抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达

目的 构建抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体原核表达载体，为进一步研究其效应奠定基础。方法 从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体pGEM-T-VH和pGEM-T-VL中扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因，用重叠延伸PCR的方法，在VH和VL基因间引入连接短肽(Linker)，构建VH-Linker-VL的单链抗体(single chain Fv，scFv)基因。经NcoⅠ和NotⅠ酶切后亚克隆到原核分泌型表达载体pUCl9／119上，转化和筛选后，阳性细菌经IPTG诱导表达。间接免疫荧光法(IFA)及抗体封闭试验鉴定其抗体活性。结果 凝胶电泳可见重叠延伸PCR扩增产物约700bp条带，SDS-PAGE鉴定表达产物的分子量为27kD左右，与scFv的理论值一致，IFA及抗体封闭试验证明表达产物有抗人TfR的活性。结论 本研究成功地构建并表达了抗人TfR scFv，为抗人TfRscFv的应用奠定了基础。     

Study on Immunoregulation by Interleukin-1 ReceptorAntagonist in NZB/W F_1 Mice

Systemiclupuserythematosis(SLE)isakind0fautoimmunediseasewhichcanproduceIgGanti-dsDNAantib0diesinviv0,leadingtofatalcirculatoryimmunecomplexnephritis.Itllasbeensh0wedinvitrothatinterleukin-1(IL-1)cannotonlyremark-ablystrengthenthepr0llferativereactionofBcellsandpro(luctionofantibodycellsinpatientswithSLE,butals0haseffects0nproliferatlonofact1vatedB1ymphocytesincoordinati0nwith1L-4,andonsecreti0nofBlymphocytes1ncomblnationwlthlL-6aswel1.Interleukin-1Alreceptorantagonist(lL-lra)isanewlyf…     

抗人胸腺细胞球蛋白与柔红霉素交联方法及其偶联物体外抗肿瘤作用

分别用12.5％、25.0％、50.0％、75.0％和100.0％氧化的Dex T_(10)作为交联剂交联抗人胸腺细胞球蛋白(AHTG)和柔红霉素(DNR)形成免疫偶联物(AHTG-Dex-DNR),其中以25.0％氧化的DexT10作为交联剂最佳。它既提高了偶联物的交联度,又降低了硼氢化钠对AH-TG和DNR活性的损伤。偶联物对靶细胞CEM 24h细胞毒试验LD_(50)为10.68μg/ml。对非靶细胞K562仅有轻微杀伤作用,10min细胞毒试验为特异的杀灭肿瘤细胞试验,对CEM的LD_(50)为14.79μg/ml,对K562几乎无细胞毒作用,表明免疫偶联物有特异性细胞毒作用。     

医用直线加速器的感生放射性研究

医用直线加速器在治疗过程中会产生对人体有害的感生放射性,且这种危害正逐渐引起人们的重视。本文介绍了感生放射性的概念、产生机制,总结感生放射性对患者、工作人员及公众所造成的危害,探讨了感生放射性水平的影响因素,并总结减少其水平的措施。     

内蒙古医疗机构临床工程人员现状及发展研究

对内蒙古自治区各级医疗机构临床工程人员的数量、质量和结构进行抽样调查和现状统计。在此样本基础上,通过与国外发达国家临床工程学科和国内相邻学科人员现状对比研究,针对存在的问题与不足,结合实际,提出临床工程人才队伍培养发展的参考建议。     

JAK2V617F突变负荷量对ET患者临床表现和生存影响的研究

目的:观察JAK2V617F突变量对ET(原发性血小板增多症)患者的临床表现及生存影响。方法:病例来源于2013.10-2016.12月在云南省第一人民医院就诊和治疗的ET患者229例,采取患者的骨髓血标本2 ml,肝素抗凝,红细胞裂解液分离单个核细胞,使用DNA抽提试剂盒抽提患者基因组DNA。利用等位基因特异性PCR方法扩增目标DNA,琼脂糖凝胶电泳筛选出120例JAK2V617F突变阳性的标本。再通过实时定量PCR(RT-PCR)检测JAK2V617F突变负荷量,并通过测序方法检测PCR筛选的准确率。结果:伴有血栓形成的ET患者JAK2V617F突变负荷量高于未发生血栓组(23.2%vs 14.2%),(P 0.05);WBC计数升高组( 10×10~9/L)及HGb浓度升高( 150 g/L)患者JAK2V617F突变负荷量高于对照组(P 0.05),17例脾肿大患者JAK2V617F基因突变负荷量高于45例脾脏未肿大组(P 0.05),年龄、性别与JAK2V617F基因突变量之间无相关性(P 0.05)。经单因素分析显示,JAK2V617F突变量对生存率无统计学影响;多因素分析显示,WBC计数、血红蛋白浓度、年龄、性别及脾肿大对生存率无影响(P 0.05)。结论:JAK2V617F突变负荷量影响ET患者的临床表现,JAK2V617F突变负荷量与是否形成血栓相关,性别、年龄与基因突变负荷量无关。     

