用液相芯片技术定量测定人血清CEA、AFP和HBsAg

【目的】采用液相芯片技术同时定量测定人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和乙肝表面抗原（HBsAg），并对该方法进行评价。【方法】制备抗体交联微球及生物素标记抗体，用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定。[结果]同时检测CEA、AFP和HBsAg时的线性范围分别为0．032-200ng／mL、0．022-55U／mL、0．26—1000ng／mL，最低检测限分别为8．90pg／mL、0．013U／mL、0．24ng／mL，批内变异系数（cv）〈9％，批间CV〈14％。检测CEA、AFP、HBsAg的灵敏度分别为96．4％、95．8％、92％，特异度分别为95．6％、94．2％、100％，准确度分别为96％、95％、96％。其检测结果与化学发光免疫分析法（CLIA）或时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）之间呈显著的等级相关关系。该方法仅需1μL标本，3h即可完成检测。【结论】液相芯片技术具有可联合检测多项指标、高通量、线性范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点，具有临床应用潜力。     

低密度基因芯片技术检测人乳头瘤病毒基因型

[目的]利用低密度基因芯片方法对人乳头瘤病毒（HPV）进行分型检测,建立一种经济实用的临床HPV感染的基因型检测方法.[方法]利用低密度基因芯片方法对145例阴道镜门诊病人的宫颈拭子标本进行HPV-DNA检测并分型.[结果]被检人群中共检测出57例HPV阳性,88例HPV阴性,HPV的感染率为39.3%,阳性标本中检测出12种高危型别,2种低危型别.其中单型感染51例（89%）,混合感染6例（11%）,16,31,18,58型检出率较高.[结论]低密度基因芯片是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高的检测方法,在HPV和宫颈癌的筛查与诊断中有很大的应用价值.     

鸡胚内神经营养活性物质的提取及其生物活性

 【目的】从鸡胚内提取具有神经营养生物活性的组分。【方法】分别取胚龄为E10、E16、E19的鸡胚，匀浆离心后，上清超滤，获得5个组分，即相对分子质量Mr〈3×10^3、Mt=3×10^3～〈10×10^3、Mt=10×10^3～〈30×10^3、Mr=30×10^～≤50×10^3与Mr〉50×10^3。采用新生大鼠海马神经元与鸡胚背根节体外培养方法，观察各组分的促神经元存活及突起生长的作用。用MTT法测定神经元的活性。【结果】胚龄E16与E19的鸡胚内相对分子质量M〉50×10^3的组分有明显的促进海马神经元细胞存活、分化和突起生长及鸡胚背根节突起生长的作用。【结论】鸡胚内含有较强的促进神经元存活、分化与突起生长的神经营养活性物质。     

反向点杂交检测肝癌细胞DNA甲基化方法的建立

目的建立反向点杂交(RDB)检测DNA甲基化的方法,并应用于临床肝癌细胞MAGE-A3 5'端CpG位点异常甲基化的检测。方法亚硫酸氢盐修饰后聚合酶链式测序分析细胞株Hep G2和外周血白细胞DNA的甲基化模式差异,建立RDB检测DNA甲基化方法,进行方法学评价,并运用于临床肝癌病理组织标本、肝硬化组织标本和正常对照组。结果 RDB检测肝癌细胞MAGE-A3 5'端CpG位点异常甲基化的灵敏度、特异度和准确性分别是83%(25/30)、100%(60/60)和94%(85/90)。其与临床肝癌诊断金标准的检验结果一致性较好(Kappa=0.870,P<0.05)。结论建立了RDB检测肝癌细胞DNA异常甲基化的方法,并可用于肝癌的临床早期诊断。     

沙眼衣原体荧光PCR试剂盒的研制及临床考核

目的：用荧光PCR(fluorescencePCR，F-PCR)方法研制沙眼衣原体（chlamydia Trachomatis，CT）DNA检测试剂盒，通过临床验证考核其性能，并与其它方法比较。方法：设计合成了CTF-PCR诊断试剂盒。检测了516份临床分泌物标本，以McCoy细胞培养法和Abbot公司的LCx试剂盒为对照。结果：阳性率21.1%，灵敏性98.2%，特异性99.8%。结论：F-PCR显优于培养法，与LCx相当。F-PCR试剂盒可以检测CT的真实感染情况，对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。     

