人釉蛋白基因启动子在成釉细胞中的转录活性研究

目的构建人釉蛋白（Enamelin,ENAM）基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,通过分析不同的启动子片段的活性,确定启动子的功能区域,为进一步研究Enamelin基因的转录调控机制奠定基础。方法以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成釉细胞及Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果成功地获得了不同长度的Ehamelin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在成釉细胞中活性不同,-1216～-554与-312～-133区域为特异的转录调控作用区。结论成功构建了不同长度的Enamelin基因启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,初步确定Enamelin基因启动子的转录活性区,为进一步研究Enamelin基因转录调控特点奠定基础。     

c-Jun调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究

目的:通过过表达及knockdown c-Jun基因,观察小鼠成釉细胞中釉成熟蛋白(amelotin)的表达变化,以初步确定c-Jun对amelotin的调控作用。方法:①应用免疫组化和细胞免疫荧光方法观察体内外成釉细胞中的c-Jun及amelotin的表达情况;②RT-PCR获得c-Jun基因,克隆至pcDNA3.1/myc-hisA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响;③化学合成c-Jun siRNA,瞬时转染成釉细胞,re-al time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响。结果:①体内外成釉细胞中c-Jun和amelotin均有表达,c-Jun主要在成釉细胞胞核中表达,amelotin在成釉细胞和釉质全层均有表达;②成功构建c-Jun真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-c-Jun,转染成釉细胞后amelotin mRNA表达水平显著上升;③成功沉默c-Jun,amelotin在转染c-Jun siRNA组表达水平显著下降。结论:在成釉细胞中,c-Jun在转录水平调控amelotin基因的表达。     

浅谈护士语言沟通的艺术

探讨护士的语言对患者疾病的发生、发展、转归的影响。语言既可以治病,也可致病,所以护士必须掌握良好的语言沟通技巧,同患者进行有效的沟通,才能做好工作。通过护士利用语言的艺术对患者实施积极地护理干预,可促进护惠关系。     

Runx2介导TGF-β1调控成釉细胞MMP20基因表达的研究

目的:研究Runx2在TGF-β1调控小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(matrix metalloprotei-nase 20,MMP20)基因表达中的作用。方法:首先利用双荧光素酶基因报告系统分析TGF-β1对MMP20基因启动子转录活性的影响;然后利用染色体免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)方法观察Runx2与MMP20特异性结合位点之间的相互作用,并利用基因定点突变和双荧光素酶基因报告系统分析Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响;最后运用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默,实时定量RT-PCR技术观察TGF-β1诱导MMP20基因表达的改变。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,MMP20启动子在-87～+23区域转录活性无明显变化外,其他各区域转录活性均增强。利用ChIP研究发现Runx2与MMP20基因核心启动子的特征性序列"TGTGGG"相互作用;将该特征性序列由"TGTGGG"突变为"TGTAAG"后,利用双荧光素酶基因报告系统发现Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响减弱;利用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默后,TGF-β1上调MMP20基因表达的作用减弱。结论:TGF-β1通过转录因子Runx2调控成釉细胞MMP20的表达。     

TGF-β1调控基质金属蛋白酶-20(MMP-20)启动子转录活性的研究

目的:克隆MMP-20基因启动子序列,分析转化生长因子-β1对其转录活性的影响.方法:检索并分析MMP-20基因翻译起始点上游序列.利用PCR从小鼠基因组上扩增长度为2852 bp的启动子序列,并与pMD18-T克隆载体连接.经酶切反应初步鉴定后,以pMD18-T-MMP-20为模板,利用PCR方法获得带酶切位点的MMP-20启动子片段(2842 bp),并与pGL3-Basic载体连接.pGL3-MMP-20瞬时转染小鼠成釉细胞系(ALC)过夜后,在培养基中加入1 ng/mL TGF-B1,12 h后检测荧光素酶的活性.结果:经酶切反应和测序结果证实MMP-20启动子成功插入pGL3-Basic质粒.与pGL3-Basic质粒转染相比较,转染pGL3-MMP-20后荧光素酶活性明显增强;培养基中加入TGF-β1能促使pGL3-MMP-20荧光素酶活性进一步增强.结论:外源性MMP-20启动子在成釉细胞中被激活;TGF-β1能增强pGL3-MMP-20荧光素酶活性,提示釉质发育过程中,TGF-β1具有调节MMP-20基因表达的生物学功能.     

硅酸钙基生物活性陶瓷联用云南白药对炎症状态下牙髓干细胞矿化的影响

背景：活髓切断术现作为永久保存活髓的治疗方法,术中选择合适的盖髓材料可在较大程度上增强其临床疗效并扩大其应用范围。目的：探讨云南白药、iRoot BP Plus及其联合应用对炎症状态下牙髓干细胞矿化的影响。方法：采用组织块法培养人原代牙髓干细胞,MTT法测定云南白药、iRoot BP Plus对牙髓干细胞增殖的影响,确定最佳干预质量浓度。将第3-6代牙髓干细胞分为5组：正常对照组、炎症对照组、云南白药组、iRoot BP Plus组、云南白药+iRoot BP Plus组,后4组使用1μg/mL脂多糖诱导2 h进行细胞造模,然后分别采用75μg/mL云南白药、100μg/mL iRoot BP Plus及两者联用进行刺激,采用碱性磷酸酶染色法、茜素红S染色法、Real time-PCR法、Western blot法检测药物对细胞矿化的影响。结果与结论：(1)与炎症对照组比较,云南白药、iRoot BP Plus及其联合应用处理后抑制了肿瘤坏死因子α mRNA的表达(P <0.001),云南白药+iRoot BP Plus组肿瘤坏死因子α mRNA的表达明显低于云南白药组、iRoo...     

TGF-β1调控成釉细胞ODAM基因表达的研究

目的:探讨TGF-β1对ODAM基因表达的作用。方法:通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对成釉细胞ODAM基因表达的影响;利用c-jun小RNA干扰(siRNA)技术,阻断转录因子c-jun基因表达,观察c-jun基因沉默对TGF-β1诱导ODAM基因表达的影响;利用双荧光素酶基因报告系统研究成釉细胞中TGF-β1对ODAM启动子转录活性的调控作用。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,ODAM基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使c-jun基因沉默,实时定量RT-PCR法研究显示,TGF-β1调控ODAM基因表达的作用减弱。将pGL3-ODAM转染成釉细胞后,用TGF-β1刺激成釉细胞一定时间,ODAM启动子的转录活性增强。c-jun基因沉默抑制了TGF-β1对ODAM启动子的激活作用。结论:在釉质发育过程中,TGF-β1通过转录因子c-jun调控成釉细胞ODAM基因表达。     

神经外科护理风险分析及安全管理对策

目的与临床病例相结合深入分析神经外科护理风险及安全管理对策。方法回顾性分析法将我院2011—2012年100例神经科患者进行临床实践,分析护理工作中存在的风险因素,并进行回顾性分析,针对护理风险探讨其安全管理对策。结果临床实践中发现在护理过程中,护理人员的不安全因素达16％,院方不安全因素达4％。存在着巨大的护理风险。结论就这些风险进行探讨,把风险管理研究对策普及到全体医护人员,提高了护理人员的风险意识、对工作中的薄弱环节和安全隐患加大检查力度,进而大大降低了神经外科的护理风险。提高患者的安全。     

慢性病毒载体的最新进展与应用

慢性病毒作为一种特殊的逆转录病毒，不但具备逆转录病毒的优点，并且还可以感染非分裂期的细胞。以此类病毒作为载体进行转基因是基因治疗临床实验的一个突破口。