γ-干扰素基因修饰人肝癌细胞的免疫原性研究

目的研究ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞的免疫原性。方法利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ分别建立了四种ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交进行鉴定分析，流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析细胞表面ＭＨＣ分子表达，灭活肿瘤细胞体外刺激诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）产生。结果Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＩＦＮ－γ基因在宿主细胞中获得了正确整合和表达。ＦＡＣＳ分析结果表明，ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞表面ＨＬＡⅠ类分子表达强度显著增强，Ⅱ类分子的表达阳性百分率有显著提高。一些ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞在体外诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞的能力有所提高。结论ＩＦＮ－γ基因修饰可增强人肝癌细胞的免疫原性，为基因工程瘤苗的临床应用提供了一定依据。     

Clinical,immunological, and molecular analysis in a large cohort of patients with X-linked agammaglobulinemia: an Italian multicenter study

A questionnaire-based retrospective clinical and immunological survey was conducted in 73 males with a definite diagnosis of X-linked agammaglobulinemia based on BTK sequence analysis. Forty-four were sporadic and 29 familial cases. At December 2000, the patients' ages ranged from 2 to 33 years; mean age at diagnosis and mean duration of follow-up were 3.5 and 10 years respectively. After the mid-1980s all but 2 were on intravenous immunoglobulin (IVIG) substitution therapy, with residual IgG >500 mg/dl in 94% of the patients at the time of enrollment. Respiratory infections were the most frequent manifestation both prior to diagnosis and over follow-up. Chronic lung disease (CLD) was present in 24 patients, in 15 already at diagnosis and in 9 more by 2000. The cumulative risk to present at diagnosis with CLD increased from 0.17 to 0.40 and 0.78 when the diagnosis was made at the ages of 5, 10, and 15 years respectively. For the 9 patients who developed CLD during follow-up, the duration of follow-up, rather than age at diagnosis; previous administration of intramuscular immunoglobulin; and residual IgG levels had a significant effect on the development of CLD. Chronic sinusitis was present in 35 patients (48%), in 15 already at diagnosis and in 20 by 2000. Sistemic infections such as sepsis and meningitis/meningoencephalitis decreased over follow-up, probably due to optimal protection provided by high circulating IgG levels reached with IVIG.     

瘤型麻风动物模型的NK细胞活性的体外测定

本文报道了瘤型麻风小鼠模型中脾脏NK细胞活性的体外测定,以及加入外源性IL-2对这一活性的影响。结果表明,随着感染时间的延长,小鼠脾脏中NK细胞活性逐渐降低。感染1月小鼠的NK细胞活性明显低于正常小鼠,感染3月小鼠的NK细胞活性较感染1月小鼠更低(P值均<0.01)。将含有IL-2的上清液加入NK细胞活性检测系统中,发现外源性IL-2可逆转感染小鼠的NK细胞活性,使其恢复达正常水平。结合IL-2与NK细胞活性在免疫调节中的作用,对瘤型麻风动物模型的特殊表现作了讨论。     

人血清免疫球蛋白工作标准的制备与标定

本文报导混合浓缩人血清工作标准(89-1)的制备和用WHO相应参考标准血清标定出其中五类免疫球蛋白(Igs)及IgG4亚类含量。该制剂主要用于体外测定IgG、IgA、IgM的工作标准,也可供作体外测定IgD、IgE、IgG4的工作标准。混合前每份血清均无乙型肝炎表面抗原、转氨酶正常。定量分装为每安瓿0.5ml,经冷冻干燥后,4℃保存。参照国际参考标准血清67/97及67/37,分别以免疫单扩散法标定89-1中IgG、IgA、ISM含量;以酶联免疫吸附试验(ELISA)标定IgD、IgG4和IgE含量。其中IgG、IgG4、IgA、IgM含量,应用本室制备的相应单克隆抗体(McAb)标定,而IgD和IgE应用多克隆抗体(PcAb)进行标定。并用五剂量法及四剂量法分别计算Igs含量。     

