纤维型和原浆型星形胶质细胞的分离培养及睫状神经营养因子对其增殖的影响

目的和方法：建立纤维型及原浆型星形胶质细胞体外分离培养的方法,并观察在体外睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对这两种细胞的增殖作用。结果和结论：经免疫组织化学鉴定,本方法分离培养的星形胶质细胞,纤维型纯度达９５％,原浆型纯度达９９％。ＣＮＴＦ可以促进纤维型星形胶质细胞的增殖,而对原浆型星形胶质细胞的促增殖作用不明显。     

Deltorphin Ⅰ单克隆抗体的制备及Deltorphin Ⅰ样免疫活性在大鼠脑和培养神经元的表达

Deltorphin(DADT)是由南美洲的一种蛙皮肤中分离出的鸦片样肽,对δ鸦片受体有很高的亲和力和选择性。它是由七个氨基酸构成的小肽,其氨基酸序列为Tyr-D-Ala-Phe-Asp-Val-Val-G1y.NH2。其中,第二位的DAla是其鸦片样活性所必须的。用L-Ala代替D-Ala则其活性消失。已发现大鼠和小鼠脑中含有这种肽的结合位点;向大鼠脑室注射该肽可以引起多种中枢效应,包括局部运动的刺激和记忆巩固等。据此推测脑中很可能存在DADT或其类似物。为证明这种可能性,我们将合成DADT肽在戊二醛存在下结合到BSA上制成抗原免疫Balb/c小鼠,三次加强注射后,…     

人重组白细胞介素—6对大鼠海马神经元Bcl—2表达？…

目的 观察重组人白细胞介素－６（ｒｈＩＬ－６）对体外培养大鼠海马神经元Ｂｃｌ－２表达的影响。方法 取培养３、７、１４、２１和２８天（ｄ）的两组（对照组和ｒｈＩＬ－６组）培养神经元,分别观察其生长发育和神经元活存数,并用抗Ｂｃｌ－２抗血清进行免疫组化染色,观察Ｂｃｌ－２免疫反应（Ｂｃｌ－２－ＩＲ）阳性和阴性神经元数目,计算Ｂｃｌ－２－ＩＲ阳性神经元所占百分率,并在图像分析仪上对Ｂｃｌ－２－ＩＲ神经元     

少突胶质前体细胞的增殖与铅、汞、镉剂量依赖性抑制作用及其细胞毒性效应细胞数量、细胞形态、表面标志物在发育过程中的变化

目的少突胶质细胞是形成中枢神经系统髓鞘的大胶质细胞,观察不同浓度的铅、汞、镉对体外培养的少突胶质前体细胞(包括少突胶质祖细胞和不成熟的少突胶质细胞)发育时的及时定型、神经元的存活以及轴突生长和突触形成等细胞增殖中形态学的变化,表面标志物的变化,以及数量的变化.方法实验于2004-03-01/08-01在军事医学科学院基础医学所实验室完成.采用振荡分离纯化的方法,用无血清培养液培养少突胶质前体细胞.取分离纯化的少突胶质前体细胞,培养皿或96孔板中的细胞2 d后分别加入各种毒物.96孔板分组无细胞的阴性对照,有细胞的空白对照,醋酸铅组分别加入10,50,100和0μmol/L醋酸铅,氯化汞组分别加入0.01,0.1,1.0和0mmol/L(等量培养液)氯化汞,氯化镉组分别加入0.04,0.2,1.5和0mmol/L氯化镉.培养皿分组同96孔板,但无阴性对照组.24 h后换成正常培养液,9 d后同时取出各组细胞,进行细胞计数和四唑盐比色法测定各组细胞的光吸收值(光吸收值越小,存活细胞越少,毒物的细胞毒性越大).同时观测少突胶质前体细胞形态和表面标志物的变化(少突胶质祖细胞A2B5抗体阳性表达,不成熟的少突胶质细胞残留有A2B5标记物,同时04-01抗体阳性;成熟的少突胶质细胞髓鞘碱性蛋白抗体阳性).结果①剂量依赖性细胞数量的变化不同浓度醋酸铅、氯化汞和氯化镉都能减少培养的少突胶质前体细胞的数量,与空白对照组比较差异显著(P＜0.05),且随着浓度的增加,细胞数减少.②毒物的细胞毒性作用四唑盐比色法测量结果显示醋酸铅、氯化汞和氯化镉都能减少培养的少突胶质前体细胞的光吸收值,与空白对照组比较差异显著(P＜0.05),且随着浓度的增加,其光吸收值越低.③细胞形态与表面标志物的变化正常少突胶质祖细胞培养两三天时,有单极和双极突起,极少数为三极突起,培养5～8 d时胞体伸出四五条较粗大突起,出现不成熟的少突胶质细胞,随后出现成熟少突胶质细胞的标记物髓鞘碱性蛋白抗体阳性;与毒物共培养的细胞除数量减少外,形态接近正常,正常表达细胞表面标志物,培养两三天时,也有单极和双极突起,极少数也有三极突起,表面残留有A2B5标记物,但培养七八天时才伸出四五条较粗大突起,表面还残留有A2B5标记物,同时有04-01抗体阳性,9 d时极个别细胞髓鞘碱性蛋白抗体阳性,表现出成熟的少突胶质细胞的特征,说明细胞发育延迟,并可见许多细胞碎片.结论①铅、镉和汞是以剂量依赖性方式影响和抑制细胞数量的增殖.②其细胞毒性作用影响细胞发育时的及时定型、影响轴突生长和突触的形成.③暴露在这些毒物中的少突胶质细胞表面标志物表达不受影响.④环境中铅、镉和汞中毒可影响少突胶质细胞的正常发育过程,发育延迟,从而导致髓鞘形成不良或脱髓鞘现象.     

