共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因修饰原代人内皮细胞包被大鼠胰岛模型的建立

目的:建立以分离培养的原代人脐静脉内皮细胞包被大鼠胰岛细胞模型。方法:分离培养原代人脐静脉内皮细胞,并分别通过免疫组化试验检测人Ⅷ因子相关抗原,透射电镜观察Weible-palade小体,荧光显微镜观察DiI-Ac-LDL的吞噬效果,对所分离的人脐静脉内皮细胞进行鉴定。分离大鼠胰岛细胞,然后在肝素化培养皿中进行共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被。对包被后的胰岛细胞进行形态学观察并检测其包被前后的功能。结果:分离培养的内皮细胞表达人Ⅷ因子相关抗原,电镜下可以观察到Weible-palade小体,荧光显微镜下可以观察到内皮细胞对DiI-Ac-LDL的吞噬。共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被胰岛模型可以观察到内皮细胞的绿色荧光,未包被胰岛和内皮细胞包被胰岛的胰岛素释放指数分别为4.09和3.94,与未包被胰岛实验组相比,内皮细胞包被胰岛对高糖刺激反应无明显差异,但胰岛素释放量有所减少。结论:成功分离培养并鉴定了原代人脐静脉内皮细胞,并成功建立内皮细胞包被胰岛细胞模型,包被后胰岛功能正常。     

小鼠骨髓CD117+造血干细胞定向分化为未成熟树突状细胞及其鉴定

目的 建立可以在体外稳定地获得大量高纯度未成熟树突状细胞的方法,并对获得细胞进行形态、功能以及表面标志的鉴定.方法 取健康C57小鼠骨髓,通过MACS系统分离、纯化CD117 造血干细胞;使用SCF IL-3进行体外扩增,在此基础上使用GM-CSF IL-4 IL-10诱导其定向分化为未成熟树突状细胞;进而在倒置显微镜、扫描电镜以及透射电镜下观察其形态、功能,并使用流式细胞计数法检测其表面标志的表达,对其鉴定.结果 SCF IL-3可以分别在3、5、7 d时体外扩增造血干细胞达10.34±1.43、22.65±2.71、54.39±3.08倍;小鼠HSC可被成功诱导分化为未成熟树突状细胞,后者具有吞噬功能,表面树突较为短小,呈毛刺状,表面标志表达情况为CD11c 、I-A/I-Elow、CD40-、CD80-、CD86-.结论 使用该方法可以有效地获得大量高纯度的未成熟树突状细胞并对其进行鉴定.     

冬虫夏草制剂在肾移植受者中的临床应用和机制探讨

目的 回顾性研究和分析肾移植术后应用百令胶囊(冬虫夏草菌丝体干粉制剂) 的免疫调节效果及对机体其他系统的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 67 例同种异体肾移植术后受者入组,按免疫抑制剂的方案分为2组,对照组用霉酚酸酯（mycophenolate mofetil, MMF）加环孢素A（cyclosporine A, CsA）或他克莫司（tacrolimus, FK506）加泼尼松（prednisone, Pred）共42例; 治疗组用MMF加CsA加百令胶囊 或 FK506加Pred加百令胶囊共25例。术后检测血、尿常规,肝、肾功能及尿酸等;分阶段记录免疫制剂使用量,随访48周。 结果 移植肾存活率、急慢性排斥反应发生率、肾功能恢复状况、两组比较差异无统计学意义;感染发生率治疗组显著低于对照组(P＜0.05);治疗组尿中红、白细胞数量、血谷草转氨酶和谷丙转氨酶、血清尿酸、总胆红素、直接胆红素显著少于对照组(P＜0.01),而血清总蛋白、白蛋白显著高于对照组（P＜0.01);治疗组血红细胞、白细胞数量在肾移植术后12～48周显著高于对照组（P＜0.05), 淋巴细胞在肾移植术后4～48周显著高于对照组( P＜0.01),并且恢复至正常值的时间较对照组提前。治疗组CsA和FK506的用量在术后12周之后显著低于对照组（P＜0.05,P＜0.01）。 结论 百令胶囊可以有效保护肾移植术后肝、肾,刺激造血,改善低蛋白血症,降低感染发生率, 减少CsA、FK506的用量等,是一种较理想的免疫调节剂。     

肾移植术后肺部感染状态下免疫抑制剂的调整

目的 探讨肾移植术后肺部感染患者免疫抑制剂的应用与预后的关系.方法 对肾移植术后合并肺部感染的98例患者临床资料进行回顾性分析.将患者分为维持应用免疫抑制剂组(维持剂量组,45例)与免疫抑制剂减量或停用组(调整剂量组,53例).按与感染相关的器官衰竭估计评分(SOFA)标准,在肾移植术后肺部感染较重(SOFA≥12分)和感染较轻(SOFA＜12分)的情况下,分别分析两组患者的死亡率、感染恢复时间和排斥反应发生率的差异.结果 当SOFA≥12分时,调整剂量组死亡率和感染恢复时间明显低于维持剂量组(P＜0.05),而排斥反应发生率在两组之间的差异则无统计学意义(P＞0.05);当SOFA＜12分时,死亡率和感染恢复时间在两组之间差异无统计学意义(P＞0.05),但调整剂量组患者排斥反应发生率明显高于维持剂量组(P＜0.05).结论 在肾移植术后肺部感染较重(SOFA≥12分)时,减量和停用免疫抑制剂有利于降低患者的死亡率和缩短抗感染疗程;但感染较轻(SOFA＜12分)时,建议维持免疫抑制剂原剂量不变.     

