人瘢痕成纤维细胞中Sp-1等转录因子的研究

目的：研究增生性瘢痕成纤维细胞中纤维化相关的转录因子。方法：人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞原代、传代培养后抽提核蛋白。人工法合成转录因子Sp-1、NF-I、NF-κB识别序列的双链寡核苷酸，并采用Dig-ddUTP 3’末端标记该双链寡核苷酸。电泳迁移率改变实验(EMSA)法研究瘢痕成纤维细胞中纤维化相关的Sp-1、NF-I、NF-κB等转录因子。结果：在人增生性瘢痕成纤维细胞的核蛋白中存有纤维化相关的Sp-1、NF-I、NF-κB等转录因子。结论：瘢痕纤维化的发生、发展与纤维化相关的转录因子Sp-1、NF-I、NF-κB密切相关。     

人α2(Ⅰ)型胶原基因启动子活性研究

目的探索器官纤维化形成中调控Ⅰ型胶原基因高水平转录的启动片段及TGF-β、PDGF-BB、IGF-1等细胞因子对其活性的影响. 方法从人α2(Ⅰ)胶原基因转录起始点上游-2.4kb至+58bp的片段中,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的质粒组成5个重组体,转染上述重组体至正常人原代培养皮肤成纤维细胞,测定细胞CAT表达水平以比较各重组体的启动子活性,同时加入细胞因子,以测定其对Ⅰ型胶原启动序列的影响. 结果除 -129～+58bp序列外,其余4个重组体CAT表达水平均较高,其中-2292～+58bp、-1476～+58bp序列具较强启动CAT表达活性,-339～+58bp、-616～+58bp片段次之.TGF-β、IGF-1均能在一定程度上调人α2(Ⅰ)胶原基因启动活性. 结论人α2(Ⅰ)胶原基因片段-2292～+58bp、-1476～ +58bp、-339～+58bp有高启动活性,是进一步研究纤维化相关DNA结合蛋白的重要调控靶序列.TGF-β、IGF-1促进胶原表达,与其上调胶原基因启动活性有关.     

非综合征性唇腭裂的环境与基因多态性分析及归因危险度估算

目的 探讨环境暴露、MTHFR、TGFα多态性与NSCL/P的关系及估算其归因危险度。方法 选择76例NSCL/P患儿（病例组）和60例非NSCL/P儿童（对照组），调查环境、遗传因素，用PCR-RFLP检测MTHFR基因C677T和A1298C、TGFα基因TaqⅠ基因型．进行多因素Logistic回归分析，计算人群归因危险度，结果 分析显示孕早期感染史、孕早期服药史、MTHFR基因C677T、A1298C、TGFα Taq Ⅰ位点多态性均与NSCL/P有关（P〈0．05），比值比OR分别为4．524、4．246、4．387、2．263、2．565．人群归因危险度百分比分别为0．277、0．262、0．640、0.235、0．225，5个因素综合归因危险度百分比为0．886。结论 孕早期感染史、孕早期服药史、MTHFR基因C677T、A1298C及TGFα基因TaqⅠ多态性是NSCL/P的重要易感因素，人群综合归因危险度表明NSCL／P是环境与遗传因素共同作用而发生的。     

非综合征性唇腭裂的遗传因素和环境因素研究进展

非综合征性唇裂伴或不伴腭裂(NSCL／P)和非综合征性单纯腭裂(CPO)是常见的出生缺陷，是指不伴发其他系统器官畸形的，不在综合征之内的唇裂、唇裂合并腭裂或单纯腭裂的总称，是一种多基因易感性疾病，有复杂的遗传特点，绝大多数不符合盂德尔遗传模式。目前认为环境及遗传因素共同作用引起发病，研究热点、难点仍为唇腭裂的基因定位，国外学者已做了大量的研究工作，提出了几个可能的染色体易感位点，如3p21．2、6p23-p25、16p13．3(MMP25)、2p13和16q22-q24，可能的易感基因为TGTα、TGFβ3、MSX1、MTHFR、RARA和BCL3等，同时基因．基因的相互作用也受到关注，一些环境因素经检测证实为影响唇腭裂发生的风险因素，包括母亲吸烟、饮酒、服用抗癫痫药物、止吐药物、孕前孕期服用维生素、母亲的新陈代谢情况和接触农药等，但总体上文献报道不一致，近几年通过不断采用新的遗传标记，扩大位点检测范围以期寻找出新的基因位点，分子生物学技术的改进和改善统计学方法，使唇腭裂发病机制的明确将成为可能。     

真皮下血管网薄皮瓣在手部软组织缺损修复中的应用

目的　研究真皮下血管网薄皮瓣在手部软组织缺损修复中的应用。方法　对因外伤、热电等烧伤引起的手部软组织缺损或瘢痕挛缩畸形２３ 例（ 皮瓣面积为１６ ｃｍ ×５ ｃｍ ～８ ｃｍ ×４ ｃｍ） 患者,采用真皮下血管网皮瓣修复。结果　断蒂时间最短为术后７ ｄ ,最长为术后１２ ｄ ,２３ 例患者均获得满意效果。结论　该薄皮瓣在各种原因引起的手部软组织缺损修复中有其明显优点。     

