半胱氨酰白三烯受体2多克隆抗体制备及其鉴定

目的:制备半胱氨酰白三烯受体2(CysLT_2)多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性及应用.方法:以KLH偶联的CysLT_2受体多肽免疫家兔制备抗体,用间接ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性;同时,以新制备的抗体进行Western blot和免疫组化,检测CysLT_2受体的组织表达.结果:ELISA测定显示,获得的家兔抗CysLT_2受体抗体的效价大于1/1 047 296,对CysLT_2受体的特异性强,对CysLT_1受体和GPR17基本无交叉反应.Western blot结果显示,CysLT_2受体在大鼠、小鼠肾、脑和肺中有较高的表达,其分子量在40 kD左右.免疫组化结果表明,CysLT_2受体主要表达在大鼠神经元,也表达在部分星形胶质细胞.结论:制备的CysLT_2受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blot和免疫组化检测的要求.     

咯利普兰逆转豚鼠离体气管对沙丁胺醇的耐受性

本研究目的旨在观察ＰＤＥＩＶ抑制剂咯利普兰对沙丁胺醇（ＳＢ）耐受性的影响。用豚鼠离体气管标本，预先接触ＳＢ１μｍｏｌ·Ｌ－１，１ｈ可使ＳＢ对抗乙酰甲胆碱气管收缩作用的剂量反应曲线右移５倍，最大松弛率下降３０％，形成ＳＢ气管松弛作用的耐受性。磷酸二酯酶（ＰＤＥ）ＩＶ抑制剂咯利普兰能翻转ＳＢ气管松弛作用的耐受性，但ＰＤＥＩＩ抑制剂氰胍哒嗪则不能。虽然蛋白合成抑制剂环己酰亚胺对ＳＢ耐受性无预防作用，但上述结果仍提示ＳＢ气管松弛作用的耐受性可能与ＰＤＥＩＶ活性的增高有关。     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对小鼠脑血管内皮细胞缺血性损伤的保护作用

目的观察(NAD)对缺糖缺氧引起的脑血管内皮损伤是否具有保护作用。方法采用缺糖缺氧(OGD)作为体外缺血性损伤模型,以(NAMPT)特异性抑制剂降低细胞内的NAD水平,以NAD的前体物质烟酰胺单核苷酸(NMN)增加细胞内NAD水平,观察NAD降低和增加对OGD引起的小鼠来源脑血管内皮细胞(bEnd.3细胞)损伤的影响。结果 FK866时间和浓度依赖的降低细胞内NAD水平及细胞活性,NMN不能增加正常细胞的活性和NAD水平,但可逆转FK866的作用;OGD 70分钟一过性引起细胞活性下降,24 h后细胞活性恢复并伴NAD水平显著下降,降低NAD水平可以增加OGD引起的细胞活性下降,但对恢复无明显影响,NMN对OGD引起的细胞活性及NAD改变均无影响,但可逆转FK866引起的作用;OGD 4 h造成明显的细胞损伤,细胞活性恢复缓慢,但NAD水平不变,降低NAD水平可以增加OGD 4 h引起的细胞损伤并减慢恢复,NMN能增加NAD水平并减轻细胞损伤并促进恢复。结论 NAD对缺糖缺氧引起的小鼠脑血管内皮细胞缺血性损伤具有保护作用,提示NAD可能成为脑缺血的一个保护分子。     

GPR17在中枢神经系统损伤修复中的作用研究进展

G-蛋白偶联受体17(G-protein-coupled receptor 17,GPR17)原是一种孤儿受体,曾被鉴定为新型尿嘧啶核苷酸/半胱氨酰白三烯受体;2011年国际药理学联合会认为,将GPR17归类于白三烯受体条件尚不成熟。GPR17参与多种病理生理过程,如脑损伤、脊髓损伤、少突胶质细胞发育及成熟,这提示GPR17可能成为相关疾病新的治疗靶点。文中就GPR17的配体和拮抗剂、GPR17和其他受体的相互作用及GPR17在中枢神经系统损伤修复中的作用等研究进展进行综述。     

二氢青蒿素抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖和诱导凋亡

目的:研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响。方法:在培养的C6细胞,加入DHA1～125μmol/L作用24、48、72h。以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst33342染色,观察细胞凋亡;以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化。结果:DHA5～125μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48h后的IC50是23.4μmol/L;5～25μmol/L能诱导细胞凋亡(P<0.05);5～125μmol/L DHA可增高细胞内的ROS(P<0.01)。结论:DHA能够抑制C6细胞增殖,并诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关。     

半胱氨酰白三烯受体1对血管内皮细胞的增殖和迁移的调节

目的：半胱氨酰白三烯（包括LTC4，LTD4 and LTE4）是花生四烯酸经5-脂氧合酶（5-LOX）途径代谢产物，半胱氨酰白三烯受体1（CysLT1）是得到克隆和鉴定的受体之一。已有试验表明CysLT1受体与血管再生相关，但尚不清楚其对血管再生中内皮细胞的功能调节。内皮细胞的增殖和迁移是血管再生的重要步骤，本试验目的是观察CysLT1受体对血管内皮细胞的增殖、迁移的影响，并探讨其作用机制。     

