免疫调理对脓毒症大鼠中性粒细胞和淋巴细胞亚群的影响

目的研究免疫调理对脓毒症大鼠中性粒细胞和淋巴细胞及其亚群的影响,阐明免疫调理在脓毒症治疗中的作用。方法成功制作SD大鼠盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症模型,被分为假手术组、对照组和实验组,各20只。制作脓毒症模型后分别在3、12、24、48h采血待测。检查外周血涂片、白细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞计数和CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群。结果实验组白细胞计数和中性粒细胞计数比对照组明显降低,而淋巴细胞计数和CD8^＋T淋巴细胞水平比对照组明显升高,P〈0．05。实验组CD8们林巴细胞水平与对照组差异无统计学意义。结论免疫调理可以明显降低脓毒症大鼠白细胞和中性粒细胞,从而减轻炎症反应。免疫调理可以提高脓毒症大鼠淋巴细胞计数和CD4^＋T淋巴细胞,从而改善免疫功能。     

采用绿色荧光蛋白腺病毒载体表达HBsAgCTL优势表位肽MHC单链三聚体

目的 采用携带GFP报告基因腺病毒载体表达HBsAg细胞毒性T细胞(CIL)表位MHC单链三聚体,为增强HBV特异性免疫提供新方法.方法 构建小鼠MHC Ⅰ类分子(H-2Ld)限制的HBsAg优势CTL表位肽与MHCⅠ类分子重链(Ld)和β2M链(β2-microglobulin,β2微球蛋白)的单链三聚体(HBsAg-SCT).并将HBsAg-SCT亚克隆到GFP标记腺病毒载体,以HBsAg和OVA-SCT作为对照,转染293A细胞,包装产生携带HBsAs-SCT,HBsAg和OVA-SCT的重组腺病毒.结果 经双酶切和克隆测序鉴定,HBsAg-SCT能成功克隆到编码GFP标记的腺病毒载体,通过荧光显微镜观察到转染的293A细胞含有绿色荧光素蛋白.通过Western Blot进一步证实表达的重组蛋白HBsAg-SCT能与抗-腿抗体发生反应.结论 编码HBsAg-SCT的荧光蛋白腺病毒载体成功构建,并能在293A细胞中完整包装成重组腺病毒颗粒.     

采用绿色荧光蛋白腺病毒载体表达HBsAgCTL优势表位肽MHC单链三聚体

目的 采用携带GFP报告基因腺病毒载体表达HBsAg细胞毒性T细胞(CIL)表位MHC单链三聚体,为增强HBV特异性免疫提供新方法.方法 构建小鼠MHC Ⅰ类分子(H-2Ld)限制的HBsAg优势CTL表位肽与MHCⅠ类分子重链(Ld)和β2M链(β2-microglobulin,β2微球蛋白)的单链三聚体(HBsAg-SCT).并将HBsAg-SCT亚克隆到GFP标记腺病毒载体,以HBsAg和OVA-SCT作为对照,转染293A细胞,包装产生携带HBsAs-SCT,HBsAg和OVA-SCT的重组腺病毒.结果 经双酶切和克隆测序鉴定,HBsAg-SCT能成功克隆到编码GFP标记的腺病毒载体,通过荧光显微镜观察到转染的293A细胞含有绿色荧光素蛋白.通过Western Blot进一步证实表达的重组蛋白HBsAg-SCT能与抗-腿抗体发生反应.结论 编码HBsAg-SCT的荧光蛋白腺病毒载体成功构建,并能在293A细胞中完整包装成重组腺病毒颗粒.     

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目的 探讨连续性血液净化(CBP)治疗普通外科严重感染综合征的临床价值.方法 回顾性分析中山大学附属第一医院SICU在2006-01-01-2007-12-31期间52例接受CBP治疗的严重感染综合征(severe sepsis)病人资料.结果 CBP治疗时间(13.5±29.4)d,在CBP治疗期间分别采用低分子质量肝素抗凝11例(21.2%)、体外肝素抗凝13例(25.0%)、无抗凝19例(36.5%),未发生严重出血并发症.52例病人好转16例(30.8%),自动放弃治疗19例(36.5%),ICU内死亡17例(32.7%).抗凝方式、手术类型、感染部位等对CBP疗效影响差异无统计学意义.结论 CBP是外科严重感染综合征病人重要治疗措施之一,治疗过程中应采取个体化抗凝方案.     

