对氧磷酶-1基因多态性与南京地区脑梗死发病风险的关联研究

目的探讨对氧磷酶-1(paraoxonase 1,PON1)基因多态性位点rs705381、rs854572、rs3735590、rs854571和rs662与南京地区人群脑梗死发病的相关性。方法 Massarray SNP分型技术检测并分析292例脑梗死患者和292例健康人群中上述5个多态性位点的基因型和频率分布;AU5400生化分析仪检测上述人群的常规生化指标;二元非条件Logistic回归模型分析上述位点不同基因型与脑梗死发病风险的相关性。结果血压、空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、糖化血红蛋白(Hb A1C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)的表达异常与脑梗死相关(P均0.05)。PON1基因4个多态性位点(rs705381、rs854572、rs3735590和rs854571)在脑梗死患者和健康人群间的基因型频率分布差异无统计学意义(P均0.05),而脑梗死患者PON1基因rs662位点的CT(52.4%vs 41.44%,P0.05,校准OR=1.62,95%CI=1.06~2.49)和CT/TT(65.41%vs 56.16%,P0.05,校准OR=1.49,95%CI=1.00~2.25)基因型频率分布明显高于健康人群,但与上述临床指标无明显的相关性。结论 PON1基因rs662位点的多态性可能是南京地区脑梗死发病的遗传易感因素。     

临床检验试剂耗材网络化管理系统的建立及应用

目的探讨临床检验试剂耗材网络化管理系统的建立及其应用价值。方法采用三层B/S模式,基于"互联网+"和实验室信息管理系统建立临床检验试剂耗材网络化管理系统。结果建立了临床检验试剂耗材网络化管理系统,实现了对临床检验试剂耗材的全程数字化管理。结论该系统的建立有效提高了对临床检验试剂耗材管理水平和工作效率,确保了试剂耗材信息的完整性和可追溯性。     

医院就诊人群HBsAg与抗HBs双阳性HBV感染者的流行病学与分子病毒学特征

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和抗HBsAg抗体(抗HBs)同时阳性的HBV感染者的流行病学及分子病毒学特征。方法分析52 070例医院就诊人群HBV血清学标志物检测结果,以HBsAg和抗HBs双阳性患者为实验组,HBsAg阳性、抗HBs阴性患者为对照组,比较2组患者的流行病学特征。半巢氏PCR扩增2组患者HBV S蛋白编码区并测序,比较2组间在不同基因区、基因型及临床诊断时的统计学差异。结果医院检测人群HBsAg阳性率为20.40%(10 621/52 070),其中HBsAg、抗HBs双阳性率为2.48%(263/10 621)。HBsAg、抗HBs双阳性在0~9岁和≥80岁人群流行率较高,而HBsAg阳性、抗HBs阴性则相反。实验组S蛋白氨基酸突变率显著高于对照组(1.52%vs 0.81%,P0.01),差异主要存在于主要亲水区(MHR)(1.68%vs 0.57%,P0.01)。实验组中除肝癌(HCC)患者外(1.97%vs 2.21%,P0.05),乙肝携带者、慢性乙型肝炎(CHB)患者和肝硬化(LC)患者的S蛋白突变率均显著高于对照组同疾病患者(分别为1.47%vs 0.65%,1.28%vs0.84%,2.21%vs 0.44%,P均0.05)。结论 HBsAg、抗HBs双阳性以0~9岁和≥80岁HBsAg阳性人群更多见。HBV感染者血清HBsAg和抗HBs共存可能与S蛋白(主要为MHR)的突变造成的免疫逃逸有关。HBsAg、抗HBs双阳性和HBsAg阳性、抗HBs阴性患者之间S蛋白的突变率差异与患者肝脏疾病所处的阶段有关。     

