全反式视黄酸致小鼠腮弓畸形的机制研究

背景与目的：研究全反式视黄酸(All-trans Retinoic Acid , RA)对小鼠胚胎腮弓的致畸作用及其可能的致畸机制。材料与方法：采用植入后全胚胎培养观察RA 对孕8.5 d小鼠腮弓的致畸作用;采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine,BrdU)标记及检测,切口末端标记法,切片和整体免疫组化观察RA对颅神经嵴细胞 (Cranial neural crest cells, NCC) 增殖、凋亡和迁移的影响。结果：RA诱导腮弓出现发育不良,发育不全,第一、二腮弓融合畸形;RA处理组腮弓BrdU掺入率减少,凋亡增加,NCC出现异常的迁移路径和方式。 结论：RA诱导腮弓畸形,NCC增殖减少,凋亡增加,迁移改变是其可能的致畸机制。     

小鼠胚胎体外培养研究锌对骨形成的影响

近年来的一些研究表明 ,锌与骨代谢关系密切。锌缺乏可引起长骨生长缓慢[1 ] ,胚胎骨骼发育畸形[2 ] 。我们在国内首次应用浸没式一次通气旋转装置对 16ｄ孕龄小鼠胚胎肢体器官进行培养 ,为阐明锌缺乏 (过量 )对骨发育的影响机制积累资料 ,并为指导锌强化食品的使用以及为发挥锌的合理营养作用提供科学依据。1　材料与方法1 1　实验动物　昆明种小鼠 ,雌鼠体重为 30～ 35ｇ,雄鼠体重为 35～ 40ｇ。动物喂养在光照明暗比为 12∶12ｈ(电子自动控制 ) ,温度为 (2 4± 2 )℃ ,湿度为 6 0 %～ 70 %的环境条件下 ,自由饮水进食 ,选择健康的雄、雌…     

小鼠胚胎肢芽器官培养中锌对骨形成的影响

目的 通过研究锌缺乏／过量在骨形成过程中骨密度的变化,探讨锌影响骨代谢的机制,为发挥在骨质疏松中的治疗作用提供科学依据。方法 应用自制浸没式一次通气旋转装置对16天孕龄小鼠胚胎肢芽器官进行培养,采用钼钯X－ray乳腺机分析骨密度的变化。结果 锌缺乏组迁量补锌组Ⅲ与对照组相比,骨质较薄,长骨长度较短,骨密度降低,补锌组Ⅰ、Ⅱ与对照组相比,骨密度明显升高,长骨长度较长,骨质较厚。结论 提示适量补锌有促进骨形成,提高骨密度的潜在作用。     

铅对仔鼠学习记忆及海马中CTGF表达影响

目的探讨母体铅染毒对其仔鼠学习记忆海马组织中结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达的影响,为进一步研究铅的神经毒作用机制提供科学依据。方法采用自由饮水的方式于母鼠孕哺期染毒,染毒剂量为0.3,1,3g/L,每组10只,用石墨炉原子吸收光谱仪测定仔鼠出生后7,14,21d时血液和海马组织中铅含量。用RT-PCR和免疫组化方法分别测定21d不同剂量组仔鼠海马组织中CTGF mRNA和蛋白的表达。结果各剂量染铅组血染、海马组织中铅含量与对照组比较,明显升高(P均<0.05),血液和海马组织的铅含量随着日龄的变化有一定的规律性;迷宫实验中,对照组、0.3,1,3g/L组平均潜伏期分别为(39.13±6.12)(43.22±9.86),(50.85±12.35),(50.85±12.35)s,与对照组比较,0.3g/L组差异无统计学意义(P>0.05),与1,3g/L剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05);在对照组、0.3,1,3g/L组仔鼠海马组织中,CTGF mRNA的相对表达量分别为(0.354±0.603),(0.945±0.522),(1.223±0.279),(1.612±0.136);CTGF蛋白表达的灰度值分别为(126.10±32.11),(186.31±36.17),(220.94±31.27),(286.21±31.24);与对照组比,0.3,1,3g/L组海马中(CTGF mRNA和蛋白表达明显升高(P均>0.05)。结论孕哺期母体铅暴露可使铅在仔鼠体内人蓄积,引起仔鼠学习记忆力功能损害;铅所引起的神经毒性可能通过铅诱导CTGF mRNA和蛋白的高表达,造成神经系统的损害。     

130 基因芯片技术在卫生毒理学中的应用

基因芯片也称之为DNA阵列,或寡核苷酸阵列.基因芯片技术是同时将大量探针分子固定于支持物上后与标记的分子进行杂交,通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息.本文就这项技术在毒理学研究和危险评价中的应用作一探讨.     

