大鼠肝纤维化进程中原代Kupffer细胞吞噬能力及表型变化特征研究

目的考察肝纤维化不同阶段原代Kupffer细胞吞噬能力及M1型和M2型Kupffer细胞占比的变化趋势。方法 SD大鼠腹腔注射CCl4,每周2次,连续注射8周诱导肝纤维化。分别于第0、2、4、8周分离肝脏Kupffer细胞。采用墨汁吞噬实验考察Kupffer细胞的吞噬能力,采用ELISA检测Kupffer细胞中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1的含量,采用CD68抗体、CD86抗体和CD163抗体对肝脏巨噬细胞、M1型Kupffer细胞、M2型Kupffer细胞进行标记,流式细胞法分离不同的Kupffer细胞并计数M1型和M2型Kupffer细胞占比。结果模型大鼠炎症损伤加重,第8周呈现明显的纤维化特征。模型大鼠Kupffer细胞吞噬能力持续降低。M1型Kupffer细胞及IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α呈现先升后降的趋势,在第4周达到最高值。M2型Kupffer细胞及IL-10和TGFβ1则持续升高。结论肝纤维化形成过程中,Kupffer细胞吞噬能力持续降低。M1型和M2型Kupffer细胞均参与了肝纤维化发生发展过程。     

巨细胞病毒与2型糖尿病视网膜病变关系的临床研究

目的:探讨巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染与2型糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的关系。方法:采用聚合酶链反应(chain reaction technique,PCR)技术分别检测T2DM患者86例(单纯T2DM组40例、视网膜病变组46例)以及正常对照组30例外周血中的CMV-DNA,测定血浆内皮素(endothelin,ET)和一氧化氮(nitricox-ide,NO)。结果:T2DM视网膜病变组CMV-DNA检测阳性率(65.2%)明显高于单纯T2DM组(35.0%)和对照组(13.3%,P<0.01),T2DM视网膜病变组ET、NO含量与单纯T2DM组和对照组比较也有显著差异。结论:CMV感染与糖尿病视网膜病变的发生发展有关,CMV感染可能加重糖尿病视网膜病变。     

刺五加多糖的抗氧化损伤作用研究

摘要 目的：研究刺五加多糖（Acanthopanacis senticosi polysaccharides，ASPS）对大鼠海马细胞有无抗氧化损伤作用，并探讨其可能机制。方法：运用海马神经细胞原代培养技术，采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型。观察细胞形态学变化；MTT法测定细胞活性；免疫组化法检测细胞中P53蛋白表达；检测细胞外液中的乳酸脱氢酶（LDH）的活力，细胞匀浆液中的过氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）产生。结果：形态学观察显示：与模型组比较，ASPS组细胞损伤程度明显减轻；ASPS组细胞活性（0.46）比模型组细胞活性（0.36）高(P＜0.01) , ASPS组P53表达量较低而模型组表达量较高； LDH、NOS活力及MDA生成量ASPS组明显低于模型组，但SOD活力ASPS组显著高于模型组。结论：ASPS能提高海马神经细胞的抗氧化能力，并具有一定的浓度依赖性。     

紫外线照射对血管内皮细胞的损伤效应

目的探究不同剂量紫外线照射对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）的细胞形态、细胞凋亡率、活性氧（reactive oxygen species,ROS）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的影响。方法实验分正常组和3个不同剂量辐照组,辐照组分别采用10J·m^-2、20J·m^-2、40J·m^-2紫外线照射血管内皮细胞,通过流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测各组细胞凋亡率,荧光试剂盒检测ROS的水平和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定VEGF和bFGF的含量。结果与正常组相比,细胞经不同剂量紫外照射24 h后,细胞凋亡率随着照射剂量的增加而升高;ROS、VEGF、bFGF的含量随着照射剂量的增加而升高。结论紫外照射对血管内皮细胞有一定程度的损伤效应,可能与诱导细胞凋亡,释放ROS和激活VEGF和bFGF有关。     

刺五加多糖对海马神经元抗氧化酶系统的影响

目的 研究刺五加多糖（Acanthopanacis senticosi polysaccharides,ASPS）对大鼠海马神经元抗氧化酶系统的影响. 方法 运用海马神经细胞原代培养技术,采用过氧化氢（H₂O₂）诱导建立细胞氧化损伤模型. 实验共分为6组：阴性对照组、模型组和4个ASPS组（终浓度为10.00,5.00,2.50,1.25 μg.mL^-1）. 观察细胞形态学变化; MTT法测定细胞活性; 免疫组化法鉴定海马神经元,化学比色法测定细胞内超歧物过氧化物酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力和丙二醛（MDA）含量. 结果 形态学观察显示：与模型组比较,ASPS组细胞损伤程度明显减轻; ASPS组细胞活性比模型组细胞活性高（P＜0.01）,SOD、CAT、GSH Px活力ASPS组明显高于模型组,但MDA的含量ASPS组显著低于模型组. 结论 ASPS能提高海马神经元的抗氧化酶的活力,并对海马神经元氧化损伤有保护作用.     

