神经干细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验研究

[目的]观察神经干细胞静脉移植对损伤大鼠脊髓功能的治疗作用。[方法]取孕14—16dSD胎鼠的脑室下区组织，体外培养后鉴定细胞。制作脊髓全切模型，伤后1周将Brdu标记好的神经干细胞通过尾静脉注射移植到大鼠体内，移植后及8周行皮层体感诱发电位（CSEP）检测和BBB功能评分，并留损伤脊髓处作病理切片及免疫组化染色。[结果]（1）移植后8周BBB评分损伤组、移植组都有所恢复，但都未达到正常水平，移植组恢复较好；（2）模型制作后，CSEP波均消失，细胞移植后8周移植组的波形有不同程度的恢复，但潜伏期延长；（3）移植组大鼠脊髓损伤处存在大量Brdu染色阳性细胞，表明移植的细胞在体内可到达损伤脊髓处并能存活；脊髓损伤部位NF-200及GFAP染色阳性的细胞表明移植的细胞可以分化为具有神经元和胶质细胞特性的细胞。[结论]静脉移植的神经干细胞能到达损伤区代替受损的神经元及神经胶质细胞，使损伤的脊髓功能得到一定程度的恢复。     

腺病毒介导的NT-3基因在骨髓间质干细胞中的表达

目的:研究腺病毒介导的NT-3基因在培养的大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达.方法:在293细胞中培养扩增NT-3重组腺病毒(adenovirus vector for NT-3,Ad-NT-3),测定病毒滴度,然后用Ad-NT-3感染传代培养的MSCs,RT-PCR技术检测NT-3基因的表达.结果:Ad-NT-3扩增后获得了较高滴度的病毒,MSCs经Ad-NT-3感染后有NT-3 mRNA的转录.结论:腺病毒介导的NT-3基因可转入培养的MSCs并高效表达,为NT-3基因治疗的研究奠定了基础.     

骨髓基质干细胞和神经生长因子悬液移植对脊髓损伤修复的影响

目的研究骨髓基质干细胞(BMSCs)移植联用神经生长因子(NGF)对脊髓损伤修复的治疗作用。方法用改良Allen法制成SD大鼠脊髓损伤动物模型(共32只),1周后分别将DMEM、BMSCs、NGF和BMSCs NGF移植入脊髓损伤部位即制成四组(每组8只),移植1、2个月后分别采用神经核蛋白(NeuN)抗体、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体和神经丝蛋白(NF)抗体进行免疫荧光染色观察移植的BMSCs的存活及分化情况、损伤部位神经纤维的再生情况。HE染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况。同时采用BBB运动评分观察大鼠运动功能恢复情况。结果移植1、2个月后,部分移植细胞呈NeuN和GFAP阳性,同时实验组可见明显的神经纤维再生。脊髓损伤处的空洞面积明显减小,差异有显著性意义(P＜0．05),BBB评分结果比对照组均有明显增高,差异有显著性意义(P＜0．05)。在BMSCs NGF组上述改变更加显著。结论BMSCs可在脊髓损伤处分化为神经元和神经胶质细胞,BMSCs和NGF能够减小脊髓损伤处的空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复,两者联合应用在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

髋关节色素沉着绒毛结节性滑膜炎一例

患者,女,21岁,因右髋部疼痛5个月、加重2周入院。查体:T:36.6℃,右髋部压痛,双下肢肌力Ⅳ-,无感觉及运动异常,腹股沟区及臀部未触及肿块。辅助检查抗Sm抗体阳性、血沉、C反应蛋白、类风湿因子、抗核抗体皆正常。X线平片示右髋臼及右股骨上段多发透亮区,右髋关节间隙窄。右髋关节MRI及增强扫描示:右侧髋关节异常信号,累及髂骨及股骨上段,结合MRI平扫以及病史特点,考虑为色素沉着绒毛结节性滑膜炎。行手术治疗,术中打开关节囊,见有血性关节液流出,吸除后于关节囊内滑膜组织见较多淡黄色结节样病灶,予以完全切除。术中切除物病检报告示:镜…     

miRNA-9过表达对Aβ损伤的PC12细胞的保护作用

目的:探讨micro RNA-9(mi R-9)过表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤的PC12细胞及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法:PC12细胞分为mi R-9过表达组(E组)、空转染对照组(NC组)、不转染的损伤细胞模型组(NT组),采用CCK-8法检测细胞增殖;采用Annexin-V-PE检测细胞凋亡;采用RT-q PCR检测Bcl-2、Bax m RNA的表达,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与NC组及NT组比较,E组的PC12细胞转染48 h后增殖增加,凋亡率降低,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P0.05)。结论:mi R-9过表达可保护Aβ损伤的PC12细胞。     

