高速逆流色谱法分离制备沉香中的沉香四醇和4'-甲氧基沉香四醇

目的:研究高速逆流色谱分离制备沉香中2-(2-苯乙基)色酮类活性成分的方法。方法:采用氯仿-甲醇-水(4∶2.6∶2.4)为两相溶剂体系,上相为固定相,流速1.2 mL/min,正向转速900 rpm。结果:利用高速逆流色谱法从沉香95%乙醇粗提物中一次性分离得到两个2-(2-苯乙基)色酮衍生物——沉香四醇(agarotetrol,AH1)和4′-甲氧基沉香四醇。所得两分离峰经EI-MS、1H-NMR和13C-NMR鉴定确认。HPLC检测纯度可达99.0%以上。结论:高速逆流色谱法对于沉香中结构相近的2-(2-苯乙基)色酮衍生物具有理想的分离效果,产物纯度高。     

广东地区血液内科血流感染的病原菌流行病学分析

目的分析广东省50家医院血液内科血标本来源细菌的构成和耐药性,了解血液内科血流感染(BSI)的流行病学特征。方法基于国家细菌耐药监测网(CARSS)平台,对2019年广东省50家医院血液内科、呼吸内科和ICU由血标本分离的病原菌分布和碳青霉烯类耐药革兰阴性菌(CRO)检出率进行分析,同时对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌药敏特征分儿童组(≤14岁)和成人组(>14岁)进行分析。参考CLSI 2019年M100文件标准判断结果。结果共收集广东省50家医疗机构(三级医院48家)血液内科、呼吸内科、重症监护治疗病房(ICU)三个科室各1618、1026、3626株血标本分离菌完整微生物信息资料。其中血液内科革兰阴性杆菌占71.8%,革兰阳性球菌占28.2%。血液内科分离前5位细菌是:大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、凝固酶阴性葡萄球菌和草绿色链球菌群。葡萄球菌属中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)的检出率分别为19.7%和80.6%,未发现对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁耐药的菌株,无利奈唑胺耐药的肠球菌。草绿色链球菌群对青霉素...     

高黏液表型与基因型预测肺炎克雷伯菌毒力的比较

 目的 评价高黏液表型、毒力基因预测高毒力肺炎克雷伯菌（hvKp）的应用价值。方法 收集2016年11月—2018年4月广东省4所医院分离的肺炎克雷伯菌,通过拉丝试验判断菌株黏液表型,检测毒力基因和血清型情况,采用蜡螟模型计算菌株的半数致死率（LD₅₀）,比较不同高黏液（hm）表型和毒力基因型菌株LD₅₀。结果 共收集194株肺炎克雷伯菌,拉丝试验阳性菌株占40.2%（78株）。蜡螟试验结果显示,仅毒力基因iucA、iroB、fimH阳性菌株LD₅₀低于相应的阴性菌株（P<0.05）。iucA+iroB+fimH+hm全阳性组（n=58）、iucA阳性+iroB阳性+fimH阳性+hm阴性组（n=23）、iucA+iroB+fimH+hm全阴性组（n=28）3组LD₅₀分别为（5.39±0.71）、（5.44±0.62）、（5.83±0.64） log10 CFU/mL,前两组比较差异无统计学意义（P=0.786）,但前两组分别与第3组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。在高黏液表型菌株中血清型K1、K2、K57检出率高于非高黏液表型菌株,差异均有统计学意义（均P<0.001）。结论 仅依据高黏液表型预测hvKp准确性较低,与高黏液表型相比,毒力基因iucA+、iroB+、fimH+预测hvKp更准确。     

铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统毒力相关蛋白的差异表达

目的 分析铜绿假单胞菌在耐药性变化时菌株Ⅲ型分泌系统(T3SS)毒力相关蛋白的表达差异,结合患者的临床资料,探讨耐药性变化与细菌毒力变化的相关性.方法 筛选源于同一患者呼吸道、多次分离、药敏谱发生动态改变的铜绿假单胞菌,用肠杆菌基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)方法确定菌株的同源性,以同一克隆的菌株体系为研究对象,Kirby-Bauer纸片法检测菌株对药物的敏感性,PCR方法检测T3SS系统和菌株的毒力基因型,双向蛋白电泳比较菌株的全菌蛋白表达谱,质谱分析差异蛋白点,并在蛋白质数据库进行检索.收集患者临床信息,了解临床特征、细菌耐药性、毒力相关蛋白三者间的关系.结果 筛选出1例慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并肺炎的患者符合入选条件,其1年内3次呼吸道分离出铜绿假单胞菌,药敏谱依次为:敏感→多重耐药(MDR)→泛耐药(PDR).3株菌株毒力基因属exo U+/exo S-型,经ERIC-PCR证实为同一克隆.双向凝胶电泳显示3株菌有21个差异表达蛋白.质谱分析发现其中11个蛋白功能明确(9个与细菌基础代谢有关).仅毒力相关蛋白二硫化物氧化还原酶A(DsbA)在PDR株时表达明显上调,在敏感株表达最低.临床信息显示该患者在分离出PDR时,肺部感染最重,并于1个月后死亡.结论 在长期定植、感染过程中,生存环境的变化可能导致铜绿假单胞菌的耐药表型发生变化,同时菌株毒力加强,共同导致感染难于控制.DsbA在铜绿假单胞菌毒力变化中可能发挥了重要的作用.     

哌拉西林/舒巴坦对非发酵菌体外抗菌活性研究

目的 评价哌拉西林/舒巴坦对非发酵菌体外抗菌活性.方法 采用微量肉汤稀释法测定哌拉西林/舒巴坦对细菌的体外抗菌作用.结果 北京、天津、广州、哈尔滨和重庆5个城市的8家医院共收集菌株809株.对于所有铜绿假单胞菌,在8种测试药物中,哌拉西林/舒巴坦的敏感率最高(71.9%),而亚胺培南、头孢吡肟、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦敏感率都低于50%.对于亚胺培南不敏感的铜绿假单胞菌,哌拉两林/舒巴坦敏感率仍可达55.8%.对于碳青霉烯敏感的鲍曼不动杆菌,哌拉西林/舒巴坦和头孢哌酮/舒巴坦敏感率最高,分别为71.0%和73.0%.对于嗜麦芽寡养单胞菌,26%和20%的菌株对哌拉西林/舒巴坦和哌拉两林/三唑巴坦的MIC≤16μg/mL.对于洋葱伯克霍尔德菌,69%的菌株对哌拉两林/舒巴坦的MIC≤16μg/mL.对于黄杆菌属和产碱杆菌属,哌拉西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/三唑巴坦3种酶抑制剂复合制剂敏感率最高,分别为70.2%、63.2%、57.9%和94.4%、94.4%、91.7%.结论 哌拉西林/舒巴坦对于多种非发酵菌具有良好的体外抗菌活性.对碳青霉烯不敏感的铜绿假单胞菌具备一定的抗菌优势,哌拉西林/舒巴坦是经验性治疗非发酵菌感染(包括复数菌感染)的的适宜选用药物之一.     

广州地区产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的再调查

目的 调查广州地区部分医院2007年10月到2008年11月的铜绿假单胞菌泛耐株,筛榆出其中产IMP-9金属酶的菌株并分析其同源性,对比2005-2007年初广州地区多家医院曾出现的产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的克隆株,分析近期广州地区是否还有该流行株的存在.方法 Q-PCR筛选产IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌,ERIC-PCR对产酶株进行同源性分析.结果 从2007年10月到2008年11月收集广州7家大型医院的269株铜绿假单胞菌泛耐株,共检测出携带IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌10株,均来自同一医院.ERIC-PCR检测,10株均为同一基因型的克隆株,但与前期曾出现的产IMP-9金属酶克隆株无同源性.结论 产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的院内克隆传播仍然存在,而医院间的传播在本次调查中没有发现.因此,仍需继续加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控和加强院内感染的管理控制.     

高速逆流色谱法分离纯化浙贝母中贝母素甲，贝母素乙

目的：采用高速逆流色谱技术分离提纯浙贝母中的活性成分贝母素甲，贝母素乙。方法：采用氯仿-无水乙醇-0．2mol&;#183;L^-1盐酸（4：3：2）系统，上相为固定相，下相为流动相。主机转速为800r&;#183;min^-1，流动相流速为1．2mL&;#183;min^-1。结果：一次进样分离得到贝母素甲、贝母素乙，经高效液相（HPLC）分析纯度，经MS，^1HNMR鉴定结构。结论：利用本实验条件可从浙贝母中分离制备贝母素甲，贝母素乙，两者纯度分别达到：97．5％，94．5％。     