少突胶质前体细胞的增殖与铅、汞、镉剂量依赖性抑制作用及其细胞毒性效应：细胞数量、细胞形态、表面标志物在发育过程中的变化

目的：少突胶质细胞是形成中枢神经系统髓鞘的大胶质细胞，观察不同浓度的铅、汞、镉对体外培养的少突胶质前体细胞(包括少突胶质祖细胞和不成熟的少突胶质细胞)发育时的及时定型、神经元的存活以及轴突生长和突触形成等细胞增殖中形态学的变化，表面标志物的变化，以及数量的变化。方法：实验于2004-03-01／08-01在军事医学科学院基础医学所实验室完成。采用振荡分离纯化的方法，用无血清培养液培养少突胶质前体细胞。取分离纯化的少突胶质前体细胞，培养皿或96孔板中的细胞2d后分别加入各种毒物。96孔板分组：无细胞的阴性对照，有细胞的空白对照，醋酸铅组分别加入10，50，100和0.01mol／L醋酸铅，氯化汞组分别加入0.01，0，1，1．0和0mmol／L(等量培养液)氯化汞，氯化镉组分别加入0．04，0，2，1，5和0mmol／L氯化镉。培养皿分组同96孔板，但无阴性对照组。24h后换成正常培养液，9d后同时取出各组细胞，进行细胞计数和四唑盐比色法测定各组细胞的光吸收值(光吸收值越小，存活细胞越少，毒物的细胞毒性越大)。同时观测少突胶质前体细胞形态和表面标志物的变化(少突胶质祖细胞A285抗体阳性表达，不成熟的少突胶质细胞残留有A285标记物，同时O4-01抗体阳性；成熟的少突胶质细胞髓鞘碱性蛋白抗体阳性)。结果：①剂量依赖性细胞数量的变化：不同浓度醋酸铅、氯化汞和氯化镉都能减少培养的少突胶质前体细胞的数量，与空白对照组比较差异显著(P&;lt;0．05)，且随着浓度的增加，细胞数减少。②毒物的细胞毒性作用：四唑盐比色法测量结果显示醋酸铅、氯化汞和氯化镉都能减少培养的少突胶质前体细胞的光吸收值，与空白对照组比较差异显著(P&;lt;0．05)，且随着浓度的增加，其光吸收值越低。③细胞形态与表面标志物的变化：正常少突胶质祖细胞培养两三天时，有单极和双极突起，极少数为三极突起，培养5～8d时胞体伸出四五条较粗大突起，出现不成熟的少突胶质细胞，随后出现成熟少突胶质细胞的标记物髓鞘碱性蛋白抗体阳性；与毒物共培养的细胞除数量减少外，形态接近正常，正常表达细胞表面标志物，培养两三天时，也有单极和双极突起，极少数也有三极突起，表面残留有A285标记物，但培养七八天时才伸出四五条较粗大突起，表面还残留有A285标记物，同时有O4-01抗体阳性，9d时极个别细胞髓鞘碱性蛋白抗体阳性，表现出成熟的少突胶质细胞的特征，说明细胞发育延迟。并可见许多细胞碎片。结论：①铅、镉和汞是以剂量依赖性方式影响和抑制细胞数量的增殖。②其细胞毒性作用影响细胞发育时的及时定型、影响轴突生长和突触的形成。③暴露在这些毒物中的少突胶质细胞表面标志物表达不受影响。④环境中铅、镉和汞中毒可影响少突胶质细胞的正常发育过程，发育延迟，从而导致髓鞘形成不良或脱髓鞘现象。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的:观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法:实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为3组:①正常对照组:细胞置于36℃,含体积分数为0.9的空气、体积分数为0.1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组:细胞移至4000cm3的恒温(36℃)密闭容器内,连续充以无氧气体(体积分数为0.9氮气、体积分数为0.1的CO2),在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组:在缺氧前24h在培养液中加入1μmol/L的纳洛酮,其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果:3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著(P>0.05)。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组(7.94±0.13,6.68±0.33,3.39±0.36,P<0.01),且缺氧组高于纳洛酮组(P<0.01)。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组(8.67±0.61,11.59±1.34,P<0.01),但两组均高于正常对照组(3.48±0.28,P<0.01)。结论:缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高,证实犤Ca2+犦i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关,且恢复氧供并不能纠正犤Ca2+犦i异常。应用纳洛酮后,在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的犤Ca2+犦i升高幅度较缺氧组明显减小,说明纳洛酮对缺氧的神经元犤Ca2+犦i具有一定的稳定作用,可以减轻神经元犤Ca2+犦i的升高,进而对神经元细胞起到保护作用。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮层神经元细胞的保护作用

