降钙素基因相关肽对缺氧时大鼠海马培养神经元c—fos表达的影响

采用免疫组化（ABC）方法，观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c-fos的表达及降钙素基因相关肽（CGRP）的影响。结果显示，缺氧后海马神经元中Fos-免疫反应（Fos—IR）阳性胞核百分率随缺氧时间的延长而逐渐增多，图像分析的结果显示，缺氧后Fos—IR阳性胞核的平均失密度亦随缺氧时间的延长而逐渐增强。经CGRP孵育的海马神经元缺氧后Fos-IR阳性胞核的百分率和Fos-IR阳性胞核的平均光密度均明显低于非CGRP孵育组。本结果表明，缺氧能诱导体外培养海马神经元。c-fos的表达，神经肽CGRP能抑制缺氧海马神经元c-fos的表达。提示CGRP对海马神经元缺氧损伤可能具有一定保护作用。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的：观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法：实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞，随机分为3组：①正常对照组：细胞置于36℃，含体积分数为0．9的空气、体积分数为0．1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组：细胞移至4000cm^3的恒温（36℃）密闭容器内，连续充以无氧气体（体积分数为0．9氮气、体积分数为0．1的CO2），在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组：在缺氧前24h在培养液中加入1 μmol／L的纳洛酮，其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果：3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著（P〉0．05）。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组（7．94&;#177;0．13，6．68&;#177;0．33，3．39&;#177;0．36，P〈0．01），且缺氧组高于纳洛酮组（P〈0．01）。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组（8.67&;#177;0．61，11．59&;#177;1．34，P〈0．01），但两组均高于正常对照组（3．48&;#177;0.28，P〈0．01）。结论：缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高，证实[Ca^2＋]i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关，且恢复氧供并不能纠正[Ca^2＋]i异常。应用纳洛酮后，在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的[Ca^2＋]i升高幅度较缺氧组明显减小，说明纳洛酮对缺氧的神经元[Ca^2＋]i具有一定的稳定作用，可以减轻神经元[Ca^2＋]i的升高，进而对神经元细胞起到保护作用。     

缺氧对培养海马神经细胞c-fos表达的影响

本实验用c－fos样蛋白（Fos）免疫组化方法，观察缺氧诱导体外培养海马神经细胞c－fos的表达。取新生的Wistar大鼠，无菌条件下取双侧海马，胰酶消化成细胞悬液，接种于巴涂胶的塑料培养皿中，置于含IO％COZ的孵箱中进行培养。至第12天，取出分为常氧和缺氧两组，常氧组原条件下培养，缺氧组置于密闭容器内，缺氧条件下（90％N2，10％CO2）继续培养0．5，1，2，4，8和12h。取常氧和缺氧培养的细胞，固定后用FOS多克隆抗体进行免疫组化染色，同时设替代对照（用正常羊血清替代第一抗体），显微镜下分别计数50个相邻视野中Fos免疫反应阳…     

热处理延缓维甲酸诱导P19细胞的生长及向神经元分化

研究热环境对P19细胞生长和RA诱导的向神经元分化的影响,为探讨热环境刺激对神经系统发育的影响提供参考。成熟的P19细胞在热环境的条件下培养1h后,消化接种至培养皿中正常培养,于不同时间点取样分析细胞数目。热环境处理P19细胞后用维甲酸诱导分化4d,随后接种至培养皿中,参照神经元的原代培养方法培养12d,用神经元抗体免疫鉴定,计数不同培养时间NSE、NF阳性神经元在总体细胞中的比例。结果发现接受热处理的P19细胞贴壁不良,生长始终缓慢,说明热环境刺激阻止细胞生长分裂。P19细胞经RA诱导分化后出现类似神经细胞的突起和纤维网络,而热环境导致P19细胞向神经元分化明显迟缓,NF阳性细胞比例增加。     

