TNF在犬严重烧伤早期脑水肿中的变化及意义

目的 探讨严重烧伤早期血浆TNF的变化与脑水肿形成的关系。方法 犬52只分为对照组（n=6)和单烧组（n=6)、乳酸钠液组（n=20)及葡萄糖液组（n=20)。将致伤组犬制成50％TBSAⅢ度创面，于伤前及伤后6、12、18、24h动态测定各组犬血浆TNF值并与脑病理组织学及含水量变化对比分析。结果 严重烧伤早期脑水肿模型（葡萄糖液组）伤后TNF水平和脑含水量呈持续升高，伤后24h达峰值。电镜下伤后6h后毛细血管内皮细胞及血管周围胶质细胞终足肿胀，神经细胞出现空泡状现象，毛细血管内皮细胞，神经细胞及轴突呈不同程度的缺血性改变。随着观察时间的延长，这种改变逐渐明显，以伤后24h表现最为显著。结论 TNF的变化对严重烧伤脑水肿的发生发展有一定的影响。     

乳腺癌pS2蛋白表达的临床意义

目的 探讨乳腺癌pS2蛋白表达与临床病理因素的关系，评估其作为乳腺癌预后判断和内分泌治疗指标的价值。方法 采用免疫组化法检测75例乳腺癌组织中pS2蛋白及雌激素受体(Estrogen receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone receptor，PR)的表达，分析pS2蛋白阳性表达与病人年龄、月经状况、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、病理类型和ER、PR的关系。结果 pS2蛋白表达阳性率为33．3％，其表达与病人年龄和病理类型有关，与肿瘤大小无关，绝经前较绝经后、腋窝淋巴结有转移者较无转移者pS2阳性率高，但无统计学差异。pS2蛋白表达与ER、PR有关，但并不完全一致。结论 乳腺癌pS2蛋白的表达与部分临床病理因素有关，能在一定程度上反映病人的预后。pS2阳性表达可能是乳腺癌内分泌治疗的合理指征，但pS2不能取代ER、PR的检测。     

诺帝对永生化人宫颈上皮细胞HPV16E6基因抑制作用的初步研究

目的:研究诺帝(Nordy)对永生化人宫颈上皮细胞(H8细胞)HPV16E6基因的抑制作用和机制.方法:免疫细胞化学SP法检测诺帝作用前后H8细胞E6蛋白和p53蛋白表达;免疫细胞化学SP法检测增殖细胞核抗原MCM5表达,RT-PCR检测诺帝作用前后HPV16E6 mRNA的表达情况.结果:免疫细胞化学显示,E6和p53蛋白在对照组细胞内呈阳性表达,阳性物分别位于胞浆和胞核,经100μmol/L诺帝处理72h后,H8细胞E6蛋白和p53蛋白表达明显减弱,与对照组相比,差异有显著性.MCM5蛋白在对照组细胞内呈强表达,呈棕黄色分布于胞核内,经100μmol/L诺帝处理96h后,MCM5的表达明显下降.用浓度10μmol/L诺帝处理H8细胞72小时后,H8细胞的HPV16E6 mRNA表达量与对照组表达量无明显差异,而较高浓度的诺帝(50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L)处理H8细胞72小时后,H8细胞的HPV16E6 mRNA表达量相比对照组有明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:诺帝具有一定抑制HPV16病毒的作用,主要表现在抑制HPV16E6基因的mRNA表达,进而影响E6基因的转录,导致病毒E6蛋白和p53蛋白表达降低,降低永生化细胞MCM5表达,抑制细胞的增殖活性.     

乙醛脱氢酶1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测乙醛脱氢酶1(ALDH1)在结直肠癌中的表达,探讨其与结直肠癌临床病理特征的关系。方法收集西南医院2006-2010年送检的结直肠癌组织及正常结直肠组织标本各75例,取结直肠癌与正常结直肠组织标本各70份,采用免疫组织化学法检测其ALDH1的表达,采用Real time RT-PCR、Western blotting检测其余各5例结直肠癌及正常结直肠组织中ALDH1的表达情况。结果免疫组织化学染色表明,ALDH1主要表达于结直肠癌肿瘤细胞和正常结直肠黏膜上皮细胞的胞质内,且在正常结直肠组织的阳性表达率(83%)显著高于结直肠癌组织(37%,P=0.000)。ALDH1 mRNA在正常结直肠组织的表达水平是结直肠癌组织的1.4~17倍。Western blotting检测结果显示,ALDH1在正常结直肠组织中的表达是结直肠癌组织的1.02~3.99倍。统计分析显示,ALDH1的表达与结直肠癌患者的年龄、性别以及肿瘤部位、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、Dukes’分期等无相关性(P>0.05)。结论 ALDH1在正常结直肠组织中的表达显著高于结直肠癌组织,其表达与结直肠癌患者的临床病理特征之间无显著相关性。     

人食管鳞癌细胞系EC109中肿瘤干细胞的分离（富集）与鉴定

目的运用无血清成球培养法从人食管鳞癌细胞系EC109中分离/富集肿瘤干细胞,并对其＂干性＂特性进行鉴定。方法将EC109细胞接种至添加1XB27的干细胞培养基（DMEM/F12 1：1,无血清）,于poly-Hema包被的培养皿或低黏附培养板中培养,获取细胞球。采用实时定量PCR方法检测其干性相关转录因子的基因表达,连续传代和平板克隆形成实验评价其自我更新能力,免疫荧光细胞化学法检测其分化前后干性相关转录因子和分化标志物的表达变化,以裸鼠移植瘤实验检测其体内成瘤能力。结果培养5d能获得EC109细胞的细胞球。细胞球细胞高表达Oct4等干性相关转录因子,具有自我更新能力、分化潜能。裸鼠体内1×104个细胞球细胞能启动肿瘤形成,而单层培养细胞则需要1×105个细胞,且同数量级的细胞球细胞较单层培养细胞所形成的肿瘤体积大。结论无血清成球培养法能从食管鳞癌细胞系EC109获得细胞球,细胞球富集了肿瘤干细胞。     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5体内外生长的影响.方法采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG-5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况.结果NDGA可显著抑制CHG-5细胞体外增殖,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,凋亡细胞增加.采用接种后第5天按50 mg/kg腹腔内注射给药,治疗组移植瘤体积较对照组缩小,未见明显的毒副作用.结论NDGA对CHG-5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用,其作用可能与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