成体神经干细胞脑内移植对脑外伤大鼠神经功能的影响

目的 观察脑内移植成体神经干细胞对脑外伤大鼠中枢神经功能的影响.方法 将60只Wistar大鼠随机分为5组,正常组(A)、模型组(B)、假手术组(C)、PBS移植组(D)、干细胞移植组(E).Morris水迷宫实验测试各组大鼠的学习记忆能力;免疫组织化学及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑组织中脑源性神经生长因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)的表达.结果与A组比较,B组大鼠寻找隐形平台的时间明显延长(P<0.01),脑组织中BDNF(27.70±1.65)ng/g蛋白、NGF(59.80±9.40)ng/g蛋白含量下降显著(P<0.01),模型复制效果理想;与B组比较,E组大鼠学习及功能明显改善,脑内BDNF(49.30±2.87)ng/g蛋白、NGF(88.50±9.23)ng/g蛋白的表达量上升,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成体神经干细胞的脑内移植能明显恢复外伤大鼠中枢神经功能.

Abstract：

Objective To study the neuroprotetive effect of dault neural stem cells intracerebral implantation to rats subjected to traumatic brain injury.Methods Sixty Wistar rats were divided into 5 groups randomly: normal group ( A ),model group ( B),sham-operated group ( C ),PBS transplated group (D),neural stem cells transplated group (E).Morris maze method was adopted to observe the impact on the learning and memory.Immunohistochemisty and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)were used to detect the expression of brain derived neurotrophic factor (BDNF) and nerve growth factor (NGF) in brain issue.Results As compared with group A,in Morris maze experiment,time to reach the end point of the maze in group B was significantly prolonged ( P ＜ 0.01 ),and the content of BDNF (27.70 ± 1.65 ) ng/g prot and NGF ( 59.80 ± 9.40 ) ng/g prot were decreased significantly ( P ＜ 0.01 ).As compared with group B,the function of learning and memory was obviously improved,and the expression of BDNF (49.30 ±2.87) ng/g prot and NGF (88.50 ±9.23) ng/gprot in brain issues were statistically increased in group E (P ＜0.01 ).Conclusion Transplantation of adult neural stem cells can ameliorate learning and memory deficits following traumatic brain injury in rats.     

刺五加多糖对H_2O_2损伤的海马神经元表达NF-κB的影响

目的研究刺五加多糖(ASPS)对氧化应激损伤的海马神经元表达核转录因子-κB(NF-κB)的影响,进一步探讨ASPS对海马神经元的保护作用。方法从新生大鼠脑分离海马,其神经元经原代培养后分为阴性对照组、损伤模型组(1 mmol/LH_2O_2诱导)、ASPS干预组(该组按ASPS10、5、2.5μg/ml的终浓度又分为3个亚组)。采用H_2O_2复制海马神经元氧化应激损伤模型。用免疫组化法和逆转录PCR法检测NF-κB的表达。同时观察各组海马神经元的形态学变化。结果与损伤模型组比较,ASPS干预组神经元损伤程度明显减轻。NF-κB在10μg/ml和5μg/ml ASPS干预组中的表达水平明显降低。结论 ASPS能明显减少受损海马神经元NF-κB的表达,对海马神经元有明显的保护作用。     

刺五加多糖对H_2O_2损伤的海马神经元表达c-fos和p53基因的影响

目的研究刺五加多糖(ASPS)对氧化应激损伤的海马神经元表达c-fos和p53基因的影响,进一步探讨ASPS对氧化应激损伤海马神经元的保护机制。方法从新生大鼠分离出海马,其神经元经培养后分为阴性对照组、损伤模型组(1 mmol/LH_2O_2诱导)和ASPS干预组(该组按ASPS 10、5、2.5μg/ml的终浓度又分为三个亚组)。采用H_2O_2建立海马神经元氧化应激损伤模型。用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测各组海马神经元活性,免疫组化法检测其c-fos和p53的表达。结果 ASPS干预组神经元活性显著高于损伤模型组(P0.05)。c-fos和p53在ASPS干预组神经元中的表达水平较损伤模型组明显降低(P0.05)。结论 ASPS能够减少受损海马神经元c-fos和p53基因的表达,增强其活性,对海马神经元有明显的保护作用。     

人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗细胞模型的建立

背景:有研究表明血管内皮可能是胰岛素抵抗发生的首要环节。目的:采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗模型。方法:以人脐静脉内皮细胞系为研究对象,应用含不同浓度胰岛素(50,40,30,20,10,1,0.1,0.01U/L)的DMEM培养基与人脐静脉内皮细胞共同培养12,24,36,48,72h,并设置正常组,光学显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法测定各组细胞活性;用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法法鉴定胰岛素抵抗细胞模型。结果与结论:与正常组比较,当胰岛素浓度大于40U/L,其作用时间大于48h时,细胞形态受损严重,细胞活性显著下降(P<0.01);当胰岛素浓度小于20U/L,作用时间小于36h时细胞形态无明显损伤(P>0.05)。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法实验表明,在30U/L的胰岛素刺激48h条件下,培养液中残存葡萄糖浓度显著高于正常组细胞(P<0.01)。证实,用含30U/L胰岛素的培养基培养48h的人脐静脉内皮细胞细胞可产生胰岛素抵抗。