拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效和基因变异的研究

目的就拉米夫定治疗慢性乙型肝炎(CHB)1a的疗效、HBV DNA P基因变异特点及编码的蛋白质的二级结构加以研究.方法 提取HBV DNA后,经半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增,PCR产物自动测序.总结拉米夫定的疗效、P基因变异出现的时间,用SAS软件分析影响疗效的因素.用DNA STAR软件的CLUSTAL V方法对HBV DNA P基因片段的核苷酸和氨基酸差异、变异类型进行分析.用DNAclub、DNAsis 软件分析出现P基因变异前后所编码的蛋白质的二级结构的差异.结果 按照ALT水平分组,各组间促进ALT正常化没有明显差异.在治疗后6个月血清标本中未发现YMDD变异,在治疗后12个月血清标本中发现2例YMDD变异.在对照组中发现了1例L528M变异;在治疗后12个月发现了2例YVDD变异,还发现了2例只有L528M的变异.在发生变异后,YMDD的转角结构变为折叠,L528M的转角结构没变.结论 1a的拉米夫定治疗可以有效抑制HBV DNA的复制.YMDD变异发生在拉米夫定治疗6个月之后,L528M变异可单独在体内存在,未接受抗病毒治疗的慢性HBV携带者可发生L528M变异.发生YMDD变异的P基因编码的蛋白质二级结构由转角变为折叠.L528M变异不影响蛋白质二级结构.     

不同途径接种乙脑毒prME蛋白编码基因DNA疫苗所致BALB/c鼠的细胞免疫

目的:研究经不同途径接种乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗所诱导的细胞免疫。方法:将乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗(命名为pJME)分别以肌注、滴鼻两种免疫方式免疫BALB/c鼠,流式细胞仪检测脾脏CD4 /CD8 T淋巴细胞亚群,乳酸脱氢酶释放实验测定脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果:pJME肌注组与滴鼻组免疫鼠CD4 T淋巴细胞百分比(30.91 0.72)%、(27.89 0.42)%,均高于灭活疫苗与载体肌注组(23.73 0.17)%、(23.78 0.21)%(P<0.05),肌注组显著高于滴鼻组(P<0.05);而CD8 T淋巴细胞百分比(14.62 0.25)%、(13.73 0.50)%,也均高于灭活疫苗和载体肌注组(10.80 0.39)%、(11.97 0.06)%(P<0.05),肌注组与滴鼻组无显著差异(P>0.05);两组有明显CTL效应(pJME肌注组29.1%,pJME滴鼻组17.1%),明显高于载体肌注组6.0%,pJME肌注组明显优于滴鼻组。结论:pJME以两种途径免疫鼠时可诱导明显细胞免疫反应。     

黄病毒DNA疫苗的实验研究进展

黄病毒科黄病毒属病毒种类繁多,其结构与功能特点相似。黄病毒所致疾病以其不同的病毒株而分布于世界诸多国家或地区,我国以流行性乙型脑炎与登革热为常见疾病。目前仍有一些黄病毒疾病(如登革热等)尚难采用灭活或减毒活疫苗方式进行有效控制,即使部分疾病(如流行性乙型脑炎等)得到了有效控制,但是上述疫苗所带来的诸多问题仍一直为人们所关注。近来,DNA疫苗的研究在黄病毒疫苗领域甚为活跃,许多黄病毒株可建立合适的感染动物模型,更为此方面研究带来了质的飞跃。本文以流行性乙型脑炎与登革热病毒为主要论述主体,对近年黄病毒DNA疫苗实验研究现状作了综述。     