诺帝抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF和iNOS的表达及意义

目的检测诺帝对实验性糖尿病大鼠视网膜血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的影响,探讨诺帝抑制糖尿病视网膜病变的可能机制.方法采用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,将动物随机分为糖尿病组(5只×2)、诺帝治疗组(5只×2),另取10只正常大鼠作为正常对照组,其中,诺帝治疗组在出现糖尿病表现后按27 mg/kg腹腔注射诺帝溶液(隔日1次),糖尿病组和正常对照组只在同期注射等量生理盐水.注射后1、3个月取视网膜制备切片,采用免疫组织化学方法半定量检测视网膜中VEGF和iNOS阳性反应及其分布.结果正常对照组大鼠视网膜VEGF和iNOS呈极微弱的表达.1个月时,糖尿病组VEGF和iNOS阳性反应增强,其阳性反应面积较正常对照组显著增加(P＜0.01);诺帝治疗组大鼠视网膜VEGF和iNOS阳性表达面积较糖尿病组明显减少(P＜0.01).在3个月时,糖尿病组VEGF和iNOS阳性表达较1个月明显增加;诺帝治疗组较糖尿病组VEGF和iNOS表达明显减少,阳性表达面积在两组间有非常显著的差异(P＜0.01).结论诺帝明显抑制实验性糖尿病大鼠视网膜VEGF和iNOS阳性反应,提示诺帝可能通过降低糖尿病大鼠视网膜VEGF和iNOS的产生,从而缓解大鼠糖尿病视网膜病变.     

Nordy对人腺泡型横纹肌肉瘤细胞系PLA-802的诱导分化作用

目的观察Nordy对人腺泡型横纹肌肉瘤细胞系PLA-802细胞的体内和体外诱导分化作用。方法用终浓度100μmol/L Nordy处理体外培养细胞,于处理后第24、48、72和96h时相点用倒置显微镜观察细胞形态变化;右腋皮下接种了PLA-802细胞的裸鼠于接种后第7天开始按27mg/kg Nordy隔日1次经腹腔注射给药,共给药10次,于接种后第26天杀鼠摘取移植瘤。细胞和移植瘤组织经HE、电镜和myosin免疫组化染色,光镜、电镜观察及免疫组化图像分析。结果用Nordy处理体内外生长的PLA-802细胞后,瘤细胞核质比降低;细胞形态变椭圆形或梭形,核变小呈椭圆形,核仁变小,核分裂象减少;免疫组化显示胞质内myosin蛋白表达增强;电镜见胞质中肌(微)丝明显增多,甚至有横纹肌肌原纤维形成。结论Nordy对体内外生长的PLA-802细胞具有明显的诱导分化作用。     

星形细胞肿瘤微血管组织芯片的构建和微血管壁组成细胞研究

目的初步探讨人脑星形细胞肿瘤中新生微血管的管壁组成成分与微血管构筑异质性(tumor microvascular architecturphenotype heterogeneity,T-MAPH)之间的关系。方法收集45例人脑星形细胞肿瘤标本,选择其新生微血管形态不同的“热点区域”制备组织芯片;在此基础上采用免疫组织化学染色技术分别进行GFAP、CD34和α-SMA标记,观察微血管管壁组成细胞的免疫表型与其不同形态特征之间的关系。结果成功构建了含幼稚微血管、厚壁微血管、肾小球样微血管及薄壁、蛇行状微血管等各种形态特征的153点组织芯片;各种形态的微血管中均可检测到呈单层排列、位于微血管最内层的CD34阳性的内皮细胞;α-SMA阳性反应可见于内皮细胞外相当于周细胞处,其阳性表达范围及数目在不同形态的微血管中呈现多样性:幼稚微血管仅见少量表达,而在厚壁和“肾小球样”微血管中α-SMA阳性细胞多呈活跃增生的单层或多层。结论星形细胞瘤微血管形态构筑的多样性(异质性)是由内皮细胞和α-SMA阳性周细胞共同参与形成的,而后者的作用可能更为突出和重要。     

人恶性胶质瘤细胞裸鼠脑原位移植瘤FPR表达与VEGF关系

目的观测甲酰肽受体(formylpeptide receptor,FPR)在人恶性胶质瘤细胞系U87细胞裸鼠脑原位移植瘤组织中的表达,以及与血管内皮生长因子(VEGF)的关系,探讨FPR在恶性胶质瘤血管生成过程中的作用。方法培养U87细胞,以立体定向注射技术制作U87裸鼠脑原位移植瘤模型;采用间接免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下分别观测FPR在U87细胞和移植瘤组织的表达;免疫组化方法检测VEGF在U87细胞裸鼠脑移植瘤上的表达。结果培养的U87细胞及其原位移植瘤组织均可见FPR表达,定位于瘤细胞胞膜,VEGF阳性着色主要位于胞质,两者阳性表达程度呈正相关性。结论人恶性胶质瘤细胞系U87细胞裸鼠脑原位移植瘤组织存在FPR表达,与VEGF的产生密切相关,在胶质瘤血管生成过程中可能起重要作用。