刺五加多糖对氧糖剥夺诱导神经元氧化损伤的保护作用

目的 探讨刺五加多糖对氧糖剥夺诱导神经元氧化损伤的保护作用.方法 培养PC12细胞,采用氧糖剥夺(OGD)及厌氧袋相结合法建立缺血诱导神经细胞继发损伤模型,电镜观察细胞形态,应用比色法测定细胞外液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、MDA含量和SOD酶活力.结果 与模型组比较,刺五加多糖干预后PC12细胞氧化损伤明显减轻,细胞SOD酶活力提高,细胞内MDA含量及LDH释放量降低.结论 刺五加多糖对OGD引起的神经元样细胞的损伤具有保护作用,其作用机制可能与刺五加多糖具有抗氧化、清除自由基的作用有关.     

兔脂肪干细胞的多向诱导分化

背景:研究表明脂肪干细胞体外特定诱导条件下实现了向骨、软骨、脂肪、肌肉、心肌细胞、神经细胞、上皮细胞以及肝细胞方向分化。目的:进一步验证脂肪干细胞的分离培养方法及其基本生物学特性,并对细胞表型进行鉴定。方法:从成年日本大耳白兔的颈背部分离脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化法获取原代脂肪干细胞并培养,待细胞生长至约80%融合时传代,用倒置显微镜逐日观察细胞生长情况和形态特征,描绘其生长曲线;流式细胞技术检测细胞表面标记物;将脂肪干细胞行成骨和成脂诱导,分别通过碱性磷酸酶、茜素红、VonKossa(钙结节)染色和油红O染色检测脂肪干细胞成骨分化潜能和成脂分化潜能,以未诱导细胞作为对照组。结果与结论:体外培养的脂肪干细胞呈梭形纤维样细胞形态,增殖活跃,多次传代后细胞仍保持较强增殖能力,生长曲线呈"S"型。流式细胞仪检测第3,6代脂肪干细胞均高表达CD29、CD44,阳性率超过90%;低表达CD34、CD45阳性率不超过5%,且CD29、CD44随着传代表达逐渐增高,CD34、CD45随细胞培养时间延长表达逐渐降低。成骨诱导实验组碱性磷酸酶、茜素红、vonKossa染色阳性,成脂诱导实验组油红O染色阳性,对照组均为阴性。结果证实,兔脂肪干细胞在体外易于分离培养,保持稳定增殖,并表达间充质干细胞相关的表型,特定条件下可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。     

莲房原花青素对D-半乳糖衰老小鼠脑组织抗氧化的作用

目的：探讨莲房原花青素（lotus seedpod procyanidins,LSPC）对D-半乳糖衰老小鼠脑组织抗氧化系统的影响。方法：雄性健康昆明种小鼠60只,随机分为对照组、衰老模型组、ESPC低剂量组（15mg·ml^-1）、LSPC中剂量组（30mg·ml^-1）和LSPC高剂量组（60mg·ml^-1）。采用小鼠皮下注射D-半乳糖（120mg·kg^-1·d^-1）,连续注射8周,建立小鼠衰老模型,ISPC组造模同时灌胃给予ISPC,qd,连续给药8周。化学比色法检测5组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和丙二醛（MDA）含量。结果：衰老模型组与对照组相比,小鼠脑组织SOD和GSH—Px活性明显降低,MDA含量明显增高（P〈0．01）。与衰老模型组相比较,LSPC能明显提高衰老小鼠脑组织中SOD活性和GSH—Px活性（P〈0．01）,能减少MDA含量（P〈0．01）。结论：LSPC对D-半乳糖所致衰老小鼠具有明显的抗氧化作用。     