目的　观察缺氧对大鼠皮层神经元细胞的影响及纳洛酮的保护作用。方法　取体外培养 12d的Wistar大鼠皮层控经元细胞 ,随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组 (缺氧前 2 4h加纳洛酮预处理 ) ;缺氧 6h后在常氧下继续培养 2 4h。观察各种条件下神经元细胞的存活率和形态学的改变 ,测定培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量。结果　缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡 ,LDH渗出量增多 ,细胞存活率减少 (P <0 0 1)。经纳洛酮预处理的神经元 ,缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组 ,LDH渗出显著低于缺氧组 (P <0 0 1) ,而存活率明显高于缺氧组 (P <0 0 1)。结论　缺氧能诱导皮层神经元损伤 ,而纳洛酮对神经元的缺氧损伤具有明显的保护作用     

缺氧/复氧对培养的大鼠海马神经元Fos、Jun表达和神经元调亡的影响

研究观察了缺氧 /复氧对体外培养的海马神经元Fos和Jun表达和神经元调亡的影响 ,实验采用培养 1 2d的海马神经元 ,置于 2 0 0 0cm3 的恒温 (36℃ )密闭容器内 ,连续充以无氧气体 (90 %N2 、1 0 %CO2 ) ,在缺氧条件下继续培养 2h、4h后取出 ,置含 1 0 %CO2 和空气的培养箱内复氧培养 2 4h和 72h。于不同时间取出 ,观察神经元存活数 ,分别用抗Fos和抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色 ,计数Fos和Jun表达阳性神经元百分率 ,并用原位末端标记(JUNEL)法和流式细胞术分别观察和测定缺氧 /复氧对体外培养海马神经元调亡的影响。结果显示 :缺氧…     

心率和肺通气量评价劳动强度的探讨

实验选用38名成年男子,平均年龄24.5岁。其中一半在跑步机上完成间断递增负荷运动,另一半在自行车功率计上完成连续递增负荷运动。结果表明,HR与Vo_2呈直线相关,氧脉搏、V_E/Vo_2分别与Vo_2呈非线性相关。氧脉搏与HR出现不同步增加和V_E/Vo_2由下降转向平稳的“转折点”相对应的HR和V_E分别为110次/min和24L/min左右。上述“转折点”说明,心脏工作效率和肺通气效率由增加逐渐转向降低。因此,我们初步认为,人长时间劳动的HR和V_E的适宜上限值分别为110次/min和24L/min。     

缺氧对海马培养细胞人重组白细胞介素-6免疫组化反应的影响

本文观察了缺氧对体外培养海马细胞中rhIL-6免疫反应的影响。结果显示，体外培养的海马神经元和神经胶质细胞的rhIL-6呈弱阳性免疫反应，缺氧1～4h后神经元和神经胶质细胞的rhIL-6免疫组化反应明显增强。对免疫染色细胞作图像分析结果显示，缺氧后神经元和神经胶质细胞的平均光密度较缺氧前增加，尤以缺氧2h时最明显，之后随缺氧时间延长，神经元和神经胶质细胞的平均光密度又逐渐减弱。上述结果表明，海马脑区存在rhIL-6免疫反应细胞；缺氧条件下rhIL-6免疫组化反应增强，提示rhIL-6可能参与脑缺氧损伤的调控。