精神发育迟滞患儿的细胞遗传学研究

本室对１５６０例轻度精神发育迟滞患儿（魏氏智测法ＩＱ５１－８０）外周血染色体进行了分析，染色体异常２７例（占总数１．７％），染色体结构异常１８例，其中９号染色体臂间倒位患儿８名，约占染色体结构畸变病例总数的４４．４４％；染色体数目异常９例，均为性染色体数目异常，患儿的脆性表达频率平均为１８．４５±１１．７６％，显著高于正常对照组。结果提示９号染色体臂间倒位对精神发育的影响有待进一步探讨，脆性表达频率的增高对智力的影响不容忽视。     

小鼠胚泡植入前、中、后子宫内膜nm23-M2动态表达

目的研究抑癌基因nm23-M2在小鼠胚泡植入前、中、后子宫内膜的动态表达。方法采用RT-PCR及免疫组织化学方法分别检测小鼠妊娠第2天（植入前）、第5天（植入中）、第7走（植入后）子宫内膜nm23-M2表达。结果RT-PER测得胚泡植入前、中、后子宫内膜中均存在nm23-M2的表达，但在妊娠第5天植入窗口期（植入中）nm23-M2 mRNA/β-actin mRNA的比值明显升高，与植入前和植入后相比较，具有显著差异（P〈0．01）。免疫组织化学分析显示妊娠第5天子宫内膜nm23-M2表达为强阳性，而植入前和植入后子宫内膜nm23-M2表达多为弱阳性。表明胚泡植入窗口期子宫内膜nm23-M2表达上调。结论nm23-M2可能参与了小鼠胚泡植入。     

Hsa-miR-193b抑制人子宫内膜腺癌细胞株HEC-1B侵袭能力

目的探讨Hsa-miR-193b对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B侵袭的影响及其相关机制。方法将Hsa-miR-193b模拟物(mimics)、Hsa-miR-193b抑制剂(inhibitor)转染HEC-1B细胞,Real-time PCR证实转染是否成功;Transwell小室法检测转染Hsa-miR-193b mimics后HEC-1B细胞的侵袭能力;通过miRGen、Targetscan、Pictar数据库筛查Hsa-miR-193b指向与侵袭相关的靶基因;Real-time PCR检测转染Hsa-miR-193b mimics转染组和对照组mRNA水平;Western blot检测各组GRB7蛋白表达的水平。结果①Hsa-miR-193b mimics、Hsa-miR-193b inhibitor转染HEC-1B细胞成功,两转染组Hsa-miR-193b表达水平与未转染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②转染Hsa-miR-193b mimics组与对照组比较,肿瘤细胞的侵袭能力明显降低(P<0.05)。③转染后,靶基因GRB7蛋白Hsa-miR-193b mimics组表达下降(P<0.05)、Hsa-miR-193b inhibitor组表达增加(P<0.05),且各组GRB7 mRNA水平无显著变化。结论在HEC-1B中转染Hsa-miR-193b mimics能下调GRB7蛋白表达,并抑制HEC-1B细胞的侵袭。     

DNA甲基化数据分析方法和软件应用

目的分析DNA甲基化芯片实验过程质量控制方法、数据统计分析要点及实验结果的验证和数据的可视化处理。方法利用文献、DNA甲基化实验数据探讨DNA甲基化研究中的方法学。结果 DNA甲基化芯片初筛异常过程应多在步骤质量控制工作中,包括DNA片段化、免疫共沉淀阳性对照的选择、去除原始扫描噪音信号和数据均一化处理。DNA甲基化芯片的结果可采用常用的甲基化特异性PCR(MSP)和甲基化测序PCR(BSP),引物设计软件包括Methprimer和Methyl Primer Ex-press。DNA甲基化芯片分析数据的可视软件为Signal map;BSP结果的可视化可采用Windows系统下的执行软件QUMA和BISMA。结论 DNA甲基化研究,应从多角度控制实验的设计和数据的产生及结果的分析。     

分化抑制因子3在胚胎植入中的作用

目的：检测分化抑制因子３（inhibitors of differentiation 3,Id3）基因在小鼠早期妊娠模型和人工诱导蜕膜化模型中子宫内膜中的表达规律;探究Id3基因在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的作用。方法：应用Western blot及qRT-PCR检测Id3在早期妊娠和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达;利用分离的原代小鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化、过表达Id3基因,分析Id3对基质细胞蜕膜化的影响。结果：Id3在小鼠早期妊娠模型中高表达于子宫内膜容受期形成阶段（孕第4天）（P蛋白质=0.001,PmRNA=0.001）,胚胎着床后基质细胞发生分化的蜕膜化子宫中表达较低（PD5蛋白质=0.026,PD5mRNA=0.038）;体内人工诱导蜕膜化小鼠子宫内膜Id3的表达明显低于未发生蜕膜化的对照子宫（P蛋白质=0.005,PmRNA=0.000）;体外人工诱导蜕膜化可抑制Id3基因的表达（P蛋白质=0.000,PmRNA=0.001）;过表达Id3可以明显降低体外子宫内膜基质细胞蜕膜化过程;Stat3信号参与调控Id3的表达调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。结论：Id3参与小鼠胚胎植入并调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。     

