AllGlo探针4重荧光定量PCR技术同时检测4种疱疹病毒

目的 探讨多重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于AllGlo探针技术荧光定量法检测4种疱疹病毒新方法.方法 分别采用单重和多重定性PCR扩增临床常见4种疱疹病毒[单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、HSV-2、Epstein-Barr病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)]并测序鉴定,然后分别采用AllGlo探针和TaqMan探针的单重和多重定量PCR技术对4种疱疹病毒进行单种和多种病毒同时定性定量检测.结果 TaqMan探针和AllGlo探针单种疱疹病毒检测阳性率和特异性均为100％,AllGlo探针单重定量PCR检测比4重探针单种定量PCR的检测Ct值高1～3,AllGlo探针4重定量PCR可以同时检测4种疱疹病毒,相同样品AllGlo探针4重定量PCR检测与单探针单重定量PCR分别检测的结果符合率100％.结论 AllGlo探针荧光定量PCR技术的通量、灵敏度和特异性均高于TaqMan探针,应用前景广阔.     

乳汁样本乙型肝炎病毒DNA提取方法探讨

目的 探讨不同样本处理方法对乳汁样本中HBV DNA定量结果的影响,筛选出适合临床实验室检测病毒DNA的样本前处理方法.方法 分别采用专用DNA提取液法、碱裂解法、酸化法、无水乙醇法和冷藏法,提取不同HBV DNA载量的乳汁样本中的HBV DNA,然后进行荧光定最PCR检测.结果乳汁样本中的HBV DNA>10~4 IU/mL时,以专用DNA提取液法、碱裂解法、冷藏法处理的乳汁样本HBV DNA结果阳性率达100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测     

重症监护病房下呼吸道感染病原菌分布及耐药性分析

目的 了解重症监护病房(ICU)患者下呼吸道感染的病原菌分布及耐药现状,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 取ICU下呼吸道感染患者深部痰做病原菌培养,用VITEK-AMS60全自动微生物仪进行菌种鉴定及K-B法药敏试验.结果 从2007年1月-2008年3月送检的320份痰标本中,分离出367株病原菌,其中革兰阴性杆菌261株,占71.1%,真菌70株,占19.1%,革兰阳性球菌36株,占9.8%;鲍氏不动杆菌分离率为21.8%,该菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率为16.7%,其他13种抗菌药物耐药率均>71.0%;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)发生率分别为65.2%、72.0%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)发生率为84.6%.结论 ICU患者下呼吸道感染病原菌以革兰阴性杆菌为主,鲍氏不动杆菌排列居首,耐药情况显著,真菌感染严重,应引起临床重视.     

胆管腔内超声联合细胞刷检病理、基因突变检测对胆管恶性狭窄的早期定性诊断价值

目的探讨胆管腔内超声（IDUS）联合细胞刷检病理学、细胞刷检标本K-ras和p53基因突变检测对胆管恶性狭窄的早期定性诊断价值。方法84例疑似胆管恶性狭窄患者首先行IDUS检查,随后用细胞刷刷取狭窄段胆管内壁标本,一份送检病理,另一份行K-ras、p53基因突变检测,以病理及随访结果为最终诊断,统计单一检查方法及联合检查方法早期诊断胆管恶性狭窄的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确率,并行对比分析。结果单一检查诊断时,IDUS、细胞刷检病理学、细胞刷检标本K-ras基因突变检测和细胞刷检标本p53基因突变检测敏感度分别为63．46％（33／52）、53．85％（28／52）、38．46％（20／52）和42．31％（22／52）,准确率分别为69．05％（58／84）、71．43％（60／84）、61．90％（52／84）和64．29％（54／84）。联合检查诊断时,IDUS＋细胞刷检病理学＋细胞刷检标本K-ras和p53基因突变检测敏感度（96．15％,50／52）、特异度（93．75％,30／32）、阳性预测值（96．15％,50／52）、阴性预测值（93．75％,30／32）和准确率（95．24％,80／84）均最高,且诊断敏感度和准确率均较单一检查诊断时有明显提升（P〈0．05）。结论胆管腔内超声联合细胞刷检病理、细胞刷检标本K-ras和p53基因突变检测有助于胆管恶性狭窄的早期定性诊断。     

PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能比较及呼吸道病原体的流行特征分析

目的 比较PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能,进一步分析呼吸道病原体的流行特征。 方法 选择 2019 年 7 至 12 月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院呼吸道感染患者 309 例,采集鼻咽拭子标本,分别采用核酸序列测定法和 PCR-荧光探针法进行同步盲法检测,以核酸序列测定法的检测结果为金标准,分析 PCR-荧光探针法检测不同病原体的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,并分析不同呼吸道病原体的流行特征。 结果 309 例鼻咽拭子标本中,两种方法检测结果不一致或不完全一致的样本共 2 例,针对不同病原体,PCR-荧光探针法的检测灵敏度均为 100.00%,特异度为99.65%~100.00%,阴性预测值均为 100.00%,阳性预测值为 75.00%~100.00% 。309 例呼吸道感染患者,人鼻病毒检出率为25.6%（79/309）,人腺病毒检出率次之,为 11.3%（35/309）;学龄前儿童（＜6 岁）和 6~21 岁人群检测出 18 种呼吸道病原体,其中以人鼻病毒检出率最高。 结论 与核酸序列测定法相比,PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的呼吸道病原体更灵敏、安全、简便、稳定,具有较高的临床应用价值。本院呼吸道感染以人鼻病毒为主。     

5-羟色胺转运体基因启动子区CpG岛甲基化状态与精神分裂症Ⅰ型和Ⅱ型的关联

目的:探讨5-羟色胺转运体(5-HTT)基因启动子区CpG岛甲基化状态与精神分裂症Ⅰ型和Ⅱ型的关联。方法:运用特异性甲基检测PCR和直接测序法对62例精神分裂症Ⅰ型患者、38例Ⅱ型患者和50例健康被试5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化状态进行检测。结果:三组5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化阳性率无显著性差异;精神分裂症Ⅰ型患者5-HTT基因启动子区CpG岛内位点甲基化率显著高于精神分裂症Ⅱ型患者和健康被试组。结论:5-HTT基因启动子区CpG岛内位点高甲基化可能是精神分裂症Ⅰ型的发病机制之一。     

抗流感病毒中药研究概况

从中医基础理论出发，结合现代医学技术，对近年来国内外抗流感病毒中药的药理作用研究进展综述，并对其研究现状进行了分析。     

两种血小板制剂在急性白血病中的应用

目的 :观察手工离心法 (手采 )和分离机法 (机采 )提取血小板输注的临床疗效 ,并探讨多次输注对临床疗效的影响。方法 :对手采组和机采组分别测定不同时间段的血小板数量 ,然后计算血小板增高指数 (CCI)和血小板回收率 (PPR)值。结果 :机采组每次输注有效率均高于手采组 ,两组差异有显著性 (P <0 .0 0 5 )。结论 :机采组疗效明显优于手采组 ,并随着输注次数的增加 ,其优势表现愈明显     

头孢菌素对产ESBLs肺炎克雷白杆菌的抗菌活性研究

目的探讨头孢他啶和头孢噻肟钠体内外抗产超广谱β 内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷白杆菌的效果。方法采用K B法和仪器法对确认为产ESBLs的肺炎克雷白杆菌进行药敏试验，并选择两株体外药敏结果不同的产ESBLs的肺炎克雷白杆菌建立小鼠腹腔感染模型，同时用头孢他啶和头孢噻肟钠对感染小鼠进行治疗。 结果产ESBLs的肺炎克雷白杆菌对头孢他啶的耐药率明显低于其他头孢菌素类药物(均P＜0.05)，头孢他啶对药敏试验敏感的产ESBLs肺炎克雷白杆菌腹腔感染小鼠保护率为90.0%，头孢他啶和头孢噻肟钠对药敏试验耐药的产ESBLs的肺炎克雷白杆菌腹腔感染小鼠保护率为0。结论头孢菌素类抗菌药物的体内外抗产ESBLs肺炎克雷白杆菌作用基本一致，头孢他啶可以作为亚胺培南/西司他丁钠的替代品治疗产ESBLs肺炎克雷白杆菌感染。     

产ESBLs细菌体外药敏试验结果报告探讨

目的探讨产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的Vitek药敏试卡法和纸片扩散法(Kirby-Bauer)检测ESBLs以及药敏结果的差别.方法256株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌采用Vitek药敏试卡和K-B法进行药敏试验,对Vitek药敏试卡法检测ESBLs疑似假阴性菌进行确证试验验证,同时对25株产ESBLs细菌的感染患者进行β-内酰胺类抗生素临床疗效监测.结果Vitek药敏试卡法ESBLs的检出率为21.87%(56株),K-B法检测结果与Vitek药敏试卡法专家修正结果差异显著(P＜0.05).产ESBLs细菌不经修正的K-B法的药敏结果与临床疗效相吻合,CAZ的敏感率和临床疗效均优于头胞噻肟CTX(P＜0.05).结论对Vitek药敏试卡法检测ESBLs疑似假阴性菌应采用K-B法确证试验加以确认,国内分离的产ESBLs细菌的β-内酰胺类抗生素药敏实验结果不应盲目采用NCCLS推荐标准加以修正,而应结合临床疗效如实报告Vitek药敏试卡法仪器结果或K-B法结果,同时对药敏结果进行注评.