真皮下血管网皮瓣在创伤修复及器官再造中的应用

真皮下血管网皮瓣（简称－薄皮瓣）是继游离皮瓣、肌皮瓣和筋膜皮瓣之后出现的又一类新型皮瓣,具有皮瓣薄、不臃肿、外观好、长宽比例大、断蒂时间短、愈合好、无皮片挛缩之弊,显著优于皮片和传统皮瓣,受到普遍重视［１～３］。我们在对真皮下血管网皮瓣成活因素研究基础上［５］,自１９９２年以来采用薄皮瓣移植术修复各部位软组织缺损及器官再造３３例,其中外伤性耳缺损再造４例,外伤性鼻缺损再造４例,阴道再造２例,获得满意效果。１　临床资料　本组应用薄皮瓣修复各部位软组织缺损及器官再造共３３例。其中修复软组织缺损２３例…     

小鼠α2(Ⅰ)胶原基因DNA结合蛋白研究

目的：初步分析小鼠α２（Ⅰ）胶原基因上游５‘－ＵＴＲ近端８００ｂｐ（－７８０￣５４ｂｐ）序列的ＤＮＡ结合蛋白。方法：ＰＣＲ扩增小鼠α２（Ⅰ）胶原基因－２５８￣＋５４ｂｐ,－５１９￣－２４８ｂｐ,－７４１￣－５０１ｂｐ片段,Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ末端标记ＰＣＲ产物,与经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ并转印至膜上的胶原产生细胞的核抽提物进行ＤＮＡ－蛋白质结合反应,以抗Ｄｉｇ抗体检测结合反应信号。结果：Ⅰ型胶原基因上游５’     

bFGF对人α1(I)原胶原基因启动子活性的调控

目的　观察bFGF对人皮肤成纤维细胞增殖的影响及调控α1(I)原胶原基因序列的作用。　方法　用组织块法培养人皮肤成纤维细胞并传代,采用BrdU掺入的ELISA法,测定不同浓度的bFGF对成纤维细胞增殖的影响。构建三种人α1(I)原胶原基因5'侧翼序列与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组质粒,用FuGENE转染试剂转染成纤维细胞,同时用p-sv-b-GAL表达质粒转染细胞作为阳性对照组,ELISA法测定经bFGF处理后成纤维细胞CAT的表达量。　结果　在体积分数2%或10%小牛血清培养条件下,bFGF加入浓度从0.25ng/ml增至64.00ng/ml,作用24h后,各组细胞增殖数值之间差异有显著性意义（P<0.05）。用三种重组质粒分别转染细胞,bFGF处理24h后,CAT相对表达量测定结果提示,bFGF组与对照组相比差异有显著性意义（P<0.05）。　结论　bFGF对人皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用,对胶原基因启动序列具有负性调控作用,且存在剂量依赖关系。     

针对SP1的圈套寡脱氧核苷酸抑制NIH3T3细胞活力和Ⅲα1胶原基因表达的研究

目的研究针对转录因子SP1的圈套寡脱氧核苷酸(Decoy-Oligodeoxynucleotide,Decoy-ODN)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的活力和Ⅲα1胶原基因表达的影响,探讨圈套寡脱氧核苷酸用于病理性瘢痕基因治疗的可能性及机理.方法设计合成针对SP1的特异性哑铃形Decoy-ODN.用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞.分别用流式细胞仪检测ODN转染效率,激光共聚焦显微镜观察ODN在细胞中的分布,电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证ODN与SP1的特异性结合.用WST-8检测ODN对细胞活力的影响.用RT-PCR检测ODN对细胞胶原基因表达的抑制作用.结果分别转染25nM,50nM、100nM、150nm SP1 Decoy-ODN,48h后,细胞活力依次为0.9331士0.0203、0.7479±0.0868、0.577±0.0347、0.4703±0.0147;转染100nM SP1 Decoy-ODN可明显抑制Ⅲα1胶原mRNA的表达(P＜0.01),抑制效果达60%.结论Decoy-ODN可以通过拮抗核转录因子SP1的活性而抑制NIH3T3细胞的活力和Ⅲα1胶原基因的表达.     

人皮肤成纤维细胞体外转染Brg1基因的实验研究

目的 探讨重组Brg1基因转染人皮肤成纤维细胞的可行性,以及转染对细胞增殖和活性的影响.方法 体外重组Brg1基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人皮肤成纤维细胞;通过流式细胞仪检测报告基因表达,并确定细胞转染效率;应用Realtime PCR比较转染前后Brg1 mRNA的表达;MTT法检测Brg1基因对细胞增殖能力的影响.结果 Brg1基因转染后,(73.0±6.7)％的被转染细胞表达报告基因;Brg1 mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为(6.23±1.18)、(1.11±0.22)和(1.52±0.12),转染组Brg1 mRNA相对表达量较未转染组及转染空载体组明显增高(P＜0.01);细胞的增殖能力在Brg1基因转染前后无显著差异.结论 人皮肤成纤维细胞可作为Brg1转染的靶细胞,转染Brg1基因对人成纤维细胞的增殖能力无显著影响.