循环肿瘤DNA检测在恶性肿瘤诊治中的应用进展与问题思考

肿瘤组织是检测驱动基因突变的理想标本,获得组织标本的方式有内镜活检、淋巴结活检、手术切除等。对于失去手术机会的晚期肿瘤患者,临床很难获得或难以获得足量组织标本用于基因检测。循环肿瘤DNA(ctDNA)是肿瘤细胞坏死、凋亡释放入血的DNA,其基因组信息与肿瘤组织一致。晚期肿瘤患者ctDNA是良好的组织替代品,可作为靶向药物基因靶点检测的补充。常见ctDNA检测技术有突变扩增阻滞系统(ARMS)、数字PCR(dPCR)、新一代测序(NGS)等。不同方法原理不同,灵敏度不同,一次可检测的基因个数和位点也不同。该文对ctDNA检测及其在肿瘤早期诊断、用药指导、疗效评估、复发监测、预后等方面的研究作一简要概述,并阐述存在的问题和一些思考。     

多发性肌炎/皮肌炎患者血清中外泌体的分离鉴定

目的从多发性肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis,PM/DM)患者外周血血清中分离鉴定外泌体(exosome),并进行初步的蛋白质研究。方法用Exo QuickTM试剂盒分离纯化PM/DM患者血清exosome;透射电镜观察其形态特征,Nanosight可视型纳米颗粒分析仪检测粒径大小分布情况;western blot鉴定exosome的表面标志物CD9,CD81,Flotillin-2;BCA法对其所携带的蛋白质进行定量分析;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析其蛋白质组分。结果透射电镜下患者血清exosome呈圆形或椭圆形膜性小囊泡,直径分布范围92±67 nm;western blot结果表明,PM/DM血清来源的exosome存在表面标志物CD9、CD81、Flotillin-2;BCA法测定PM/DM患者exosome总蛋白浓度为14.68(6.00,32.55)μg/μL,健康组exosome总蛋白浓度为14.09(8.00,23.28)μg/μL,SDS-PAGE显示两组血清exosome均在Mr(×103)为55~70处有高丰度蛋白质富集,在Mr(×10~3)为40~55处存在差异条带。结论成功从PM/DM患者的外周血中分离出血清exosome,并为寻找差异蛋白质提供实验依据。     

真武汤对渗透泵恒释ADR肾病综合征大鼠的干预作用

目的:通过渗透泵恒释技术建立阿霉素肾病综合征(NS)模型,以真武汤干预治疗,评价真武汤对NS大鼠的治疗效果。方法:阿霉素(14.5 mg.kg-1)按渗透泵灌注要求填充,手术植入大鼠腹腔,通过渗透压恒释阿霉素诱发肾病综合征模型,将大鼠随机分为真武汤高、低剂量组(24,12 g.kg-1.d-1),地塞米松组(0.9 mg.kg-1.d-1),给药4周,观察动物一般情况,尿蛋白、血压、血脂、血清蛋白及肾功能指标变化,肾小球IgG表达,评价阿霉素渗透泵肾病综合征模型以及真武汤的干预作用。结果:阿霉素渗透泵NS大鼠成活率显著提高,实验过程中无动物死亡;模型组大鼠第2周出现典型的肾病综合征症状,与空白组比较,24 h尿蛋白、血压、血脂明显升高,血清蛋白及肾功能明显降低(P<0.01);与模型组比较,真武汤高、低剂量组能显著改善NS大鼠精神、活动、摄食量、毛色等状况,明显减轻NS大鼠24 h尿蛋白(109.85±14.65),(49.75±5.14),(51.43±4.46)mg,恢复大鼠血清总蛋白(TP):(57.64±3.64),(61.26±2.21),(60.85±1.91)g.L-1,白蛋白(ALB):(21.70±2.18),(25.93±2.74),(25.00±2.64)g.L-1水平,降低大鼠血清总胆固醇(2.91±0.50),(2.17±0.26),(2.12±0.31)mmol.L-1、甘油三酯(1.05±0.29),(0.49±0.12),(0.61±0.15)mmol.L-1水平,降低大鼠血压、血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)(P<0.05或P<0.01);减少大鼠肾小球系膜区IgG的沉积。结论:通过渗透泵恒释阿霉素建立肾病综合征模型,可提高造模成功率和模型稳定性,真武汤能减少NS大鼠尿蛋白,提高血浆蛋白水平,减少血液高凝状况,恢复肾功能及肾小球结构,改善NS症状。     