刺五加多糖对H2O2诱导海马神经元凋亡及凋亡基因的影响

目的 观察刺五加多糖（Acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS）对H2O2诱导大鼠海马神经元凋亡及凋亡基因的影响,并探讨其可能机制。 方法 运用海马神经细胞原代培养技术,采用H2O2诱导建立细胞凋亡模型。观察细胞形态学变化; TUNEL法检测H2O2诱导大鼠海马神经元凋亡;免疫组化法检测细胞中P53蛋白表达。结果 形态学观察显示：与模型组比较,ASPS组细胞损伤程度明显减轻; TUNEL 法显示ASPS预处理组细胞阳性率明显高于模型组细胞;ASPS组P53表达量较低。结论 ASPS 能够提高海马神经细胞的抗凋亡能力并下调P53基因表达。     

JAK-STAT信号通路、IL-1β和IL-6在X射线辐照诱导PC12细胞损伤中的调控作用

目的:探究JAK-STAT信号通路及炎症因子IL-1β、IL-6是否参与X射线诱导的PC12细胞辐射损伤。方法:采用X射线分别以2、4和8 Gy剂量照射PC12细胞,照射后24 h通过酶联免疫法检测IL-1β和IL-6的表达水平;Western blot检测p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3和p-STAT5的蛋白水平。结果:与正常对照组相比,细胞经不同剂量X射线照射24 h后,IL-1β和IL-6的表达水平均升高,且与辐照剂量呈剂量依赖性;p-JAK1、pJAK2、p-STAT1、p-STAT3和p-STAT5的蛋白水平均升高,且上调程度与辐照剂量呈剂量依赖性。结论:JAK-STAT信号通路、IL-1β和IL-6可能参与X射线照射诱导PC12细胞的损伤调控。     

环磷酰胺诱导家兔卵巢早衰动物模型的建立和评价

目的比较不同注药方式下建立环磷酰胺诱导家兔卵巢早衰动物模型的方法,寻找最佳造模方式,为进一步研究卵巢早衰提供更为适用的实验模型。方法 21只家兔随机分四组,正常对照组3只,不作任何处理(A组);模型一组6只,50 mg/kg环磷酰胺溶液注射1 d(B组);模型二组6只,50 mg/kg连续注射2 d(C组);模型三组6只,首日注射50 mg/kg,以后按照8 mg/kg连续注射14 d(D组)。称量各组家兔体重和卵巢重量,描述注药14 d内的体重变化,分析卵巢指数;HE染色观察卵泡形态,光镜下计算各级卵泡数;TUNEL法观察分析细胞凋亡情况;ELISA法分析血清雌二醇(E2)变化。结果体重:B、C组体重无明显变化(P0.05);D组家兔生长受限(P0.05),死亡率高。卵巢指数:C组卵巢指数明显小于A组(P0.05)。各级卵泡情况:B、C组原始卵泡和初级卵泡异常率均升高(P0.017),其中C组原始卵泡异常率升高更明显(P0.017),而两组初级卵泡异常率差异无显著性(P0.017)。A、B、C三组次级、窦状卵泡异常率差异无显著性(P0.05)。细胞凋亡率:细胞凋亡主要发生在卵泡中的颗粒细胞上,B、C组凋亡率均明显高于A组(P0.05),且C组凋亡率高于B组(P0.05)。血清E2值:B组第7天E2分泌达高峰,7 d后逐渐下降,E2分泌量第7天明显高于第35天(P0.05);C组E2值持续下降,第0天明显高于第35天(P0.05)。结论以50 mg/kg剂量连续注射2 d是建立环磷酰胺诱导家兔卵巢早衰模型的最佳造模方式。     

多次X线暴露所致PC12细胞的氧化性损伤

目的 探讨多次X 线暴露所致PC12 细胞的氧化性损伤.材料与方法 采用X 线以50、150、450、1 350 mGy 剂量分别照射PC12 细胞,检测辐照后细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果 与正常组比较,50、150、450 mGy 单次照射后细胞活力均＞100%;1 350 mGy 照射后细胞活力＜100%.各剂量组细胞活力随照射次数的增多而逐渐减小,且与照射累积剂量呈较好的相关性.150、450 mGy 剂量组细胞中SOD活性随照射次数的增多而减小;MDA 含量随照射次数的增多而增多.结论 多次中低剂量X 线暴露对PC12 细胞有氧化性损伤作用,损伤程度与辐照剂量存在一定的量效关系.     