自然流产模型小鼠子宫蜕膜组织miRNAs的表达

目的 寻找自然流产模型小鼠(CBA/J×DBA/2)子宫蜕膜组织与正常妊娠小鼠(CBA/J×BALB/c)子宫蜕膜组织之间差异表达的miRNAs.方法 建立自然流产小鼠模型和正常妊娠小鼠模型,利用miRCURY LNATM microRNA Arrays 10.0检测两组孕小鼠子宫蜕膜组织miRNAs的表达,筛选两组小鼠子宫蜕膜组织差异表达的miRNAs,并对其进行功能检索和靶基因预测.结果 CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率为30.9%,CBA/J×BALB/c小鼠胚胎吸收率为7.0%,两者差异有统计学意义(P<0.01).miRNAs芯片数据表明流产蜕膜组织和正常蜕膜组织之间有13个miRNAs存在明显表达差异(ratios≥2.0或≤0.5),其中表达上调8个,表达下调5个.预测软件显示miR-21和miR-26a的靶基因分别是和妊娠相关的RECK和LIF两个因子.结论 小鼠子宫蜕膜组织miR-21和miR-26a的差异性表达可能在小鼠胚胎自然流产过程中扮演重要角色.     

吸烟对重庆主城区成年男性精子凋亡及精液质量的影响

目的:探讨吸烟对重庆市主城区健康成年男性精子凋亡和精液质量的影响。方法:235例健康成年男性根据吸烟习惯分为吸烟组和不吸烟组。不吸烟组89例,吸烟组146例。采用计算机辅助精液分析系统检测精液常规参数;流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI荧光染色检测精子凋亡(AN-/PI-、AN+/PI-、AN+/PI+、AN-/PI+精子比率),并对吸烟组和不吸烟组的各项参数进行比较研究。结果:与不吸烟组比较,吸烟组的早期凋亡精子(AN+/PI-)率高于不吸烟组[(8.1±5.1)%vs(6.8±3.8)%,P=0.039],而晚期凋亡精子(AN+/PI+)率两组间差异无显著性[(5.6±5.2)%vs(5.5±5.1)%,P=0.87];两组间精液量、精子密度、精子活动率、活力和正常形态精子率等精液常规指标的差异均无显著性(P=0.30;0.82;0.37;0.81;0.84)。结论:吸烟者早期精子凋亡率较不吸烟者高,提示吸烟可能诱导精子出现早期的细胞损害。精子凋亡可作为较精液常规指标更为敏感的生物标志物反映吸烟对男性精子造成的损伤。     

Klinefelter综合征X染色体着丝粒区α-卫星DNA变异

目的从DNA分子水平建立研究X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA变异的方法,发现Klinefelt综合征患者的X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA串联重复序列结构变化与染色体不分离的关系.方法采用(representative sampling of multiple repetitive units,rep)PCR方法,通过设计适当的引物,对α-卫星DNA多个单拷贝串联重复序列同时进行扩增,检测重复序列中结构变化的种类、频率及重组位点.结果首次发现由缺失产生的562 bp和220 bp变异片段和重组位点,异常组的570、562、220 bp构成显著高于正常组(P＜0.05).Logistic回归分析显示:570、562bp和220 bp 3个短片段同时出现和任两个短片段同时出现均是疾病相关的危险因素.结论Klinefelt综合征的X染色体着丝粒区α-卫星DNA过多的重组可能是造成X染色体不分离的重要原因之一.     

康定冬虫夏草与人工虫草的RAPD指纹图谱比较研究

目的:用RAPD方法对康定虫夏、人工虫草及虫草发酵菌丝体进行指纹图谱的研究,为不同虫草的品质和药效差异提供分子依据。方法:从65个随机引物中筛选出7个引物,以这7个引物进行PCR扩增,电泳得到其指纹图谱。结果:没有发现任何两个样本拥有完全相同的RAPD标记,康定冬虫夏草和人工虫草具有较高的遗传多态性,而与虫草发酵菌丝体相比差异较大。结论:来自不同产地冬虫夏草群体均表现出其独特的RAPD标记,其差异可能系虫体的不同所致。随机扩增的DNA片段的差异是否预示其药效的不同,有待进一步研究。康定冬虫夏草与人工虫草的RAPD指纹图谱比…     

教育部“生殖与发育国际合作联合实验室”——基础研究团队（生殖生物学研究室）介绍

1团队介绍 生殖生物学研究室依托重庆医科大学公共卫生学院,予2004年建立,2016年成为教育部"生殖与发育国际合作联合实验室"核心组成部分,2019年进入重庆市教委"高水平科研创新平台培育计划".