急性髓细胞白血病合并食管癌及血小板异常升高1例

1临床资料 患者,男,66岁,反复发热1个月,伴进行性吞咽困难,体温最高38.9℃,伴畏寒、寒战,无咳嗽、咳痰、流涕,无腹痛、腹泻,自服感冒药、退热药(具体不详),后未见明显好转.2016年9月于当地医院行胃镜检查,内镜示中段距门齿约25 ～35 cm可见菜花样不规则环形肿块,触之易出血,病理结果光镜下见鳞状上皮,见癌组织,癌细胞呈团块状,癌细胞核大,深染,异型性明显,为低分化鳞癌(图1),诊断食管癌.     

体外RNAi对S100A4基因表达及其对骨肉瘤细胞侵袭、转移能力的影响

[目的]应用RNAi技术抑制人骨肉瘤MG-63细胞S100A4基因的表达,并观察对MG-63细胞增殖及体外侵袭能力的影响。[方法]合成针对S100A4的siRNA载体,并根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列及非特异性的siRNA。将培养细胞分为C组(空白对照组);C1组(转染脂质体组);C2组(转染非特异性的siRNA组);S1、S2、S3组(转染特异性的siRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ组)。荧光倒置显微镜下观察转染情况,Real-time PCR方法检测转染前后S100A4基因表达变化,应用Western-Blot方法检测转染前后S100A4蛋白表达变化。筛选出转染效率最高的特异性siRNA组作为后续实验的实验组。后续实验分为正常细胞组,阴性对照组和实验组,应用MTT法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖率变化,应用Transwell小室实验检测细胞的侵袭及转移能力变化。[结果]倒置显微镜下C2组与S1、S2、S3组培养细胞的细胞浆均可见绿色荧光。S1、S2与S3组的S100A4 mRNA表达水平均有不同程度的下调,以S3组最为显著。Western-Blot检测S100A4蛋白表达结果与其相符。MTT法和平板克隆形成实验均显示S3组细胞增殖受到抑制,与正常细胞组、阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。Tran-swell小室实验显示RNA干扰S100A4基因表达后肿瘤细胞的运动侵袭能力明显下降,穿过人工基底膜细胞数量明显减少,与正常细胞组、阴性对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)。[结论]体外合成的S100A4特异性siRNA能够抑制骨肉瘤细胞系MG-63的S100A4表达,进而抑制细胞的增殖和体外侵袭能力。     

MoCA在轻度认知障碍诊断中的应用和发展

轻度认知障碍(MCI)是介于正常老化和阿尔茨海默病(AD)之间的过渡阶段,有发展成AD的高度危险。MoCA能较全面评估MCI患者的认知功能,且可用于筛查MMSE得分正常的MCI患者。但其应用亦有一定的局限性,仍需要进行大样本量、多中心的试验。本文就MoCA的内容、特点及其在MCI中的应用和考评分析情况进行综述。     

Rho/ROCK信号通路与青光眼

青光眼是眼科临床中常见的致盲性眼病之一。目前的治疗方法主要是通过药物或手术降低眼压,对视网膜神经节细胞及其轴突损伤的保护也越来越引起人们的重视。随着对相关卷曲螺旋形成蛋白激酶通路(Rho/ROCK)生物学功能的深入研究,目前发现抑制Rho/ROCK通路可以增加小梁网途径的房水引流,降低眼内压,增加眼部血液供应,促进神经节细胞的存活。本文就Rho/ROCK通路与青光眼关系的研究进展进行综述。