慢性乙型肝炎e抗原阳性和阴性患者细胞免疫功能的研究

应用间接夹心ELISA法检测了59例慢性乙型肝炎患者血清IL-2,对其中27例用A-PAAP法检测T细胞亚群。结果表明慢性乙型肝炎患者较正常对照组CD~-细胞数明显降低,CD_8~+细胞数明显增高,CD_4~+/CD_8~+比值和IL-2水平均显著降低。HBeAg阳性组与抗-HBe阳性组比较,在CD_8~+细胞数增加和CD_4~+/CD_8~+比值降低方面均有显著差异。HBeAg阳性组较HBeAg/抗-HBe阴性组T细胞亚群和IL-2变化亦有显著差异,且IL-2与CD_4~+细胞数呈正相关。通过对8例HBeAg阴转过程的观察,发现多有IL-2水平增高,且IL-2水平与ALT水平、HBV DNA及临床症状有良好的一致性,但病程中出现抗-HBe阳性慢性乙型肝炎患者中2/4例出现IL-2升高、ALT下降及HBV DNA阴转。提示抗-HBe的出现不一定意味着机体免疫力的提高和疾病的缓解。     

流行性乙型脑炎病毒结构蛋白编码基因的重组构建

目的:建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)C、prME,E等结构蛋白编码基因克隆.方法:病毒感染C6/36细胞,RT-PCR法依次获取该病毒结构蛋白基因并进行DNA测序分析,PCR克隆法将PCR产物分别构建于真核表达载体pcDNA 3.1的BamHI与EcoRI酶切位点并依次命名为pJC、pJME与pJE,通过DNA测序、电泳以及限制性内切酶分析加以鉴定.结果:JEV C、prME与E基因片段分别为380、2001以及1 500bp,各基因测序结果与发表的JEV JaGAr-01株相对应序列相一致,从重组质粒释出的插入子分别与各基因大小相符合.结论:pJC、pJME与pJE重组质粒分别含有C、prME与E蛋白编码基因.     

追踪管理法在静脉药物配置中心质量管理中的应用

目的：探讨追踪管理法在静脉药物配置中心质量管理中的作用。方法：成立追踪管理小组,对质量问题进行个案追踪和系统追踪,通过修订质量控制标准、修改完善相关制度、流程,并进行人员培训和效果评价,避免同类事件再次发生。结果：应用追踪管理法后,静脉药物配置中心错误发生率显著下降,工作质量满意度明显提高,由实施前的93．6％上升为98．5％。结论：追踪管理法对临床用药安全具有重要作用,能使质量标准、制度和流程得到持续改进,管理者理念发生转变,有效降低差错发生,保障患者用药安全。     

院前诊断及区域协同救治对ST段抬高型心肌梗死患者心肌总缺血时间的影响

目的探讨不同院前诊断及区域协同救治对ST段抬高型心肌梗死患者心肌总缺血时间的影响。方法以杭州师范大学附属医院为中心,联合"120"急救中心、基层非经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)医院,利用微信平台和胸痛中心远程监控系统建立不同程度的区域协同救治模式。将基层非PCI医院转院患者作为观察组(115例),"120"急救中心送入患者作为对照组1(53例),自行入院患者作为对照组2(61例),比较三组患者的心肌总缺血时间即发病至球囊扩张(symptom to balloon,S-to-B)时间、发病至首次医疗接触(symptom onset-to-first medical contact, S-to-FMC)时间、首次医疗接触至球囊扩张(first medical contact to balloon,FMC-to-B)时间、进门至球囊扩张(door to balloon,D-to-B)时间、进入导管室至球囊扩张(cathlab door to balloon,C-to-B)时间。结果观察组、对照组1、对照组2三组比较,S-to-B时间[(449.26±243.91)min比(174.19±64.33)min比(374.38±901.81)min,P=0.004]、FMC-to-B时间[(249.24±150.90)min比(104.40±21.80)min比(85.48±32.74)min,P 0.001]、D-to-B时间[(65.21±22.16)min比(76.70±20.32)min比(90.16±32.79)min,P 0.001]差异均有统计学意义;而S-to-FMC时间、C-to-B时间差异均无统计学意义(均P 0.05)。组间两两比较, S-to-B时间观察组大于对照组1 [(449.26±243.91)min比(174.19±64.33)min,P=0.003],差异有统计学意义,而观察组与对照组2、对照组1与对照组2相比,差异均无统计学意义(均P 0.05);FMC-to-B时间观察组大于对照组1 [(249.24±150.90)min比(104.40±21.80)min,P 0.001]、观察组大于对照组2 [(249.24±150.90)min比(85.48±32.74)min,P 0.001],差异均有统计学意义,而对照组1与对照组2相比,差异无统计学意义(P 0.05); D-to-B时间观察组少于对照组1 [(65.21±22.16)min比(76.70±20.32)min,P=0.019]、观察组少于对照组2 [(65.21±22.16)min比(90.16±32.79)min,P 0.001]、对照组1少于对照组2 [(76.70±20.32)min比(90.16±32.79)min,P=0.014],差异均有统计学意义。结论不同院前诊断及区域协同救治主要影响ST段抬高型心肌梗死患者从发病至进入导管室的过程,进而影响心肌总缺血时间。这就要求临床医师不断探索新策略,进一步普及院前诊断和完善区域协同救治模式,切实提高急救效率,缩短心肌总缺血时间。     

