基于序贯代谢方法的痛风定胶囊体内代谢分析

目的 采用序贯代谢方法，结合超高效液相色谱-高分辨质谱法（UPLC-HRMS），鉴定痛风定胶囊在大鼠体内的原型成分和代谢物。方法 采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0~1 min，5%B；1~2.4 min，5%~10%B；2.4~13.5 min，10%~32%B；13.5~18.5 min，32%~90%B；18.5~19 min，90%~5%B；19~21 min，5%B），流速0.3 mL·min^-1，进样量2 μL，柱温35 ℃，运用加热电喷雾离子源（HESI），扫描范围m/z 100~1 500，正、负离子模式检测。通过比较给药血浆和空白血浆的差异，对由肠道灌流并行采血制备得到的肠代谢、肝代谢血浆样品及灌胃给药方法制备得到的综合代谢血浆样品中的原型入血成分和代谢产物进行鉴定。结果 从肠代谢、肝代谢及综合代谢样品中分别检测到了76、53、74个化学成分，从上述不同血浆样品中共鉴定出100个化学成分，包括64种原型入血成分（34个生物碱类、12个萜类、9个有机酸类、6个黄酮类与3个其他类成分）与36种代谢产物，代谢产物生成过程中涉及的代谢反应主要有葡萄糖醛酸化、去葡萄糖基化、脱氢化与羟基化。结论 痛风定胶囊中化学成分在肠道与肝脏处会发生一系列代谢反应，生成大量代谢产物，其中生物碱类可能是其主要成分群，可为该制剂体内药效物质基础的系统阐释奠定基础。     

靶向CD33 的CAR修饰的NK92 细胞对CD33+急性髓系白血病细胞的杀伤作用

[摘要] 目的：根据抗CD33-scFv 序列构建CD33-CAR 修饰的NK92 细胞,探讨其对CD33+ 急性髓系白血病（acute myeloidleukemia,AML）细胞的杀伤作用。方法：通过基因合成以及分子克隆技术获得抗CD33-CAR片段,然后将其构建到慢病毒载体上,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染NK92 细胞,用流式细胞术检测细胞转染效率并通过嘌呤霉素筛选得到稳定表达抗CD33-CAR的细胞系CD33-CAR-NK92,利用钙黄绿素释放法检测该细胞的杀伤作用,ELISA法检测细胞因子IFN-γ 分泌的变化。结果：成功构建pCDH-CD33-CAR 重组慢病毒质粒,慢病毒转导后约18.7%的NK92 细胞表达CD33-CAR（命名为CD33-CARNK92细胞）,嘌呤霉素筛选后表达CD33-CAR的NK92 细胞比例约86.3%。CD33-CAR-NK92 细胞对CD33+AML细胞MOLM-13的杀伤作用明显高于未被基因修饰的NK92 细胞（P<0.01）,而两者对CD33-肿瘤细胞JURKAT 的杀伤作用没有明显差异（P>0.05）。效靶比为2∶1 共培养6 h 后,经CD33-CAR修饰的NK92 细胞相比未被基因修饰的NK92 细胞IFN-γ 的分泌水平明显升高[ （190.97±11.52）vs（88.41±2.75）pg/ml, P<0.01]。结论：CD33-CAR-NK92 细胞能特异性识别CD33 抗原并杀伤CD33+AML细胞,其杀伤作用显著高于未被基因修饰的NK92 细胞,为进一步开展靶向CD33 的CAR-NK92 细胞治疗AML的临床转化奠定了实验基础。     

小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶的抑制作用及血脑屏障透过性分析

目的 从药靶结合亲和力和动力学角度研究非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶的抑制作用;并在不同多成分背景下研究这类成分的血脑屏障透过性。方法 采用Ellman改良的光度检测法测量非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度（IC₅₀）;采用酶活恢复方法测定这类成分与乙酰胆碱酯酶结合的动力学参数（K_off）;采用超高效液相色谱-高分辨率质谱法（UPLC-HRMS）对各成分在不同背景下（药材与复方）透过血脑屏障到达脑组织的定性分析。结果 非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶有较强的抑制活性,其IC₅₀可达到纳摩尔级,并且多个生物碱成分具有优于阳性药盐酸多奈哌齐的药靶结合动力学特征（更小的K_off,P<0.01）,表明该类成分可在乙酰胆碱酯酶上持续更长时间的抑制;非洲防己碱等小檗碱类成分以单体形式、以及在黄连和黄柏药材提取物和复方黄连解毒汤的多成分背景下都可以透过血脑屏障到达脑组织。结论 非洲防己碱等小檗碱类成分对乙酰胆碱酯酶具有较强的抑制作用且在多种成分背景下均可入脑。这在药效物质基础层面上可以佐证临床上复方黄连解毒汤改善阿尔茨海默病的效果,为阐明复方黄连解毒汤的药效物质基础提供了数据支持。     