转染不同基因的NIT细胞体外抗细胞毒T细胞杀伤作用

目的　研究转染FADD缺失突变体(FADDdel)和WeelHu/GFP的胰岛β细胞株(NIT细胞)抵抗细胞毒T细胞的杀伤作用及其分泌胰岛素与细胞增殖所受的影响。方法　采用免疫磁珠法测量转染WeelHu基因的NIT细胞培养上清中的胰岛素水平及观察其增殖速度。将分别转染空载体pUC-pIC、pCMV和转染pFADDdel、pCMV-WeelHu、pCMV-WeelHu/GFP的NIT细胞与活化的淋巴细胞共培养,利用51Cr释放试验检测淋巴细胞对NIT细胞的杀伤作用。结果　转染WeelHu基因与未转染的NIT细胞胰岛素的分泌和生长速度没有明显变化(P>0.05)。转染pCMV-WeelHu/GFP或pCMV-WeelHu的NIT细胞其抗淋巴细胞杀伤能力明显高于转染空载体的NIT细胞(P<0.01),表达WeelHu或WeelHu/GFP融合蛋白的胰岛细胞之间抗凋亡能力差异无统计学意义,转染FADDdel在低剂量效靶比时对胰岛β细胞有一定保护作用(P <0.05),但在高剂量效靶比时与转染空载体比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论表达WeelHu或FADDdel的胰岛细胞可抵抗T细胞的杀伤,且对胰岛素的分泌及细胞增殖元明显影响。     

大肠癌根治术中5-氟尿嘧啶缓释剂间质化疗的安全性观察

目的探讨大肠癌术中5-氟尿嘧啶(5-Fu)缓释剂间质化疗的安全性。方法将190例大肠癌根治术患者分为治疗组94例和对照组96例。治疗组手术结束关腹前将5-Fu缓释剂600 mg均匀置于肿瘤病灶区域和淋巴血管回流区域;对照组术中不用化疗药。两组术后处理相同。术前及术后第2、12天检测两组白细胞和红细胞计数、血清ALT、Cr及CD4+/CD8+值,观察不良反应(恶心呕吐及腹痛、腹泻)及并发症(化学性腹膜炎、伤口感染、吻合口漏、出血、肠梗阻、盆腔积液等)发生情况,比较住院天数。结果两组手术前后各相关指标、不良反应及并发症发生率、住院天数比较均无显著差异。结论大肠癌根治术中采用5-Fu缓释剂行间质化疗较为安全。     

次级淋巴组织趋化因子浓度梯度抑制肿瘤细胞免疫逃逸

目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对肿瘤细胞免疫逃逸的影响。方法根据SLC浓度梯度,实验分6组;流式细胞术检测肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子的表达、肿瘤细胞凋亡,Western blot检测肿瘤细胞胞内BCL-2表达,ELISA检测肿瘤细胞培养上清中生长转化因子β(TGF-β)水平。结果在一定浓度范围内,随SLC浓度增加,肿瘤细胞的HLA-Ⅰ类分子表达增高,肿瘤细胞凋亡增多;BCL-2表达增高,而肿瘤细胞TGF-β分泌水平降低。结论SLC具有抑制肿瘤细胞免疫逃逸的作用。     

菌落PCR和质粒PCR对转化菌的筛选

为建立简便,可靠转化菌的筛选方法。方法应用菌落ＰＣＲ和重组质粒ＰＣＲ方法对转化菌进行筛选和ＤＮＡ序列分析。克隆载体和表达载体筛选及鉴定采用与载体多克隆插入位眯序列互补的通用引物或免疫球蛋白家族特异性引物。结果菌落ＰＣＲ和质粒ＰＣＲ技术可作为基因克隆筛选和鉴定的方法。结论菌落ＰＤＲ和质粒ＰＣＲ方向简便,快速,可靠,其产可作为模板直接用于序列分析。