嵌合体的动态定量检测在异基因造血干细胞移植中的应用

目的　建立荧光标记的多重PCR扩增短串联重复序列 (STR PCR)结合毛细管电泳 ,定量检测供体细胞 (DC)嵌合率的方法 ,并探讨该方法的连续定量检测对异基因造血干细胞移植 (allo HSCT)后转归的预警作用。方法　采集 31例接受骨髓移植 (BMT)或非清髓外周血干细胞移植 (NST)患者移植前、移植后不同时段的外周血或骨髓。DNA样本用ProfilerPlus商品化试剂盒扩增后 ,用ABI 310遗传分析仪进行毛细管电泳 ,确定基因位点及峰面积 ,根据供受体基因型的差异选择嵌合率计算公式。结果　 31例患者中 15例 (48.4 % )为性别相合移植 ,只能通过STR PCR进行嵌合体的定量分析 ;性别不合移植患者用STR PCR和荧光原位杂交两种方法定量测得的DC嵌合率一致 ;31对供受体中能区别出供受差别的STR位点有 6 .7(2～ 10 )个 ,所有患者均在移植后 7天 ( 7天 )出现供体来源的细胞 ,BMT组 7天、 14天和 1个月DC中位数均明显低于NST组 ,而在移植中后期无显著性差异。 2 1天时BMT和NST患者均达稳定嵌合 ,DC在 92 %以上 ;中位随访 17(3.5～ 2 9.0 )个月 ,2 6例患者DC≥90 % ,均获得持久植入 ,至今均为无白血病生存。另有 5例患者出现不稳定混合嵌合 (MC)状态 (DC为2 7.3%～ 6 2 .7% ) ,其中 4例复发 ,1例出现移植物被排斥。上述 5例患者均     

流式细胞术对急性白血病微小残留病的检测及意义

目的 探讨流式细胞术(FCM)检测追踪急性白血病(AL)患者骨髓微小残留病(MRD)变化的临床意义.方法 应用FCM以白血病细胞(LC)特异分化抗原为标志监测43例初治AL患者MRD,并与传统骨髓形态学结果进行比较.结果 预测各组患者复发的敏感性和特异性分别为:完全缓解(CR)1～5个月组为100%(13/13)和76.6%(23/30), CR 6～11个月组为100%(4/4)和87%(20/23), CR 12个月～组为100%(2/2)和100%(13/13),对所有第1次受检MRD为阳性随后确认为复发的患者,比骨髓像诊断复发平均提前4个月.43例初治AL患者CR时MRD定量检测结果显示:(1) MRD阴性25例,其中16例在追踪期内亦持续阴性;9例转阳性,经强化疗后再转阴,但6例复发,其中3例发生了中枢神经系统白血病(CNSL);(2) MRD阳性18例,其中10例CR时MRD平均值为2.20%,在缓解期MRD值逐渐减少,直至转阴;8例CR时MRD值较高或持续高值,此8例均复发;(3)骨髓复发组(19例)CR时MRD定量值平均为0.48%,未复发组(24例)为0.06%(P＜0.05).结论 采用FCM检测AL的MRD,具有简单、快速有效、敏感和创伤小的优点,可比传统骨髓形态学更早提示复发.尤其是采取连续性定期监测、动态观察的方式,会进一步增加检测结果的准确性,对提示复发、预测预后及指导个体化治疗有重要意义.     

硼替佐米联合化疗治疗多发性骨髓瘤43例疗效观察

目的分析硼替佐米联合化疗治疗初治及复发难治性多发性骨髓瘤（MM）的疗效及安全性。方法 43例MM患者采用硼替佐米联合地塞米松（PD）或硼替佐米联合地塞米松及阿霉素（PAD）方案化疗,其中12例患者经硼替佐米联合化疗后接受自体造血干细胞移植术。依据国际2006疗效反应标准评价疗效,毒性分级按美国国立癌症研究院不良事件通用名（NCI CTCAE）v 3.0判断。结果接受2～6个疗程硼替佐米联合化疗后,35例初治患者总反应率为88.6%,8例复发难治患者总反应率为75%。PD方案组（27例患者）总反应率为81.5%,PAD方案组（16例患者）总反应率为93.8%。所有患者获得疗效平均需1.2个疗程（1～3个疗程）,中位无疾病进展时间为12个月（1～37个月）,1年总生存率为81%,2年总生存率为62.6%。12例接受自体造血干细胞移植的患者,1年总生存率高于单纯接受化疗的患者,但差异无统计学意义（P〉0.05）。不良反应主要为乏力、腹泻、便秘、周围神经病变、感染及血液学毒性,经对症治疗后好转。结论硼替佐米联合化疗可有效治疗初治或复发难治性MM患者,常见不良反应经对症治疗可缓解。     

WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性研究

本研究探讨WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性,为开展基于WT1基因调控的白血病基因治疗奠定基础。以EGFP做报告基因,构建含有WT1基因启动子和增强子的重组表达载体;利用脂质体和电穿孔技术将重组质粒转染13个细胞株,包括WT1基因高表达的白血病细胞株(K562、NB4、THP-1、SHI-1),WT1基因低表达的白血病细胞株(U937和Jurkat);非造血细胞株中WT1基因高表达的MCF-7、T47D、293株细胞和WT1基因低表达的ECV304、SMMC7721、HT-29、SHG44细胞株;利用流式细胞术检测转基因细胞稳定表达EGFP的平均荧光强度。以平均荧光强度代表启动子和(或)增强子的转录活性。结果表明:通过基因重组技术构建了含有WT1基因启动子的表达载体pEWP,以及含有WT1基因启动子和增强子的表达载体pEWPA。就启动子的转录活性而言,在非白血病细胞株中,ECV304细胞EGFP的平均荧光强度最高,是空载体(pEGFP-1)的16.54±2.45倍,明显高于白血病细胞株(p<0.05);MCF-7和SHG44细胞次之,分别为9.46±1.10和7.29±0.73倍,HT-29细胞表达最低,仅为0.99±0.02倍。在人类血病细胞株中,K562细胞EGFP的平均荧光强度最高,是空载体pEGFP-1的2.93±0.27倍,明显高于Jurkat和SHI-1细胞株(p<0.05)。后二者分别为0.74±0.03和0.84±0.09倍。pEWPA可以使HT-29、SHI-1和K562细胞中WT1基因启动子的转录活性增强,分别增强到4.81、3.06和1.01倍。结论:WT1基因启动子的转录活性与细胞内在WT1基因的表达水平不相关,增强子增强部分细胞株中WT1基因启动子的转录活性,但不具有造血组织特异性。     