低氧对胎鼠中脑NSCs的促体外增殖作用

目的观察低氧对大鼠中脑神经干细胞体外增殖的影响,并探讨其增殖的可能机制。方法取孕13.5 d的W istar大鼠,麻醉后取胚胎,分离中脑神经干细胞(NSC),常规培养鉴定后分3组:对照组;10%O2组;3%O2组。采用4孔板培养3~4 d后进行神经球记数,用流式细胞仪测定其增殖指数,最后用RT-PCR方法测定低氧(10%O2)不同时间点(1、3、6、12、24、48和72 h)低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA的表达水平。结果低氧组神经球记数和增殖指数明显高于对照组,尤以10%O2组最为明显(P<0.01);10%O2组12 h和48 h时的HIF-1αmRNA表达水平比同一时间点的对照组明显增加。结论轻中度低氧有利于NSC的体外增殖,而HIF-1可能在其中发挥了重要作用。     

滨蒿的化学成分

目的进一步研究菊科植物滨蒿(Artemisia scoparia)中的化学成分。方法采用硅胶柱色谱法、中低压柱色谱法、ODS柱色谱法、Sephadex LH 20柱色谱法以及高效液色谱法进行分离和纯化,并依据理化性质和波谱解析鉴定其化学结构。结果从植物滨蒿地上部分的体积分数为60%乙醇提取物(420 g)中分得6个化合物,分别鉴定为3羟基二十二酸2(5乙酰基2,3二氢苯并呋喃2基)丙酯(1)、2′(3′甲氧基3甲基丁烯基)对甲氧基乙酰苯(2)、5,8二甲氧基6,7亚甲二氧基香豆素(3)、8甲氧基6,7亚甲二氧基香豆素(4)、6去甲氧基茵陈色原酮(5)、2,4二羟基6甲氧基乙酰苯(6)。结论化合物1~6均为首次从该植物中得到,其中化合物1、2为新化合物。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响

实验观察低氧预处理对缺氧 /复氧后大鼠海马神经元Ｊｕｎ表达的影响。其方法为取培养 1 2ｄ的两组 (对照组和低氧预处理组 )神经元 ,同时置于缺氧环境 (0 .90Ｌ/ＬＮ2 +0 .1 0Ｌ/ＬＣＯ2 )中培养 4ｈ后取出 ,置含 0 .1 0Ｌ/ＬＣＯ2 和空气的培养箱内复氧培养 2 4ｈ和 72ｈ ,于不同时间取出 ,观察神经元存活数 ,并用抗Ｊｕｎ抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察Ｊｕｎ表达阳性和阴性神经元数目 ,计算Ｊｕｎ表达神经元所占百分率。结果显示 :经低氧预处理的海马神经元缺氧 -复氧后Ｊｕｎ表达阳性神经元百分率较对照组明显减少 ,神经元存活数明显…     

复方党参抗缺氧作用生理机制的探讨

提高机体抗缺氧耐力的研究,在军事医学和临床医学中均具有重要的实用价值和理论意义。近年来,国外关于非特异性抵抗力的概念获得了很大的发展。实验证明,具有抗缺氧耐力的机体,对其它致病因素也有较高的抵抗力。因此提高机体抗缺氧耐力的深入研究,对阐明机体获得非特异性抵抗力的机制,可能具有重要的理论意义。提高机体抗缺氧耐力的措施,包括锻炼、高度适应和药物。     

从新生小鼠、大鼠及鸡胚背根神经节分离的细胞培养

为了研究神经生长因子(NGF)对背根神经背细胞培养的作用,我们建立了背根神经节分离细胞培养的方法。在培养过程中观察了新生小鼠、大鼠以及鸡胚背根神经节细胞的生长分化。结果表明:在节根节神经元体外培养的早期1～2天NGF为必需的营养因子,而培养后期则不为背根神经节细胞生长所必需,在无NGF的条件下背根神经节细胞能继续存活。     

纳洛酮对体外培养的缺氧大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响

目的 :观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响及纳洛酮的保护作用。方法 :取体外培养 12 d的Wistar大鼠皮质神经元细胞 ,随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧加纳洛酮组。缺氧 6h后在常氧下继续培养2 4h,用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞仪检测不同时间段神经元细胞凋亡率。结果 :缺氧能诱导神经元细胞凋亡显著增加 ,纳洛酮可以降低凋亡率 ,与缺氧组相比差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :纳洛酮可抑制缺氧诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡 ,对神经元细胞具有保护作用