化学发光法检测神经生长因子轴突逆行运输的实验研究

实验以葡萄糖氧化酶通过双功能试剂二环已基碳酰亚胺（ＤＣＣ）与神经生长因子（ＮＧＦ）偶联，运用化学发光检测手段验证ＮＧＦ的轴突逆行运输。手术造成ＳＤ大鼠坐骨神经１０ｍｍ缺损，以硅胶管桥接形成硅小室，于室内注入标记的ＮＧＦ，通过检测腰４～６脊神经节及腰４～６脊髓节段发光强度，结果显示，ＮＧＦ不仅能经轴突逆行运输至脊神经节感觉神经元胞体，亦可转运至脊髓前角运动神经元，从而对至今认为ＮＧＦ不能经运动神经元轴突逆行运输至胞体的见解提出新的看法。     

神经端侧吻合的临床应用

目的：为探索修复晚期周围神经损伤伴缺损的新方法，以期简化操作步骤、减轻患者痛苦、提高手术疗效。方法：在实验研究的基础上，选择陈旧性尺神经损伤、缺损在３ｃｍ以上，不能直接行端对端吻合的患者，采用远侧断端与未损伤的正中神经行端侧吻合，正中神经外膜开窗。结果：术后进行１４个月的随访，对患者的感觉与运动功能作全面评价，２例尺神经支配区的感觉与运动功能已恢复，手部功能接近正常。结论：神经端侧吻合是有理论基础和实验研究为依据的，２例的效果优良。这是一种修复陈旧性周围神经损伤的崭新术式，虽是临床初试，但操作易、疗效佳，有广阔临床应用价值     

Effect of rhBMP-2 and Osteogenic Revulsants on Proliferation and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells in Rats

The effects of recombinant human bone morphogenetic protein-2 （rhBMP-2） and osteogenic revulsants alone or in combination at different time points and in different dosages on proliferation and osteogenesis of bone marrow stromal cells （BMSCs） in SD rats were investigated. Rat BMSCs were cultured in vitro and induced by rhBMP-2 in different dosages （10, 50, 100 and 200μg/L） alone or in combination with osteogenic revulsants. MTT colorimetric assay was used to evaluate The proliferation, activity of alkaline phosphoric （ALP） and osteocalcin were measured at 3rd, 6th, 9th, 12th day respectively. The results showed that rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the differentiation of BMSCs towards osteoblast phenotype. The proliferation of BMSCs could be enhanced by rhBMP-2 in a dose-dependent manner. The expression of osteoblast phenotype was significantly higher by using both of them than by using them alone, which was verified by the activity of ALP and osteocalcin. It was suggested that the combined use of rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the proliferation and simultaneously induce and maintain the expression of osteoblast phenotype of BMSCs in rats.     

鸡胚脊髓运动神经元对神经生长因子的应答及其钙依赖性研究

观察神经生长因子（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）在钙拮抗剂和不同ＣＪ“浓度条件下，对鸡胚脊髓运动神经元生长发育的影响。方法：取３天胚龄的鸡胚获取脊髓运动神经元。实验分组：对照组，ＮＧＦ组，ＮＧＦ＋Ｖｅｒａｐａｍｉｌ组和ＮＧＦ＋Ｃａ２＋组。观察项目：神经元最大突起平均长度，运动神经元计数。运动神经元百分比和胆碱酯酶染色。结果：培养１周，ＮＧＦ组运动神经元数及百分比和突起长度明显超过对照组和ＮＧＦ＋Ｖｅｒａｐａｍｉｌ组（Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋浓度４ｍＭ组的突起长度明显大于其它Ｃａ２＋浓度组（Ｐ＜０．０１）。结论：ＮＧＦ对鸡胚脊髓运动神经元的生长、发育有促进作用，且明显依赖于跨膜Ｃａ２＋内流。