恙虫病东方体Sta56抗原的原核表达、纯化及其在间接ELISA中的应用

目的　构建含恙虫病东方体sta5 6基因的重组表达质粒 ,在E .coli中表达Sta5 6重组抗原 ,纯化后用于间接ELISA检测恙虫病。方法　从含有恙虫病东方体Karp株sta5 6基因的重组质粒TOPO sta5 6扩增出截短的sta5 6 ,定向插入pET30a载体 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,用SDS PAGE及Westernblot进行分析 ;采用电洗脱方法纯化重组抗原并应用于间接ELISA检测恙虫病。结果　以截短的sta5 6基因片段构建了重组表达质粒pETOt95 7,重组的Sta5 6抗原可在E .coli中以融合蛋白的形式有效表达 ,SDS PAGE显示了一条相对分子质量 (Mr)为 4 0 .3× 10 3 的蛋白表达带 ,West ernblot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清所识别。电洗脱纯化的重组抗原应用于间接法ELISA检测恙虫病 ,与间接免疫荧光法IFAT比较 ,其敏感性和特异性分别为 91.7%和 76 .5 %。结论　在大肠杆菌中表达的Sta5 6重组抗原具有免疫反应性 ,纯化后可用作免疫诊断试剂。     

人源腺病毒伴随病毒Ⅱ型单克隆抗体Fab段及其全抗体的研制

目的 运用噬菌体表面表达技术，获得基因工程抗腺病毒伴随病毒抗体Fab、IgG。方法 从酶联免疫吸附试验阳性的人外周血中分离淋巴细胞。提取总RNA，逆转录cDNA，聚合酶链反应扩增人IgG Fab轻、重链基因，利用pComb3载体构建噬菌体抗体库。用纯化的腺病毒伴随病毒为固相抗原筛选抗体Fab段，并在E.coli中进行分泌性表达。通过ELISA和间接免疫荧光试验、筛选和鉴定Fab抗体，并进行序列测定。然后将其重链和轻链基因克隆到全抗体表达载体pAC-L-Fc上。转染昆虫sf-9细胞，利用杆状病毒，昆虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达，免疫沉淀试验鉴定它的抗蛋白。结果 分离到一株Fab克隆AAVs-31，腺病毒伴随病毒抗原和抗Fab抗体直接ELISA检测阳性，间接免疫荧光试验呈阳性，序列分析结果表明是一新的序列，所获得的基因为人源IgG Fab基因。由Gamma链和Kappa链组成。表达的全抗体ELISA反应、免疫荧光反应和间接免疫荧光试验均为阳性，免疫沉淀试验结果显示它结合病毒颗粒，不结合任一VP1、VP2、VP3单独衣鞘蛋白。结论 用噬菌体表面表达技术首次获得了抗腺病毒伴随病毒Ⅱ型单克隆抗体Fab段，并在真核系统中表达了其全抗体，它们识别的可能是衣鞘蛋白组装时形成的表位。     

超声处理对羊瘙痒病脑组织中PrPSc聚集状态的影响

目的 研究超声处理对感染羊瘙痒症仓鼠脑组织中PrP^Sc聚集状态的影响，寻找产生PrP^Sc低聚体的条件。方法 裂解液制备脑组织提取物，用各种超声条件处理不同阶段的脑组织提取物；以蛋白酶消化后的Western blot方法和图象分析系统观测PrP^Sc蛋白的分布和聚集状态。结果 适当的超声处理(15s共30次)可增加脑组织匀浆上清中PrP^Sc含量1．29～1．58倍；同样条件下超声处理可明显增加羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量，而对正常对照仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量影响不大；对经常规高速离心获得的PrP^Sc的超声处理显示约90％的PrP^Sc存在于离心上清液中。结论 对感染动物脑组织进行超声处理可增加PrP^Sc的提取量，利于实验室检测。适当的超声处理可破碎大的相对分子质量的PrP^Sc聚集物，产生小的相对分子质量的PrP^Sc产物。