肾移植术后肺部感染84例患者预后的多因素Cox模型分析

目的:对影响肾移植术后肺部感染患者预后的相关因素进行评价.方法:回顾84例肾移植术后肺部感染患者的临床资料,统计PRA、免疫抑制方案、抗感染治疗方案等15项相关因素,应用Cox比例风险模型检验各因素与肺部感染患者生存时间的关系.结果:合并呼吸窘迫综合征(ARDS)、术后预防性应用更昔洛韦、应用OKT3及抗感染治疗方案是影响肾移植术后肺部感染患者预后的4个主要因素.各种口服免疫抑制剂方案对预后的影响无显著性差异.结论:应用Cox模型能够准确分析肾移植术后肺部感染患者的预后因素.ARDS、术后预防性应用更昔洛韦、应用OKT3及抗感染治疗方案是影响肾移植术后肺部感染患者预后的4个主要因素.     

粪菌移植治疗肾移植后复杂性难治性泌尿系感染1例

西安交通大学第一附属医院肾移植科收治1例肾移植术后因耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)引起复杂性难治性泌尿系感染的受者, 给予多种抗感染方案治疗仍多次复发, 效果欠佳;后通过改行粪菌移植(FMT)辅助治疗取得良好疗效, 随访时间>3个月, 期间体温正常, 尿培养阴性, 无腹泻、腹痛、恶心、尿路刺激及其他部位感染等不适, 移植肾功能稳定。     

高压氧对精索静脉曲张大鼠睾丸组织缺氧诱导因子1α、 脂质过氧化物、血管紧张素转化酶的影响及其作用机制*

目的：分析高压氧对精索静脉曲张大鼠睾丸组织缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、脂质过氧化物（LPO）、血管 紧张素转化酶（ACE）表达的影响及其机制。方法：将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和高压氧组;模 型组和高压氧组行精索静脉曲张手术造模,假手术组仅手术而不造模;假手术组和模型组大鼠手术或造模成功后 正常饲养,高压氧组采用高压氧进行干预治疗;取睾丸计重,行TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡;用免疫印迹 和实时荧光定量PCR法检测睾丸组织中HIF-1α、LPO、ACE及其mRNA表达;用ELISA 检测试剂盒测定睾丸组 织LPO、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、ACE表达水平。结果：高压氧组大鼠左侧、右侧和两侧 睾丸质量均明显高于模型组;高压氧组大鼠睾丸细胞凋亡率均明显低于模型组,睾丸组织LPO表达水平明显低于 模型组,而SOD、CAT、ACE表达水平均明显高于模型组;高压氧组大鼠睾丸组织HIF-1α、LPO蛋白和mRNA 表达均明显低于模型组,ACE蛋白和mRNA水平明显高于模型组。结论：高压氧对雄性SD大鼠精索静脉曲张干 预后可有效调节大鼠睾丸组织中HIF-1α、LPO和ACE的表达,进而减少睾丸细胞凋亡。     

膀胱尿路上皮癌中候选生物标志物转录因子21的甲基化机制及意义

目的 探讨膀胱尿路上皮癌中候选生物标志物转录因子21（TCF21）甲基化的意义。 方法 选择2016年10月~2017年10月间疑似膀胱癌患者142例,其中经病理学检测确诊为膀胱癌80例为研究组,经病理学检测确诊为非膀胱癌共62例为对照组。另选择同期进行体检的健康者尿标本40例作为健康组。检测研究组膀胱癌组织、癌旁组织、对照组病灶组织中TCF21甲基化水平,并检测研究组、对照组和健康组尿液中TCF21甲基化水平,分别比较膀胱癌组织、尿液中TCF21甲基化水平与临床病理特点间的关系,并分析两者对于膀胱癌的诊断效能。 结果 膀胱癌组织TCF21甲基化水平显著高于癌旁组织和对照组（P<0.05）,研究组尿液TCF21甲基化水平显著高于对照组和健康组（P<0.05）。男性、年龄>60岁、高的TNM分期和高分级的膀胱癌患者膀胱癌组织和尿液中TCF21甲基化水平更高（P<0.05）。膀胱癌组织与尿液中TCF21甲基化水平对膀胱癌均有较高的诊断意义,且两者的诊断意义差异无显著性（P>0.05）。 结论 TCF21基因在膀胱癌组织和膀胱癌患者尿液中均具有较高的甲基化水平,并且与病理特点相关,膀胱癌组织和膀胱癌患者尿液对于膀胱癌均具有较高的诊断意义。     