非清髓异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血临床观察

重型再生障碍性贫血(SAA)采用传统清髓性预处理方案治疗,因方案相关毒性较大、并发症较多而未能广泛应用。非清髓异基因造血干细胞移植(NAST)则具有毒性小、安全和并发症少的优点,我们于2002年起采用NAST治疗SAA5例,现报告如下。     

移植物抗宿主病的临床分析

目的　分析异基因干细胞移植后移植物抗宿主病 (GVHD)与预处理方式、干细胞来源和GVHD预防的关系及其对预后的影响。方法　对 5 6例异基因造血干细胞移植患者进行 2～ 2 5个月的临床随访。结果　 (1)Ⅱ°～Ⅳ°急性GVHD的激素疗效明显不如Ⅰ°急性GVHD ,激素耐药的急性GVHD患者预后较差 (P <0 .0 5 ) ;(2 )非亲缘性骨髓移植患者的急、慢性GVHD发病率高于亲缘性骨髓移植 (R -BMT)患者 ,但均无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;(3)非清髓性外周血干细胞移植 (NST)患者的急、慢性GVHD发病率与R -BMT患者相比无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,但激素耐药的急性GVHD比例明显高于R -BMT患者 (P <0 .0 5 )。结论　GVHD是影响NST患者预后的主要因素 ,该类患者GVHD的预防和激素耐药的急性GVHD的治疗有待研究。     

同胞异基因造血干细胞移植治疗Ph+急性髓系白血病M4一例并文献复习

 目的　分析Ph染色体阳性的急性髓系白血病（AML）患者的临床特点,探讨其治疗方法。方法　报道1例Ph+ AML的形态学、免疫学、细胞遗传学及分子生物学特点,并行同胞异基因造血干细胞移植,同时对相关文献进行复习。结果　该病例在移植后2年内无不良反应发生,骨髓穿刺均提示缓解。结论　Ph+ AML预后欠佳,异基因造血干细胞移植可能是其治疗有效方法之一。     

一例合并尿崩症伴有染色体-7的骨髓增生异常综合征

患者　男,4 6岁,既往有“再生障碍性贫血(再障)史”4年,虽间断服用雄激素、环孢霉素A及输血等治疗,血液三系仍低于正常。2 0 0 1年1月2 9日因“口干、多饮、多尿、纳差半月,加重10天”入院。入院前尿量达6 0 0 0～80 0 0 ml/日,查空腹血糖、甲状腺功能均正常,入院后血电解质检查:钠15 7mmol/ L ,钾3.9mmol/ L ,氯116 mmol/ L ,二氧化碳结合力2 1.1mmol/ L ;尿比重1.0 0 5 ;可提取核抗原系列阴性;头颅MRI示双侧基底节区多发腔隙性梗塞,垂体部位未见病变。禁水试验为禁水前:血压15 2 / 5 8mm Hg,脉搏78次/分,体重90 .5 kg,禁水4 h后:血压1…     

抗CD33单抗联合化疗药物治疗复发或难治性急性髓系白血病的疗效观察

目的评价抗CD33单克隆抗体（GO）联合化疗药物对复发（或难治性）急性髓系白血病（AML）的疗效和安全性。方法应用GO联合化疗药物治疗16例复发或难治性AML患者。治疗方法：GO 9 mg/m2,第1天;联合FLAG、HAA、CAG、合用地西他滨等化疗方案。在治疗过程中同时应用前列腺素E以及保肝药物保护性治疗。结果 16例中,难治性AML11例,复发性AML5例,白血病细胞CD33表达中位数为93.9%。GO联合化疗1个疗程后复查骨髓象,达完全缓解（CR）7例,部分缓解（PR）3例,CR率为43.8%,PR率为18.8%,总有效率为62.6%。随访截至2010年3月1日,中位无复发生存时间为3.5（1.1～70）个月,中位总生存时间9（3～77）个月。在化疗过程中5例出现一过性高胆红素血症及转氨酶升高,化疗结束后有3例在异基因造血干细胞移植过程中出现肝静脉闭塞综合征,1例经抗凝、溶栓、保肝及对症支持治疗后症状得到控制,2例死亡。结论 GO联合化疗治疗复发、难治性AML患者可获得较高的CR率,为部分患者行异基因造血干细胞移植提供了契机,可作为伴有CD33高表达复发或难治性AML患者一种较为有效的治疗方法。     

非清髓性异基因造血干细胞移植治疗皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤

皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤（SPTL）是一种少见的原发性皮肤淋巴瘤,约占所有非霍奇金淋巴瘤（NHL）的1％。由于其发病率低,病例少,至今尚无肯定的有效治疗方案,常用的方法有单药或联合化疗、自体或异基因移植。本院对1例SPTL患者成功进行了非清髓性异基因造血干细胞移植（NST）。