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目的 制备抗柯萨奇病毒A组2型( coxsackievirus A2,CV-A2)单克隆抗体(单抗),建立CV-A2抗原检测方法。方法 用纯化后的CV-A2全病毒颗粒免疫小鼠,筛选获得抗CV-A2单抗。建立CV-A2抗原检测方法,确定线性范围,对其准确度、精密度、稳定性、专属性进行验证。用 ELISA检测病毒颗粒纯化过程中样品的抗原含量。结果 制备了高效价的抗CV-A2单抗并建立 ELISA抗原检测方法,检测范围为5.00~320.00 ng/ml。高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率在89.58%~104.78%之间。重复性验证变异系数分别为2.10%、2.47%、6.18%。中间精密度验证变异系数分别为2.89%、2.69%、1.94%。耐用性验证回收率在84.26%~114.21%之间。包被微孔板于37℃放置3d,样品回收率在90.31%~103.11%之间。专属性验证结果显示该方法只识别CV-A2抗原,与其他抗原均无交叉反应。结论 建立并验证了CV-A2 ELISA抗原检测方法,可应用于病毒纯化过程中样品的抗原检测,还可应用于含CV-A2的手足口病多价疫苗的CV-A2抗原含量检测。 相似文献
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用羊轮状病毒Lc40株(G10型)和猴轮状病毒SA11株(G3型)混合感染MA-104细胞,在无外界选择压力条件下,由第一代培养物随意挑取286个子代空斑克隆。根据病毒RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱进行基因型分析,其中Lc40亲本株126个(44.1%),SA11亲本株115个(40.2%),基因重配株45个(15.7%),呈现20种重配基因型。两亲本株某些基因片段的重配频率为0.35%~2.80% 相似文献
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目的 原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)VP1蛋白,并制备抗VP1多克隆抗体(多抗),为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法 逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5VP1-ΔN56后,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多抗。结果 重组表达载体构建成功,融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明,获得的兔多抗效价为107,可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。结论 成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。 相似文献
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为制备柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)单克隆抗体并鉴定其生物学特性,同时为初步建立CV-A4抗原定量ELISA检测法,用于CV-A4候选疫苗研制中的抗原定量检测及质量控制,将纯化后的CV-A4全病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术、中和试验和ELISA获得CV-A4单克隆抗体;建立双抗体夹心ELISA检测法并进行方法学验证,用于检测手足口病(hand-foot-mouth disease, HFMD)多价疫苗中CV-A4抗原水平。结果显示,制备了型特异性CV-A4单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA检测法,检测范围为62.5~4 000.0 ng/mL;高、中、低3个浓度样本准确度验证,回收率为91.8%~121.9%;重复性验证,变异系数分别为3.4%、11.9%和8.6%;中间精密度验证,变异系数分别为1.8%、9.4%和6.5%;耐用性验证,回收率为97.3%~104.1%;包被微孔板37℃放置3 d,样本回收率为98.5%~119.2%;在特异度验证中,双抗体夹心ELISA检测法仅识别CV-A4抗原,与CV-A4以外的抗原均无... 相似文献
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