共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因修饰原代人内皮细胞包被大鼠胰岛模型的建立

目的:建立以分离培养的原代人脐静脉内皮细胞包被大鼠胰岛细胞模型。方法:分离培养原代人脐静脉内皮细胞,并分别通过免疫组化试验检测人Ⅷ因子相关抗原,透射电镜观察Weible-palade小体,荧光显微镜观察DiI-Ac-LDL的吞噬效果,对所分离的人脐静脉内皮细胞进行鉴定。分离大鼠胰岛细胞,然后在肝素化培养皿中进行共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被。对包被后的胰岛细胞进行形态学观察并检测其包被前后的功能。结果:分离培养的内皮细胞表达人Ⅷ因子相关抗原,电镜下可以观察到Weible-palade小体,荧光显微镜下可以观察到内皮细胞对DiI-Ac-LDL的吞噬。共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被胰岛模型可以观察到内皮细胞的绿色荧光,未包被胰岛和内皮细胞包被胰岛的胰岛素释放指数分别为4.09和3.94,与未包被胰岛实验组相比,内皮细胞包被胰岛对高糖刺激反应无明显差异,但胰岛素释放量有所减少。结论:成功分离培养并鉴定了原代人脐静脉内皮细胞,并成功建立内皮细胞包被胰岛细胞模型,包被后胰岛功能正常。     

小鼠骨髓CD117+造血干细胞定向分化为未成熟树突状细胞及其鉴定

目的 建立可以在体外稳定地获得大量高纯度未成熟树突状细胞的方法,并对获得细胞进行形态、功能以及表面标志的鉴定.方法 取健康C57小鼠骨髓,通过MACS系统分离、纯化CD117 造血干细胞;使用SCF IL-3进行体外扩增,在此基础上使用GM-CSF IL-4 IL-10诱导其定向分化为未成熟树突状细胞;进而在倒置显微镜、扫描电镜以及透射电镜下观察其形态、功能,并使用流式细胞计数法检测其表面标志的表达,对其鉴定.结果 SCF IL-3可以分别在3、5、7 d时体外扩增造血干细胞达10.34±1.43、22.65±2.71、54.39±3.08倍;小鼠HSC可被成功诱导分化为未成熟树突状细胞,后者具有吞噬功能,表面树突较为短小,呈毛刺状,表面标志表达情况为CD11c 、I-A/I-Elow、CD40-、CD80-、CD86-.结论 使用该方法可以有效地获得大量高纯度的未成熟树突状细胞并对其进行鉴定.     

基于加权基因共表达网络鉴定肾移植术后排斥反应中巨噬细胞M1亚型相关基因

目的  鉴定肾移植术后排斥反应中巨噬细胞M1亚型表达的相关基因并构建风险模型预测移植肾存活。方法  在基因表达综合(GEO)数据库下载肾移植术后的GSE36059及GSE21374数据集。GSE36059包括发生排斥反应和稳定移植物的样本,使用该数据集进行加权基因共表达网络分析(WGCNA)和差异分析筛选差异表达的巨噬细胞M1亚型相关差异表达基因(M1-DEG)。随后将GSE21374数据集(包含了移植物丢失的随访数据)按照7∶3拆分为训练集以及验证集,在训练集中使用最小绝对收缩和选择算法(LASSO)筛选变量构建多因素Cox模型,并评估模型预测移植物存活的能力。使用CIBERSORT分析高、低风险组浸润的免疫细胞的差异,并分析两组间人类白细胞抗原(HLA)相关基因的分布,基因集富集分析(GSEA)用于进一步明确高风险组中富集的生物学过程以及通路。最后使用数据库预测与预后基因互作的微小核糖核酸(miRNA)。结果  在GSE36059数据集中,筛选得到14个M1-DEG。在GSE21374数据集中,使用LASSO-Cox回归筛选出Toll样受体8(TLR8)、Fc γ受体1B(FCGR1B)、BCL2相关蛋白A1(BCL2A1)、组织蛋白酶S(CTSS)、鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶招募域家族成员16(CARD16),基于这6个M1-DEG构建多因素Cox模型。风险模型在训练集中预测1年及3年移植物存活的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0.918和0.877,在验证集中预测1年及3年移植物存活的AUC分别为0.765及0.736。免疫浸润分析表明,高风险组静息及活化的CD4⁺记忆T细胞、γδT细胞、巨噬细胞M1亚型浸润增多(均为P < 0.05)。高风险组HLA Ⅰ类基因表达上调。GSEA分析表明,高风险组免疫反应及移植物排斥反应富集。CTSS与8个miRNA相互作用、BCL2A1和GBP2与3个miRNA相互作用、FCGR1B与1个miRNA相互作用。结论  本研究基于6个M1-DEG构建的预后风险模型对于预测移植肾存活具有良好的表现,可为早期对高风险受者干预提供依据。     

