Cpne5 mRNA的杂交探针,取不同胎龄胎鼠进行整体原位杂交。结果 Cpne5 mRNA在成年小鼠10种脏器组织均有不同程度的表达,以大脑,小脑,睾丸和肺脏表达量较高;而肝脏和肌肉未表达。新生小鼠9种脏器中,Cpne5表达量最高的是脑组织,眼和肾次之,肺和肝脏表达量很少。制备并评估Cpne5原杂探针的产量,SP6转录的反义探针浓度为100ng/μL,T7转录的正义探针浓度为10ng/μL,原位杂交结果显示Cpne5 mRNA主要表达于胎鼠的端脑、间脑、中脑及菱脑原节。结论在新生和成年小鼠的脑组织中Cpne5基因mRNA高水平表达,并在胎鼠发育过程中定位于胎脑。     

卵母细胞成熟障碍4例与同期卵母细胞大部分不成熟患者比较分析

目的分析4例体外受精-胚胎移植（IVF—ET）患者共8个辅助助孕周期,全部73个卵母细胞均处于GV、MetaphaseI期的可能原因。并与同期13例IVF—ET患者比较分析,比较组患者〉50％卵母细胞处于GV、MetaphaseI期。方法回顾分析本中心12年辅助助孕工作中出现的4例患者共8个周期所获卵母细胞均处于GV、MI的临床及实验室资料,并与同期13例超过50％卵母细胞处于GV、MI患者的临床、实验室资料进行比较。结果4例患者73个卵母细胞均处于GV或MI期,经体外成熟培养,24,48,72h仍无极体排出,停滞于GV、MI期。同期13例患者大部分卵母细胞不成熟,但体外培养后部分卵母细胞可进一步成熟,并可受精,获得妊娠。结论细胞和遗传机制引起卵母细胞成熟障碍,现有体外成熟培养方法尚无法促其成熟,目前赠卵是该类患者获得妊娠可供选择的助孕方法。但对于在控制性超促排卵中,出现大部分卵母细胞不成熟的患者可以通过延长促超排时间,增大hCG注射日卵泡直径,体外成熟培养等方法获得成熟的卵母细胞,获得妊娠。     

载碱性成纤维细胞生长因子温敏水凝胶对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化的作用研究

目的:实验合成载碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,研究其对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)成骨分化的作用.方法:制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶水凝胶,冻干后电子显微镜下观察其表征;检测水凝胶毒性;CCK-8法筛选出载bFGF温敏水凝胶促BMMSCs增殖最适浓度并用于后续研究;碱性磷酸酶染色、茜素红染色及钙结节半定量分析观察其对BMMSCs成骨向分化能力的作用;实时荧光定量PCR检测其对BMMSCs成骨相关基因表达的影响.结果:(1)成功制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,扫描电镜下冻干后的水凝胶孔径为20～80μm.(2)活/死细胞染色结果显示壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶具有良好的生物相容性.(3)载bFGF温敏水凝胶能显著促进BMMSCs增殖,并呈剂量依赖性,最适浓度为100 ng/mL(P<0.01).(4)载bFGF温敏水凝胶组碱性磷酸酶表达增多,钙结节形成增多(P<0.05).(5)载bFGF温敏水凝胶组成骨相关基因(ALP、BMP-2、Runx2)表达增高.结论:载bFGF温敏水凝胶能促进大鼠BMMSCs成骨分化.