miR-124靶向镁转运蛋白1调控活化后人T细胞功能耗竭

目的研究miR-124靶向镁转运蛋白1(MagT1)可否调控活化后T细胞功能耗竭。方法 1)分离外周血单个核细胞,用IFN-γ、IL-2、抗-CD3抗体、抗-CD28抗体和IL-1α活化T细胞;流式细胞仪检测T细胞活化标记分子CD25和CD69所占的比例。2)构建miR-124/miR-124 sponge慢病毒载体;包装慢病毒后感染活化T细胞,用RT-qPCR检测感染后T细胞内miR-124和MagT1基因表达。3)生物信息学分析miR-124与MagT1的靶向位点,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。4)Western blot法检测慢病毒感染前后T细胞MagT1和PD-1蛋白水平。5)CCK8法检测慢病毒感染前后T细胞增殖能力;ELISA法检测细胞T分泌细胞因子TNF-α和TGF-β的能力。结果流式细胞仪检测表明T细胞活化成功。RT-qPCR检测表明慢病毒构建成功,miR-124/miR-124 sponge载体分别显著上调或下调miR-124的表达(P0.01)。双荧光素酶报告基因系统证实miR-124靶向MagT1 3′UTR并抑制其表达。Western blot表明miR-124过表达组MagT1蛋白水平低于对照组(P0.05),PD-1蛋白水平高于对照组(P0.05),抑制miR-124后,MagT1蛋白水平高于对照组(P0.05),PD-1蛋白水平低于对照组(P0.05)。miR-124过表达使T细胞增殖能力和分泌TNF-α能力显著降低,而抑制miR-124使T细胞增殖能力和分泌TGF-β能力显著升高(P0.01)。结论 miR-124可以负向调节靶基因MagT1的表达,并对活化后T细胞功能耗竭具有重要的调节作用。     

芪连汤颗粒对糖尿病肾病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体-r表达的影响

目的 探讨芪连汤颗粒对糖尿病肾病(DN)大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体-r(peroxisome proliferators -activated receptor r,PPAR-r)表达的影响. 方法SD大鼠55只,随机分为正常对照组10只,45只建立DN大鼠模型,并随机分为模型对照组、高剂量药物组,低剂量药物组,每组15只. 高、低剂量药物组分别灌胃给予芪连汤颗粒溶液10,5 g&#8226;kg^-1&#8226;d^-1. 正常对照组和模型对照组灌胃给予等量0.9%氯化钠溶液,连续4个月. 取大鼠抗凝全血,分离单核细胞提取总蛋白,取动物肾脏组织总蛋白,用Western blot方法检测PPAR r与GAPDH比值(P/G). 结果 正常对照组单核细胞内P/G值为(0.857 6±0.069 3),肾脏内P/G值为(0.912 6±0.066 7). 模型对照组单核细胞内P/G值为(0.621 9±0.095 0),肾脏内P/G值为(0.706 2±0.097 0). 高剂量药物组单核细胞内P/G值为(0.806 3±0.081 0),与模型对照组比较差异有显著性(P<0.05),肾脏内P/G值为(0.827 7±0.062 0),与模型对照组比较差异有显著性(P<0.05). 低剂量药物组单核细胞内P/G值为(0.764 8±0.087 0),与模型对照组比较差异有显著性(P<0.05),肾脏内P/G值为(0.785 7±0.099 0). 结论 芪连汤颗粒能够保护DN大鼠,可能通过激活单核细胞系统和肾脏内PPAR r表达,对DN大鼠的全身炎症状态进行调节.