三种含水蛭中药制剂溶出曲线、体外抗凝活性与胃肠稳定性试验

目的：评估3种含水蛭中药制剂脑血康滴丸、活血通脉胶囊、脉血康胶囊体外溶出曲线、抗凝活性与胃肠稳定性。方法：采用4种p H值溶出介质和浆板法,及Lowry法测定3种含水蛭中药制剂不同时间点的水蛭多肽含量,计算溶出曲线,相似因子f₂评估溶出相似性;通过HPLC方法测定产物对硝基苯胺(p-nitroaniline,p NA)生成量,评估3种含水蛭中药制剂对凝血酶的抑制活性;测定3种含水蛭中药制剂与胃蛋白酶温孵之后凝血酶抑制活性的变化,以及枯草菌素、酪蛋白和脱氧胆酸钠加入后对制剂抗凝活性下降的改善。结果：在水介质中,脑血康滴丸和活血通脉胶囊的溶出行为相似(f₂=56.1);在其他溶出介质中,3种中药制剂溶出曲线均不相似,脑血康滴丸的溶出速度最快,且在测定时间内溶出量更多。水蛭多肽质量浓度均为10 mg·m L^–1时,脑血康滴丸、活血通脉胶囊、脉血康胶囊对凝血酶平均抑制率分别为97.9%、85.5%、59.4%。与胃蛋白酶温孵30 min后,脑血康滴丸、脉血康胶囊、活血通脉胶囊对凝血酶抑制活性平均保留率分别为64.2%、33.0%...     

基于UPLC-HRMS的大鼠体内栀子多成分序贯代谢研究

目的 采用序贯代谢方法结合超高效液相色谱-高分辨质谱联用（UPLC-HRMS）技术，鉴定给药后不同血浆样品中的原型成分与代谢产物，研究栀子化学成分在大鼠体内不同部位的代谢情况。方法 首先制备栀子提取液，然后通过肠灌流和封闭肠环法分别收集肠壁代谢、肠道菌群代谢、肝代谢的血浆样品，ig给药后收集综合代谢血液样品，结合UPLC-HRMS对各个样品所含成分进行分析与鉴别。结果 从栀子提取液中共检测到环烯醚萜苷类、萜类、有机酸类和栀子黄色素类等46个化学成分。序贯代谢研究结果表明，在肠代谢样品中检测到38个原型入血成分和22个代谢产物，肝代谢样品中检测到25个原型入血成分和16个代谢产物，综合代谢组样品中检测到14个原型入血成分和10个代谢产物。结论 基于序贯代谢方法，解析栀子在大鼠体内的原型入血成分与代谢产物，不同代谢部位成分的差异为阐明栀子代谢成分在体内的生物转化过程提供了依据。     

基于序贯代谢的五味子入血及脑脊液成分分析

目的 基于序贯代谢方法，结合液质联用技术鉴定五味子入血和入脑脊液原型成分和代谢产物。方法 雄性SD大鼠在灌胃给药和在体肠灌流给药后收集其综合代谢、肠代谢、肝代谢血浆和脑脊液样品，利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC Q-Exactive Orbitrap MS）分析并比对五味子提取液、空白血浆、含药血浆、空白脑脊液、含药脑脊液样品谱图差异，采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~7 min，95%B；7~12 min，95%~35%B；12~17 min，35%~15%B；17~20 min，15%~12%B；20~22 min，12%~5%B；22~23 min，5%B；23~25 min，5%~95%B；25~28 min，95%B），加热电喷雾离子化源（HESI），正、负离子检测模式，扫描范围m/z 100~1 500。根据化合物的保留时间、特征碎片、分子式及对照品信息鉴定五味子入血及脑脊液的原型成分和代谢产物。结果 从五味子提取物中共鉴定出42个化学成分，包含木脂素、黄酮、氨基酸、鞣质等化合物，其中以木脂素类化合物为主。从不同部位获取的血浆样品中共鉴定出27种原型入血成分与14种代谢产物；在脑脊液中共鉴定出15种原型成分和9种代谢产物；代谢产物生成过程中涉及的代谢反应主要有去甲基化、甲基化、去甲氧基化和羟基化等。结论 通过对五味子在大鼠体内的原型成分与代谢产物的系统鉴定，为后续更好地挖掘五味子中治疗中枢神经系统疾病的药效物质基础提供了数据支撑。     

内镜诊治重症胰腺炎术后残胰再坏死临床分析

重症急性胰腺炎（ｓｅｖｅｒｅａｃｕｔｅｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ，ＳＡＰ） ,临床表现凶险 ,病死率仍较高。目前采用手术切除、闭式引流等措施并不能阻止胰酶对胰腺的自溶作用 ,手术中认为有生机的胰组织于手术后也不能排除其不再发生坏死的可能性 ,因此对术后发生再坏死的组织如何加以处理显得十分关键。１９９２年１０月至１９９８年６月 ,我院采取比较安全、简便、创伤小用内镜经侧孔引流管［３］插入经咬切、网套技术清除残胰再坏死的组织 ,效果较好 ,现报告如下。资料与方法１．一般资料 :１９９２年１０月至１９９８年６月 ,我院经…