护理干预对减轻美施康定所致便秘的效果观察

[目的]探讨护理干预对减轻美施康定引起便秘的效果.[方法]将101例应用美施康定的癌症病人随机分为两组,对观察组进行评估、发放宣传资料及临床指导,对预防美施康定引起便秘进行效果观察.对照组采取常规护理.[结果]观察组便秘发生率(25.5%)低于对照组(86.0%).[结论]有效的护理干预可减轻美施康定所引起的便秘.     

壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米免疫原肌注BALB/c鼠所致树突状细胞分布与功能变化

壳聚糖是一种来源广泛、价格低廉、具有良好生物相容性及降解性、安全无毒的阳离子天然高分子聚合物,以纳米颗粒或微球形式与DNA结合后形成聚电解质复合体,后者可优化DNA疫苗的免疫效果.研究证实壳聚糖是一种有效介导DNA疫苗进行皮肤及黏膜免疫的载体物质.     

ICAM-1编码基因对乙型脑炎DNA疫苗树突状细胞功能的影响

目的:研究细胞间粘附分子1(ICAM-1)编码基因对日本脑炎(JE) DNA疫苗脾脏树突状细胞功能的影响.方法:套式RT-PCR法获取BALB/c鼠ICAM-1编码基因,构建重组子pJME/ICAM-1和pICAM-1,脂质体法转染上述质粒于CHO细胞,Western blot法检测转染的CHO细胞中目的蛋白表达.实验分5组,包括:pJME/ICAM-1、pJME+ PICAM-1、pJME、JE灭活疫苗和pcDNA3.1(+)免疫组,以不同免疫原肌注免疫BALB/c小鼠,流式细胞仪检测经不同免疫原免疫鼠后脾脏DC表型、抗原吞噬功能以及混合淋巴细胞反应.结果:融合表达重组质粒pJME/ICAM-1和单质粒pICAM-1经鉴定构建正确.pJME/ICAM-1组CD11c+CD86+ DC和CD11c+ICAM-1+ DC比例分别为(6.92±1.40)％、(7.18±0.57)％,高于其它免疫组(均P＜0.05);pJME/ICAM-1和pJME+ pICAM-1组DC表面CD80和MHCⅡ表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05);pJME/ICAM-1与pJME+ pICAM-1组内吞能力明显增强,平均荧光强度分别为437.11 ±47.60、416.67±29.12,显著高于其它组(P＜0.05).比较不同免疫原对细胞分裂的作用,以pJME/ICAM-1组最强,(73.69±7.32)％ CD4+T细胞发生分裂,(45.40 ±2.57)％CD8 +T细胞发生分裂,显著高于对照组(P＜0.05).结论:ICAM-1编码基因能够促进JE DNA疫苗脾脏树突状细胞的成熟,能够提供独立或放大B7分子的协同刺激信号.