受体相互作用蛋白家族在炎症中的作用研究进展

受体相互作用蛋白（RIP）家族是一组苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶,具有相对保守的激酶结构域和不同的非激酶结构域,参与固有免疫应答、炎症等生理和病理过程。近年来研究表明,RIP家族通过参与坏死复合物的形成介导细胞坏死、触发炎症反应,其中RIP1和RIP3与细胞坏死的关系尤为密切。细胞坏死是一种精密调控的细胞死亡方式。通过TNF信号通路和Toll样受体信号通路传递的死亡信号可招募并磷酸化混合谱系激酶结构域蛋白,最终导致细胞崩解死亡,而细胞崩解后释放的胞内物质可触发炎症反应。本文着重阐述RIP家族介导细胞坏死和炎症发生所涉及的主要信号通路及分子机制,简述了RIP家族在相关炎症性疾病中的重要作用,并对RIP作为炎症性疾病治疗靶点的可能性进行了展望。     

半胱氨酰白三烯受体对小鼠小胶质细胞吞噬功能的调节作用

目的: 研究半胱氨酰白三烯（CysLT）受体（CysLT₁R和CysLT₂R）对小鼠BV2小胶质细胞吞噬功能的调节作用。方法: 以经典炎症激活剂脂多糖和CysLT受体激动剂LTD₄处理BV2细胞,采用免疫荧光计数法和流式细胞仪检测BV2细胞吞噬功能,免疫荧光共染法观察BV2细胞中CysLT₁R和CysLT₂R表达分布。结果: 脂多糖和LTD₄均能增强BV2细胞吞噬功能,而CysLT₁受体选择性拮抗剂孟鲁司特和CysLT₂受体选择性拮抗剂HAMI 3379均能抑制脂多糖和LTD₄诱导的BV2细胞吞噬功能增强;脂多糖和LTD₄激活BV2细胞后可引起CysLT₁R和CysLT₂R在细胞内分布变化,两种亚型的受体分布变化趋势基本一致,且存在共表达。结论: CysLT₁R和CysLT₂R均可以调节BV2细胞的吞噬功能,且两者具有协同性。     

水通道蛋白4基因敲除对老年小鼠行为和脑形态变化的影响

目的：观察AQP4基因敲除（AQP4^-/-）对老年小鼠行为学和脑形态学变化的影响,揭示AQP4在脑老化中的作用。方法：58只CD-1小鼠按基因型与月龄分为4组：年轻（2~3个月龄）AQP4-/-组、老年（17~19个月龄）AQP4^-/-组、年轻AQP4^+/+组和老年AQP4^+/+组。采用开场试验测定小鼠运动量和探究行为,脑切片进行神经元特异性染色（甲苯胺蓝染色、NeuN染色）、星形胶质细胞特异性染色（GFAP染色）和小胶质细胞特异性染色（Iba-1染色）,观察并计数皮层和海马神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞的形态和数量。结果：与年轻小鼠比较,老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠在开场试验的总活动距离分别减少41.2%和44.1%（P<0.05）,各组小鼠在中心区域的活动距离和滞留时间无差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠皮层神经元密度分别降低19.6%和15.8%（P<0.05）,各组间CA1区神经元胞体层厚度无差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠海马CA3区星形胶质细胞密度分别增加57.7%和64.3%（P<0.001）,各组间星形胶质细胞的总面积无显著差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠海马CA3区小胶质细胞的面积分别增加46.9%和52.0%（P<0.01）,各组间小胶质细胞密度无显著变化。与AQP4^+/+小鼠相比,AQP4^-/-小鼠在海马CA3区星形胶质细胞总面积明显减小,年轻小鼠减小18.0%（P<0.01）,老年小鼠减小23.6%（P<0.01）,其余指标均无显著差异。结论：AQP4可能影响小鼠星形胶质细胞形态及与星形胶质细胞相关的神经功能,对神经元、小胶质细胞的形态和部分相关神经行为无明显影响,AQP4基因敲除对小鼠脑老化过程发生的脑形态和神经行为变化无显著影响。     

班布特罗对豚鼠支气管收缩反应的扩张作用

目的:观察班布特罗对豚鼠支气管收缩反应的影响。方法:用哮喘发作潜伏期、肺机械功能及离体气管平滑肌松弛试验观察班布特罗的支气管扩张作用。结果:班布特罗ig后1h、4h和24h均能延长组胺诱导的豚鼠哮喘潜伏期,ED_(50)(95％可信限)分别为0.74(0.60-0.92),0.75(0.61-0.91),1.00(0.77-1.30)mg·kg~(-1),其作用持续时间明显长于特布他林。班布特罗2或10mg·kg~(-1)在抗原攻击前2h ig部分或几乎完全抑制致敏豚鼠抗原攻击引起的气道阻力增加和肺顺应性降低。但在离体试验中,班布特罗对氨甲酰胆碱引起的气管平滑肌收缩反应和静息肺组织条无明显松弛作用。结论:班布特罗通过缓慢代谢发挥其长效支气管扩张作用。