中国海南黎族人群15个STR位点的遗传多态性

【目的】研究海南黎族族人群15个STR位点D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、VWA、CSFlPO、D8S1179、TPOX、FGA、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、D19S433、D2S1338的遗传多态性。【方法】通过人类短串联重复序列（short tandem repeat，STR）复合扩增、基因扫描、基因分型调查了110名黎族无关个体15个STR位点等位基因分布情况。【结果】15个STR位点均符合Hardy—Weinberg平衡，共检出149个STR等位基因，其频率分布在0．0045-0．5045之间，杂合度（heterozygosity，H）为0．6716～0．8754，个体识别力（discrimination power，DP）为0．8770～0．9673，非父排除率（probabilities of pakmity exclusion，EPP）为0．4383～0．7396，多态信息含量（polymorphic information content，PIC）为0．6265～0．8574。【结论】选用的15个STR位点均能检出等位基因遗传多态性。并具有较丰富的信息含量，为进一步研究中华民族STR遗传结构提供了基础资料。     

锁核酸探针多重荧光定量PCR检测HBV基因变异

[摘要] 目的 描述并评价锁核酸（locked nucleic acid,LNA）探针实时荧光定量聚合酶链反应（Real-Time PCR）检测乙型肝炎病毒（HBV）204位基因突变的方法及特点。方法 分别用直接测序法、锁核酸（LNA）探针实时荧光定量PCR检测109例接受拉米夫定（LAM）治疗6个月以上的慢性乙型肝炎患者的血清样本。结果 LNA探针实时荧光定量PCR能检测HBV野生型YMDD和其突变型YVDD,YIDD。而且,这种方法还可以检测HBV野生型和变异型的混合。LNA探针相比普通探针在检测野生型和突变型混合样本方面,更敏感,区分度更好。结论 LNA探针实时荧光定量PCR检测YMDD变异具有快速,灵敏,等特点,可以用于大量临床样本的快速筛查,在监测拉米夫定治疗疗效及发现新耐药突变型等方面具有广泛的应用前景。     

神经生长因子(NGF)促进老年痴呆模型鼠学习记忆恢复和突触重建

<正>切断老年鼠(24月龄)左侧穹窿海马伞,造成痴呆模型.用Momrris水迷宫和电镜技术分析脑室注射NGF对模型鼠行为和突触的影响.结果显示:(1)定位航行试验中,损伤对照组大鼠建筑平台潜伏期所需时间,在稳定后的平均值为38秒,而损伤治疗组为20秒,相互间具有显著性差异(P相似文献   

衰老小鼠线粒体DNA缺失突变的研究

目的测定不同年龄组及D-半乳糖诱导的衰老小鼠线粒体DNA(mtDNA)缺失突变,探讨mtDNA缺失突变与衰老的关系。方法用聚合酶链反应技术和琼脂糖凝胶电泳检测mtDNA缺失片段,用密度扫描技术对扩增片段进行相对定量。缺失片段构建质粒后,直接测序进行鉴定。结果全部小鼠的肝、脑与海马组织内均存在4239bp的mtDNA缺失片段。老年鼠肝、脑与海马组织内mtDNA缺失的比例较青幼年鼠明显增加(P<均0.01)。衰老模型鼠不同组织mtDNA缺失的相对百分含量均明显高于实验对照组(P均<0.01),肝组织中mtDNA缺失的比例较大脑皮层和海马组织更高。结论4239bp的mtDNA缺失片段普遍存在于小鼠中,与增龄和衰老相关,可作为衰老的一种分子生物标志。     

PS-TaqMan PCR检测巯基嘌呤甲基转移酶基因多态性

目的为临床开展巯基嘌呤类药物的个体化用药需要,发展一种适合临床实验室检测TPMT的基因多态性的方法。方法改进TaqMan错配扩增突变检测法（TaqMAMA）,建立引物特异性TaqMan聚合酶链反应（PS-TaqManPCR）,检测245例临床样本的TPMT＊3C突变,结果用双向测序方法验证。结果 PS-TaqManPCR能够准确检测TPMT＊3C突变,TMPT＊1/＊3C基因型频率是2.4%。结论成功发展PS-TaqManPCR作为临床检测TPMT基因多态性的方法 ,该方法可靠、高通量且效率高,适合临床实验室对样本大规模检测的需要。