肾移植术后并发巨细胞病毒肺炎患者的细胞免疫状态

目的 探讨CD4+T淋巴细胞ATP含量检测在肾移植术后并发巨细胞病毒(CMV)肺炎治疗中应用价值.方法 以187例首次肾移植受者作为研究对象,分别于术前,术后30、60、90和180d,发生CMV肺炎时,以及治疗4周后采集受者外周血,应用ImmuKnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测CD4+T淋巴细胞内ATP含量.采用方差分析对不同检测时间点及术后有无并发CMV肺炎者的外周血CD4+T淋巴细胞ATP含量进行比较,采用Pearson-Spearman秩和检测对ATP含量与感染的相关性进行分析.结果 187例受者中发生CMV肺炎17例,发生率为9.1 ％(17/187),发生时间为术后(2.8±1.2)个月.术后所有时间点CD4+T淋巴细胞ATP含量均明显低于术前(P＜0.01),ATP含量在术后90d时达最低点,与术后其他时间点比较,差异有统计学意义(P＜0.05).发生CMV肺炎者术前外周血CD4+T淋巴细胞ATP含量为(376±182) μmol/L,术后30和90 d分别为(283±146) μmol/L和(196±112) μmol/L,发生CMV肺炎时和治疗4周后分别为(145士102)μmol/L和(236±117) μmol/l,发生CMV肺炎时ATP含量与其他各个时间点比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).相关分析表明,CD4+T淋巴细胞内ATP含量降低与CMV肺炎的发生具有显著相关性(相关系数=0.5106,P＜0.01).结论 肾移植后测定受者外周血CD4+T淋巴细胞ATP含量,可反映受者的细胞免疫状态及判断CMV肺炎的严重程度和临床预后,并可指导CMV肺炎的治疗.     

免疫球蛋白样转录物3和4在肾移植受者树突状细胞中表达的意义

目的 探讨免疫球蛋白样转录物3和4(ILT3和ILT4)在肾移植受者外周血树突状细胞(DC)中的表达情况,并分析其在移植免疫低反应中的作用.方法 选择肾移植后存活5年以上肾功能稳定和慢性排斥反应的受者各10例,分别作为肾功能稳定组和慢性排斥组;另选择10例健康志愿者作为正常对照组.用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)刺激各组研究对象的外周血单核细胞,诱导培养获得DC.用流式细胞仪测定DC表面分子ILT3和ILT4的表达,并分析各组DC表达的差异;用酶联免疫吸附试验法测定各组血清中ILT3和ILT4的配体HLA-G5的表达水平.结果 ILT3在肾功能稳定组DC中表达水平上调,与正常对照组和慢性排斥组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而ILT4的表达在各组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05);肾功能稳定组血清中HLA-G5的表达水平较正常对照组和慢性排斥组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 长期存活的肾功能稳定受者外周血中高表达ILT3和其配体HLA-G,说明它们可能在外周免疫耐受的诱导和维持中起非常重要的作用.     

肾移植患者阴茎勃起功能影响因素分析

目的:研究肾移植对勃起功能的影响,并对相关影响因素进行分析,以期提高移植术后患者的生活质量。方法:对250例肾移植术后移植肾功能良好的已婚男性受者进行勃起功能国际问卷调查,并收集一般临床资料、病史、性生活史和实验室检查资料。应用单因素分析和多因素Logistic回归分析确定对勃起功能有独立的和显著影响的相关因素。结果:212例完成整个调查,114例移植术前为ED(53.8%),移植术后94例被确定为ED(44.3%),两者差异无显著性(P>0.05)。根据ED分度移植前后的变化,91例(42.9%)勃起功能移植前后无变化,93例(43.9%)有改善,28例(13.2%)移植前勃起功能正常的患者移植后减退。Logistic回归分析确定年龄、贫血、糖尿病、周围神经病变、多次移植是独立和显著影响勃起功能的因素,相对危险度分别为3.01、2.01、3.15、3.89、2.67。结论:肾移植后ED的发生率仍较高。移植术后ED的病因是多方面的,年龄、糖尿病、周围神经病变、血红蛋白水平、多次移植是影响勃起功能的主要因素。     

应用环孢素A的肾移植患者合用地尔硫(艹卓)的临床效果观察

目的探讨使用环孢素A(CsA)的肾移植患者合用地尔硫芯卓的临床效果。方法将1529例肾移植患者分为研究组和对照组,研究组肾移植术后应用CsA、硫唑嘌呤(Aza)及泼尼松(Pred)(研究组1)或CsA、霉酚酸酯(MMF)及Pred(研究组2)预防排斥反应,两个研究组同时加用地尔硫芯卓;对照组使用CsA、Aza及Pred预防排斥反应,不用地尔硫芯卓。观察研究组和对照组的CsA用量、血CsA浓度、移植效果、急性排斥反应发生率以及CsA的肝、肾毒性。结果研究组1的CsA用量低于对照组(P<0.05),但血CsA浓度明显高于对照组(P<0.01);研究组2的CsA用量显著低于对照组(P<0.01),但血CsA浓度与对照组相近(P>0.05);研究组1和研究组2移植肾功能恢复正常的时间分别缩短至4.7d和3.9d,较对照组显著提前(P<0.05);两个研究组的急性排斥反应发生率较对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论应用CsA的肾移植患者合用地尔硫芯卓,能明显提高血CsA浓度,从而减少CsA用量,同时能促进移植肾功能的恢复,改善移植效果。