肾移植术后肺部感染状态下免疫抑制剂的调整

目的 探讨肾移植术后肺部感染患者免疫抑制剂的应用与预后的关系.方法 对肾移植术后合并肺部感染的98例患者临床资料进行回顾性分析.将患者分为维持应用免疫抑制剂组(维持剂量组,45例)与免疫抑制剂减量或停用组(调整剂量组,53例).按与感染相关的器官衰竭估计评分(SOFA)标准,在肾移植术后肺部感染较重(SOFA≥12分)和感染较轻(SOFA＜12分)的情况下,分别分析两组患者的死亡率、感染恢复时间和排斥反应发生率的差异.结果 当SOFA≥12分时,调整剂量组死亡率和感染恢复时间明显低于维持剂量组(P＜0.05),而排斥反应发生率在两组之间的差异则无统计学意义(P＞0.05);当SOFA＜12分时,死亡率和感染恢复时间在两组之间差异无统计学意义(P＞0.05),但调整剂量组患者排斥反应发生率明显高于维持剂量组(P＜0.05).结论 在肾移植术后肺部感染较重(SOFA≥12分)时,减量和停用免疫抑制剂有利于降低患者的死亡率和缩短抗感染疗程;但感染较轻(SOFA＜12分)时,建议维持免疫抑制剂原剂量不变.     

肾移植术后并发巨细胞病毒肺炎患者的细胞免疫状态

目的 探讨CD4+T淋巴细胞ATP含量检测在肾移植术后并发巨细胞病毒(CMV)肺炎治疗中应用价值.方法 以187例首次肾移植受者作为研究对象,分别于术前,术后30、60、90和180d,发生CMV肺炎时,以及治疗4周后采集受者外周血,应用ImmuKnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测CD4+T淋巴细胞内ATP含量.采用方差分析对不同检测时间点及术后有无并发CMV肺炎者的外周血CD4+T淋巴细胞ATP含量进行比较,采用Pearson-Spearman秩和检测对ATP含量与感染的相关性进行分析.结果 187例受者中发生CMV肺炎17例,发生率为9.1 ％(17/187),发生时间为术后(2.8±1.2)个月.术后所有时间点CD4+T淋巴细胞ATP含量均明显低于术前(P＜0.01),ATP含量在术后90d时达最低点,与术后其他时间点比较,差异有统计学意义(P＜0.05).发生CMV肺炎者术前外周血CD4+T淋巴细胞ATP含量为(376±182) μmol/L,术后30和90 d分别为(283±146) μmol/L和(196±112) μmol/L,发生CMV肺炎时和治疗4周后分别为(145士102)μmol/L和(236±117) μmol/l,发生CMV肺炎时ATP含量与其他各个时间点比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).相关分析表明,CD4+T淋巴细胞内ATP含量降低与CMV肺炎的发生具有显著相关性(相关系数=0.5106,P＜0.01).结论 肾移植后测定受者外周血CD4+T淋巴细胞ATP含量,可反映受者的细胞免疫状态及判断CMV肺炎的严重程度和临床预后,并可指导CMV肺炎的治疗.     

免疫球蛋白样转录物3和4在肾移植受者树突状细胞中表达的意义

目的 探讨免疫球蛋白样转录物3和4(ILT3和ILT4)在肾移植受者外周血树突状细胞(DC)中的表达情况,并分析其在移植免疫低反应中的作用.方法 选择肾移植后存活5年以上肾功能稳定和慢性排斥反应的受者各10例,分别作为肾功能稳定组和慢性排斥组;另选择10例健康志愿者作为正常对照组.用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)刺激各组研究对象的外周血单核细胞,诱导培养获得DC.用流式细胞仪测定DC表面分子ILT3和ILT4的表达,并分析各组DC表达的差异;用酶联免疫吸附试验法测定各组血清中ILT3和ILT4的配体HLA-G5的表达水平.结果 ILT3在肾功能稳定组DC中表达水平上调,与正常对照组和慢性排斥组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而ILT4的表达在各组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05);肾功能稳定组血清中HLA-G5的表达水平较正常对照组和慢性排斥组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 长期存活的肾功能稳定受者外周血中高表达ILT3和其配体HLA-G,说明它们可能在外周免疫耐受的诱导和维持中起非常重要的作用.