金雀异黄酮对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响

目的观察植物雌激素金雀异黄酮(GS)对人结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子生物学作用机制。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测GS对HT-29细胞增殖活力和细胞周期分布的影响;CellDeathELISA和流式细胞术从不同方面检测GS对HT-29细胞凋亡的影响;RT-PCR和Western-blot技术检测GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2和baxmRNA和蛋白质表达的影响。结果与对照组相比,在15~120μmol/L浓度范围内,GS能够抑制HT-29细胞增殖活力;降低S细胞分布比例,将细胞周期滞留在G2/M期;显著性诱导HT-29细胞凋亡(>30μmol/L,P<0.05),并呈现出良好的剂量-效应关系。检测GS对PCNA、bcl-2和bax表达的影响显示,GS能够抑制PCNA和bcl-2mRNA和蛋白质表达,对bax的表达则表现出促进作用。结论GS通过诱导HT-29细胞凋亡而抑制其增殖活力,这些效应与PCNA、bcl-2和bax的表达变化有关。这些资料可为结肠癌的早期预防提供膳食干预新途径,并为临床新药的开发提供新方案。     

lncRNA Meg3在全反式维甲酸和转化生长因子β3影响小鼠腭突间充质细胞增殖过程中的作用

目的:探索长链非编码RNA(lncRNA)Meg3在全反式维甲酸(atRA)和转化生长因子β3(TGF-β3)影响胎鼠腭突间充质细胞增殖过程中的作用。方法:分离、培养妊娠13 d胎鼠腭突间充质细胞。EdU法检测对照组(未处理)、atRA组(5μmol/L atRA)和TGF-β3组(10μg/L TGF-β3)处理48 h腭突间充质细胞增殖能力的变化。荧光原位杂交和实时荧光定量PCR法检测上述3组Meg3的定位和相对表达量。利用EdU实验检测Meg3 siRNA转染前后atRA和TGF-β3对腭突间充质细胞增殖的影响。结果:与对照组相比,atRA处理48 h可抑制腭突间充质细胞的增殖,TGF-β3处理48 h可促进腭突间充质细胞增殖(P<0.05)。与对照组相比,atRA可促进腭突间充质细胞中Meg3的表达,TGF-β3可抑制Meg3的表达(P<0.05)。Meg3基因沉默后,与对照组相比,Meg3 siRNA组、atRA和TGF-β3处理组胎鼠腭突间充质细胞增殖能力均增强(P<0.05)。结论:atRA对胎鼠腭突间充质细胞的增殖抑制作用可能主要通过Meg3介导,而T...     

金雀异黄素的抗雌激素效应

应用雌激素耗尽的方法诱导乳腺癌细胞株MCF - 7和T47D发生凋亡 ,从而探讨金雀异黄素(genistein ,GS)对凋亡的影响作用。结果表明 ,同抗雌激素药物它莫西芬类似 ,3 2× 10 - 6 mol L及 96× 10 - 6 mol LGS可加剧雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用 ,且这种效应存在着良好的剂量 -效应关系。结果提示GS对女性乳腺癌发病率的预防作用是通过其抗雌激素效应诱导细胞的凋亡而实现的     

环境雌激素对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡作用的影响

[目的] 通过观察对-壬基酚(nonylphenol,NP)、双酚A(bisphenol A,BisA)和邻苯二甲酸二丁酯(dibutylphthalate,DBP)对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,探讨环境雌激素促进MCF-7细胞增殖的生物学机制.[方法] 将在DMEM培养液(含10%小牛血清)中的MCF-7细胞采用开放式单层贴壁培养,加受试物前5 d将培养细胞用PBS洗涤后改为在无酚红DMEM(含5%经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清,CDT-FBS)中培养连续5 d,其目的是耗尽细胞内储存的雌激素.实验设溶剂对照组、雌激素对照组、抗雌激素(它莫西芬)对照组及三个实验组,采用流式细胞术、DNA片段凝胶电泳和细胞苏木素染色(HE),观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用的影响.[结果] 3.2×10-6 mol/L NP和3.2×10-5 mol/L BisA对MCF-7细胞处理72 h,与对照组相比,流式细胞仪分析结果表明,二倍体细胞(G1期细胞)明显增加,亚二倍体细胞峰(即细胞凋亡率)消失,DNA凋亡片段凝胶电泳不显示典型的凋亡DNA片段梯带,细胞苏木素染色结果也显示凋亡细胞明显减少.[结论] 与溶剂对照组相比,NP和BisA均能够抑制MCF-7细胞的凋亡作用,而3.2×10-4 mol/L DBP对细胞凋亡的影响作用不明显.这一结果提示,该类物质有可能是通过抑制细胞凋亡而发挥其促进MCF-7细胞增殖作用的.