抗人树突状细胞单克隆抗体可变区基因克隆和序列分析

目的:为了将抗树突状细胞(dendritic cells,DC)抗体应用于临床疾病治疗,计划克隆获得抗人DC单克隆抗体(McAb)的可变区序列,在此基础上进一步获得人源化的抗人DC抗体.方法:运用RT-PCR技术,从分泌抗人DC McAb的杂交瘤细胞株(H1E11)中,克隆出VH和VL基因片段,并对VH和VL进行了测序分析.所测得的重链和轻链在基因库中与相关的Ig的VH和VL基因序列进行经Blast同源性比较.结果:通过碱基和蛋白序列的比较确认为小鼠IgG的VH和VL基因.运用Dnasis软件对VH和VL基因进行阅读框分析和模拟翻译,并参照Kabat等人(1991)编写的Ig蛋白质编码序列图谱,根据其FRs和CDRs的序列特征进行Ig的家族分析,发现VH共有414 bp,编码138个氨基酸序列,属于小鼠IgG重链Ⅲ(A)家族;VL由396 bp编码,产生132氨基酸,属于轻链κV家族.结论:成功克隆抗人DC McAb重链和轻链的可变区.     

CT空间分辨率和低对比度分辨率的检测及其影响因素

本文着重阐述了CT检测的意义以及CT检测中两个比较重要的参数--空间分辨率和低对比度分辨率的检测方法,并对这两个参数的影响因素进行了分析.     

抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达

目的 构建抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体原核表达载体，为进一步研究其效应奠定基础。方法 从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体pGEM-T-VH和pGEM-T-VL中扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因，用重叠延伸PCR的方法，在VH和VL基因间引入连接短肽(Linker)，构建VH-Linker-VL的单链抗体(single chain Fv，scFv)基因。经NcoⅠ和NotⅠ酶切后亚克隆到原核分泌型表达载体pUCl9／119上，转化和筛选后，阳性细菌经IPTG诱导表达。间接免疫荧光法(IFA)及抗体封闭试验鉴定其抗体活性。结果 凝胶电泳可见重叠延伸PCR扩增产物约700bp条带，SDS-PAGE鉴定表达产物的分子量为27kD左右，与scFv的理论值一致，IFA及抗体封闭试验证明表达产物有抗人TfR的活性。结论 本研究成功地构建并表达了抗人TfR scFv，为抗人TfRscFv的应用奠定了基础。     

Study on Immunoregulation by Interleukin-1 ReceptorAntagonist in NZB/W F_1 Mice

Systemiclupuserythematosis(SLE)isakind0fautoimmunediseasewhichcanproduceIgGanti-dsDNAantib0diesinviv0,leadingtofatalcirculatoryimmunecomplexnephritis.Itllasbeensh0wedinvitrothatinterleukin-1(IL-1)cannotonlyremark-ablystrengthenthepr0llferativereactionofBcellsandpro(luctionofantibodycellsinpatientswithSLE,butals0haseffects0nproliferatlonofact1vatedB1ymphocytesincoordinati0nwith1L-4,andonsecreti0nofBlymphocytes1ncomblnationwlthlL-6aswel1.Interleukin-1Alreceptorantagonist(lL-lra)isanewlyf…     

抗人胸腺细胞球蛋白与柔红霉素交联方法及其偶联物体外抗肿瘤作用

分别用12.5％、25.0％、50.0％、75.0％和100.0％氧化的Dex T_(10)作为交联剂交联抗人胸腺细胞球蛋白(AHTG)和柔红霉素(DNR)形成免疫偶联物(AHTG-Dex-DNR),其中以25.0％氧化的DexT10作为交联剂最佳。它既提高了偶联物的交联度,又降低了硼氢化钠对AH-TG和DNR活性的损伤。偶联物对靶细胞CEM 24h细胞毒试验LD_(50)为10.68μg/ml。对非靶细胞K562仅有轻微杀伤作用,10min细胞毒试验为特异的杀灭肿瘤细胞试验,对CEM的LD_(50)为14.79μg/ml,对K562几乎无细胞毒作用,表明免疫偶联物有特异性细胞毒作用。     

双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统的构建及体外效应研究

目的：构建高靶向性基因转移及表达系统，并研究其介导HSVtk/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法： 通过重组技术分别构建antiTfR ScFvGAL4融合蛋白表达载体ScFvGAL4pET28a及含AFP启动子、GAL4特异性识别序列（GAL4rec）的HSVtk真核表达载体pEBAF/tkGAL4rec。IPTG诱导后，利用受体介导内吞作用介导pEBAF/tkGAL4rec质粒转染表面均高表达TfR的人肿瘤细胞株HepG2，SMMC7721及A549。潮霉素筛选后，MTT法检测GCV对它们的杀伤作用。结果：双酶切鉴定、SDSPAGE电泳及测序分别证明antiTfR ScFvGAL4融合蛋白及重组pEBAF/tkGAL4rec真核表达质粒构建成功。体外杀伤实验中，高分泌AFP(845 ng/ml) 的HepG2/tk细胞对GCV很敏感，且抑制率与GCV浓度及作用时间呈正相关；而低分泌AFP(2 ng/ml)的SMMC7721/tk细胞对GCV低度敏感；不分泌AFP 的A549/tk细胞则不敏感。结论：双靶向组织特异性HSVtk/GCV抗瘤系统构建成功，并显示出很好的靶向性。     

普通易变性免疫缺陷症患者淋巴细胞亚群和免疫球蛋白分析

<正> 普通易变性免疫缺陷症的病因及发病机理仍未完全清楚。本文报告普通易变性免疫缺陷症患者及其家系成员外周血中T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和单核巨噬细胞数以及血清中免疫球蛋白和补体含量。目的是通过定量测定淋巴细胞亚群数目和免疫球蛋白浓度变化与其临床关系,探讨该病的发病机理。     

应用Wu-系列McAbs对不同人群淋巴细胞亚群分布的检测

本文应用武汉生物制品所研制的Wu-系列单克隆抗体(McAbs)对慢性肾炎尿毒症和系统性红斑狼疮等患者外周血淋巴细胞亚群进行了检测,目的是探讨淋巴细胞亚群在这些疾病时的变化规律及其检测意义。     

抗精子抗体阳性不育患者外周血淋巴细胞亚群检测及其意义

本文采用间接免疫荧光法(单克隆抗体)检测了23例抗精子抗体阳性不育男性外周血的淋巴细胞亚群。结果表明,患者CD_3、CD_4和CD_8细胞百分率均明显低于正常生育男性,而CD_4/CD_8、B细胞和D_r细胞则明显增高。提示抗精子抗体阳性不育症存在免疫细胞数目异常,且T抑制细胞明显不足和B细胞的明显增加是此类患者发病的重要机制。