扎普司特和谷胱甘肽翻转豚鼠离体气管对硝普钠的耐受性

上皮完整或去上皮的豚鼠离体气管以３００μｍｏｌ·Ｌ－１硝普钠（ＳＮＰ）预处理１ｈ，使ＳＮＰ对抗乙醋甲胆碱气管收缩作用的剂量反应曲线右移１．３－１．５倍，最大舒张率下降４１％－５８％，形成ＳＮＰ气管松弛作用的耐受性．８－溴环鸟苷酸可模拟ＳＮＰ在豚鼠离体气管形成的ＳＮＰ耐受性，谷胱甘肽（１ｍｍｏｌ·Ｌ－１）及环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ）Ⅴ抑制剂扎普司特（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）均可部分翻转ＳＮＰ的气管松弛作用耐受性，而蛋白合成抑制剂环己酰亚胺（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）对ＳＮＰ的耐受性无预防作用．结果表明ＳＮＰ可产生豚鼠离体气管松弛耐受性，这可能是由于气管平滑肌中环鸟苷酸（ｃＧＭＰ）积聚而下调鸟苷酸环化酶（ＧＣ）活性和上调ＰＤＥⅤ活性．     

红霉素的胃动素样作用(综述)

红霉素是临床常用的大环内酯类抗生素，但近年有报道表明，它能模拟胃动素诱发消化间期移行性综合运动，且指出红霉素是通过激动胃动素受体而产生胃肠道作用的。这些研究结果为临床提供了一类新型的胃肠道动力药──红霉素及其它14碳大环内酯类抗生素。1胃动素对胃肠道的作用胃动素（motilinMT）是一个由22个氨基酸组成的胃肠肽，它的主要生理作用为启动胃肠道的移行性综合运动（migratingmotorcomplexMMC）。MMC的一个周期为2h，包括Ⅰ相电活动和动力活动静止状态、Ⅱ相不规则活动状态、Ⅲ相持续数分钟的发生于胃或小肠能传播的电活动…     

尼克酰胺磷酸核糖转移酶在小鼠脑老化中的作用

尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)可分布在细胞内和细胞外,已经发现NAMPT参与许多老年性疾病,如冠心病、糖尿病、高脂血症及癌症等,研究发现其代谢产物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)可通过SIRT1延缓动物衰老过程,年轻大小鼠脑内的NAMPT主要表达在神经元,参与神经元的代谢,并对脑缺血损伤及神经退行性疾病有保护作用。目的观察NAMPT在脑老化中的表达变化及其作用。方法对年轻(2～3个月)和老年(17～19个月)小鼠脑及血清进行NAMPT表达水平、分布及其产物水平的检测,并以NAMPT特异性抑制剂FK866模拟NAMPT降低,以重组NAMPT模拟细胞外NAMPT增加,观察对神经元和脑血管内皮细胞的影响。结果与年轻小鼠相比,老年小鼠脑NAMPT水平降低、而血清中NAMPT水平明显增高;老年小鼠脑内NAMPT水平在皮层和海马明显降低,而纹状体和小脑中的NAMPT水平维持不变;年轻小鼠NAMPT主要分布在神经元,老年小鼠脑内NAMPT主要分布于神经元和小胶质相比;老年小鼠脑内NAD水平在海马、纹状体和小脑明显降低,但皮层不变;NAMPT抑制剂FK866可浓度依赖性诱导神经元死亡;重组NAMPT处理是小鼠脑血管内皮细胞对缺糖缺氧损伤的易感性增加。结论老年时NAMPT的表达、分布及活性变化具有部位依赖性,NAMPT参与脑老化及老年性脑疾病的发生。     

半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系。方法鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol·L-1鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化。结果鱼藤酮(0.3～30μmol·L-1)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特1和5μmol·L-1可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。鱼藤酮(1～10μmol·L-1)作用PC12细胞24 h及鱼藤酮3μmol·L-1处理3 h和24 h,均可诱导CysLT 1受体蛋白水平表达升高。鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆。结论 CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤。     

稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株的构建及其受体拮抗剂的初筛

目的:构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并初筛具有CysLT2受体拮抗活性化合物。方法:采用Lipofectamine 2000将质粒pcDNA3.1(+)-hCysLT2转染至HEK293细胞中,用96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞株,以RT-PCR和免疫荧光法检测hCysLT2基因的表达。稳定表达hCysLT2受体的HEK293细胞株,以激动剂LTD4诱导细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)增高为指标,初步筛选有拮抗作用的化合物。结果:转染后的HEK293细胞中挑选12个单克隆细胞株,11株高表达hCysLT2受体。阳性刺激物ATP为50μmol/L及LTD4 100 nmol/L能升高[Ca2+]i。AP-2100984抑制LTD4诱导的hCysLT2-HEK293细胞[Ca2+]i升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用。新合成化合物DXW2、DXW3、DXW4、DXW5、DXW9、DXW25、DXW26、DXW29、DXW35在1μmol/L能显著抑制LTD4引起的[Ca2+]i升高,其中DXW4和DXW5的IC50分别为0.25μmol/L和7.5μmol/L。结论:成功构...     

大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定

目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究.方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD_4处理后细胞内钙变化.结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD_4可诱导细胞内钙的增加.结论:成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础.     

Effects of phospholipase D on cardiopulmonary bypassinduced neutrophil priming

To investigate the relationship betweenphospholipase D (PLD) activation and neutrophil priminginduced by cardiopulmonary bypass (CPB), and try toclarify whether CPB-induced systemic inflammatoryresponse can be attenuated by inhibiting neutrophilic PLDactivation.     

半胱氨酰白三烯受体CysLT1 R和CysLT2 R以及GPR17在帕金森病模型小鼠脑内的表达分布

目的:探讨MPTP小鼠帕金森病(PD)模型脑内半胱氨酰白三烯受体CysLT1R、CysLT2R和GPR17表达分布特征。方法:C57BL/6小鼠连续5 d皮下注射MPTP 25 mg/kg诱导PD模型,第10 d处死动物。应用免疫组化方法,观察CysLT1R、CysLT2R和GPR17在黑质表达的变化,并用免疫双标方法进行细胞定位。结果:正常小鼠黑质中有CysLT1R、CysLT2R和GPR17表达,主要表达在TH阳性多巴胺能神经元以及小胶质细胞,CysLT2R还表达于星形胶质细胞;其中,在多巴胺能神经元中91%表达GPR17,77%表达CysLT1R,52%表达CysLT2R。与对照组比较,PD模型组小鼠黑质中TH阳性细胞数显著减少;同时CysLT1R、CysLT2R和GPR17阳性细胞数以及表达CysLT1R、CysLT2R和GPR17的多巴胺细胞数均显著减少。在正常小鼠纹状体中有CysLT1R、GPR17表达,主要表达于神经元;而CysLT2R表达很少,主要表达于星形胶质细胞。PD模型组小鼠纹状体中CysLT1R、GPR17阳性细胞数减少;但CysLT2R表达升高,主要表达于增生的星形胶质细胞。结论:CysLT1R、CysLT2R和GPR17可能参与MPTP所致的小鼠PD损伤过程。     

半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂普鲁司特调节SK-N-SH细胞分化

目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响。方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4 普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-SH细胞CysLT1和CysLT2受体的表达;用免疫荧光法观察神经元分化标记物微管相关蛋白(MAP-2)的表达。结果:免疫印迹显示,SK-N-SH表达CysLT1受体和CysLT2受体,CysLT2受体表达较多。形态学结果显示,维A酸、普鲁司特、LTD4 普鲁司特诱导SK-N-SH细胞发生形态学改变,表现为胞体变小,有明显的突起生长;而LTD4无明显作用。免疫荧光结果显示,在对照组和普鲁司特组MAP-2主要分布于胞体;在维甲酸组MAP-2除了分布于胞体外,还分布于突起。普鲁司特增加MAP-2阳性细胞数。结论:CysLT1受体拮抗剂普鲁司特参与SK-N-SH细胞分化的调节。