柴胡颗粒对发热大鼠体温、M1/M2型巨噬细胞极化及TLR4/NF-κB蛋白的作用机制

目的 探讨柴胡颗粒对发热大鼠体温、M1/M2型巨噬细胞极化及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB蛋白的作用机制。方法 66只大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、阿司匹林组、柴胡颗粒低、中及高剂量组,每组11只。除正常组外,其余大鼠均建立内毒素炎症发热大鼠模型,建模成功后,柴胡颗粒低剂量、柴胡颗粒中剂量及柴胡颗粒高剂量大鼠分别灌胃5.40、10.80及21.60 g/kg的柴胡颗粒,阿司匹林组灌胃0.081 g/kg的阿司匹林溶液,其余大鼠灌胃等量(约2 ml)的蒸馏水。采用电子体温计在建模前、建模后第8天、给药后2、3及4 h检测体温;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、前列腺素(PG)E2及白细胞介素(IL)-1β水平,提取各组脾脏计算脾脏重量及脾脏指数;提取及分离巨噬细胞采用流失细胞检测巨噬细胞M1及M2极化情况;Western印迹检测巨噬细胞中NF-κB、TLR4及髓样分子因子(MyD88)蛋白表达。结果 模型组活动、活跃程度均降低,饮水量升高,皮毛光泽度较差,粪便稀软。柴胡颗粒低、中、高剂量组及阿司匹林组活动及活跃程度有所升高,正...     

改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的性能评估

目的 评估改良Hodge试验在碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科细菌中检测碳青霉烯酶的效能.方法 收集2004-2008年我国16家教学医院的49株碳青霉烯类药物敏感性降低(亚胺培南、美罗培由或厄他培南的MIC≥2μg/ml)的肠杆菌科细菌;采用对倍琼脂稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC;通过改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;利用加苯硼酸或苯唑西林的改良Hodge试验区分碳青霉烯酶或AmpCs/ESBLs导致的阳性结果 ;采用PCR检测包括NDM-1型碳青霉烯酶基因在内的多种β内酰胺酶基因,并对PCR阳性产物测序鉴定.结果 49株菌中,36株菌对亚胺培南不敏感(MIC>4μg/ml),31株菌对美罗培由不敏感(MIC>4μg/ml),47株菌对厄他培南不敏感(MIC>2μg/ml).49株临床分离菌中23株菌改良Hodge试验刚性,包括9株弱阳性和14株强阳性.经过对菌株进行β内酰胺酶基因PCR和测序,发现9株Hodge弱阳性菌株中2株携带blaKPC-2,7株不携带碳青霉烯酶基因,但携带blaampC/blaESBL;14株强阳性菌株中4株携带blaKPC-2,8株携带blaIMP-4,2株携带blaIMP-8;26株改良Hodge试验阴性菌株均未携带碳青霉烯酶基因.所有49株菌均未检测到blaNDM-1.以碳青霉烯酶基因检测为标准,则改良Hodge试验对检测碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌中碳青霉烯酶的敏感度为100%,特异度为79%,阳性预测值为70%,阴性预测值为100%,准确性为86%.结论 改良Hodge试验具有很好的敏感性,但存在一些假阳性结果 .利用苯硼酸和苯唑西林可有效区分改良Hodge试验的假阳性和真阳性.     

2011年中国CHINET不动杆菌属细菌耐药性监测

目的了解2011年我国不同地区15所医院临床分离不动杆菌属细菌分布及其耐药性。方法共收集15所教学医院临床分离的6723株不动杆菌属细菌,其中鲍曼不动杆菌5958株（88．6％）。按照统一方案,采用纸片扩散法进行药敏试验,结果按CLSI2012年版标准判读,采用WHONET5．6软件进行数据分析。结果6723株不动杆菌属细菌中,分离自住院患者6003株（89．3％）,分离自门急诊患者720株（10．7％）。33．9％不动杆菌属细菌分离自ICU,其次为内科病房（29．3％）。鲍曼不动杆菌对头孢哌酮一舒巴坦和米诺环素的耐药率最低,分别为43．4％和31．1％,其次为阿米卡星（52．4％）;对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为65．2％和66．2％。不同医院、不同科室分离的细菌对抗菌药物的耐药率不同。科室中以ICU分离耐药菌株耐药率最高。出现较多多重耐药（51．7％,3081／5958）和泛耐药（27．4％,1635／5958）株。结论鲍曼不动杆菌是不动杆菌属中最常见的菌种,该菌除对米诺环素和头孢哌酮一舒巴坦外的大多数抗菌药物的耐药率在60．0％以上,且检出率呈逐年增长的趋势。不同地区医院、不同科室分离的鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药率相差较大。