小吸痰管气管内输氧支持下气管异物取出的治疗

[目的]观察全麻下小吸痰管肺内输氧在小儿气管,支气管异物取出术中的临床效果。[方法]患儿进手术室建立静脉通道后缓慢注射丙泊酚等静脉复合麻醉药物,术中经声门插入直径3mm小吸痰管到气管内输氧,根据缺氧程度调节氧流量1～4L/min。[结果]术中麻醉平稳、缺氧状况明显改善,34例气管、支气管异物的患儿在静脉复合全麻下通过小吸痰管肺内输氧均顺利完成手术。[结论]全麻下通过小吸痰管肺内输氧在小儿气管、支气管异物取出术操作简单、安全、有效,值得推广。     

苯磺酸氨氯地平治疗轻中度高血压的疗效分析

目的探讨在社区应用苯磺酸氨氯地平治疗轻中度高血压的治疗效果。方法选取2011年1月～2012年1月丽水市莲都区岩泉街道社区卫生服务中心收治的轻中度高血压患者62例,随机分为两组。观察组给予苯磺酸氨氯地平治疗,对照组给予硝苯地平治疗,对比两组的降压效果及药物副作用。结果观察组显效23例,有效6例,总有效率93.54%,疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);药物副作用比较,观察组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苯磺酸氨氯地平治疗轻中度高血压疗效显著且药物副作用发生率低,值得推广。     

临床生物化学及检验课程问题式实验教学方法的实践

目的:为适应临床检验诊断学不断发展的需求。方法:我院在2007级检验医学专业临床生物化学及检验实验课采用了问题式教学方法。结果:比较2007级和2006级学生实验考核成绩,2007级学生在基本操作、实验理论及技能考核等成绩均优于2006级学生。结论:问题式教学方法推动了实验课的教学,提高了教学质量和教学效果。     

改良3′ cDNA末端快速扩增PCR法筛选扇贝抗菌肽基因

应用改良3′ cDNA末端快速扩增PCR法（rapid amplification of cDNA ends,RACE）筛选扇贝抗菌肽基因。方法 设计M13和T7启动子分别修饰的基因特异性引物（gene special primer,GSP）、锚定引物,提取扇贝血淋巴总RNA进行改良3′ RACE和5′ RACE,获得cDNA准全长序列并在GenBank中进行同源性比较。结果 从扇贝血淋巴中获得3个cDNA的3′端序列基因和1个准全长cDNA（544 bp）,在GenBank中未发现与之高度同源的基因。结论 从扇贝血淋巴中获得的1个准全长cDNA、3个cDNA的3′端序列可能属于新基因。应用改良3′ RACE能钓取含抗菌肽保守序列的新基因片段,该方法可行。     

扇贝防御素基因改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应筛选方法的研究

目的应用改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应(RACE)筛选扇贝抗菌肽基因,寻找基于基因序列同源性的双壳类抗菌肽(AMP)的筛选方法。方法 TRIzol法提取扇贝血淋巴中总RNA。根据贻贝抗菌肽的保守序列设计基因特异性简并引物,进行改良5′RACE钓取可能防御素基因cDNA的5′端序列、AT克隆、DNA测序和同源性分析。结果采用改良5′RACE从扇贝血淋巴RNA中得到多个未知基因的cDNA 5′端序列,挑选600bp以下的基因片段进行AT克隆和DNA测序后得到3个插入片段序列,其长度分别为257、275和511bp。通过BLAST程序搜索GenBank核酸数据库,未发现与之高度同源的基因。结论从扇贝血淋巴中获得的3个5′端cDNA序列可能属于新的基因。应用改良5′RACE能钓取含防御素保守序列的新基因片段,由此表明此方案具有可行性。     

改良大鼠肺微血管内皮细胞原代培养技术及细胞鉴定

目的 改进大鼠肺微血管内皮细胞的原代培养方法,并对所培养的原代细胞进行鉴定.方法 应用SD大鼠的外周肺组织,进行大鼠肺微血管内皮细胞的原代培养.从动物选取、取材、肺灌注、植块贴壁、培养基及添加物的选择等方面对肺微血管内皮细胞原代培养技术方法进行改进.从细胞形态学特征,免疫组织化学检测血管内皮细胞表面标志物（CD31抗原和Ⅷ因子相关抗原的表达）,荧光显微镜观察异硫氰酸荧光标记植物凝集素与肺微血管内皮细胞特异性结合情况等方面鉴定所培养的肺微血管内皮细胞.流式细胞仪检测细胞纯度,噻唑蓝测量细胞生长曲线.结果 原代培养肺微血管内皮细胞成多角形,融合为单层后呈典型的鹅卵石或铺路石样生长,传代培养后可变为梭形呈漩涡样生长或聚集生长.免疫组织化学显示细胞CD31和Ⅷ因子相关抗原的表达阳性;异硫氰酸荧光标记植物凝集素结合试验阳性.细胞生长状态良好、细胞纯度达93.2％.结论 改进后的原代培养方法简便、可靠,获得的肺微血管内皮细胞污染少、纯度高,状态良好,保持了内皮细胞的结构和特性.