副溶血性弧菌VBNC的诱导及其免疫捕获PCR检测

目的研究一种适用于副溶血性弧菌活的非可培养状态(VBNC)的检测方法。方法将副溶血性弧菌VPL4-90悬浮于陈海水中,利用低温条件诱导VBNC状态,42d后取样,进行AOAC法观察、DVC法观察、PC计数及国标法检测等;以诱导后菌体为抗原,制备兔抗VBNC血清,用于免疫捕获PCR检测。结果进入VBNC状态的细菌缩小成球形,大部分仍然是活菌,但不能形成菌落;国标检测方法未能使进入VBNC状态的细菌得到分离培养;利用抗血清捕获VBNC菌体后对副溶血性弧菌的tlh基因进行PCR扩增,检测到副溶血性弧菌VBNC。结论制备的抗血清对VBNC菌体具有富集作用;建立的免疫捕获PCR法可应用于对副溶血性弧菌VBNC的检测。     

甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒血凝素基因比较分析

目的分析泰安市2008～2009年度季节性流感与2009年度甲型H1N1流感病原学检测结果 ,比较季节性H1N1与甲型H1N1血凝素基因变异情况。方法选择国家级流感监测哨点医院以及暴发疫情的疫点,采集流感样病例的鼻咽拭子标本,通过RealtimePCR进行病毒检测,用MDCK细胞进行病毒分离,通过RT-PCR扩增血凝素HA1片段的基因并测序,利用生物信息学进行序列分析。结果 2008～2009年共检测鼻咽拭子标本283份,分离出流感病毒33株,分离阳性率为11.67%,其中季节性H1N1亚型31株。2009年5月1日～12月31日,检测鼻咽拭子标本996份,流感核酸检测阳性417份,阳性率为41.86%,其中甲型H1N1337份,季节性H1N1亚型1份。6株季节性H1N1病毒均在多个氨基酸位点上发生变异,与疫苗株A/Brisbane/59/2007(H1N1)比较,有11个位点发生了突变,其中5个位点位于抗原决定簇上;测序成功的6株甲型H1N1病毒在多个氨基酸位点发生变异,与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)比较,有6个位点发生突变,其中1个位点位于抗原决定簇的B区。结论 2008～2009年度季节性H1N1为优势株,甲流暴发后,甲型H1N1成为绝对优势毒株。季节性H1N1分离株有多处氨基酸替换,抗原决定簇B区变异频繁;甲型H1N1病毒分离株的基因有变异,但关键位点第222位仍为D(天冬氨酸),与疫苗株相比抗原决定簇的关键位点变化不大。     

定量脑电图对意识障碍患者预后的预测价值

目的 探讨定量脑电图(quantitative dectroencephalography,qEEG)中95%频谱边界频率(95% spectral edge frequency,SEF95)和全功率(total power,TP)对意识障碍患者预后的预测价值.方法 研究对象为2008年1月至2010年6月南方医院神经内科重症监护病房收治的意识障碍患者.患者入院后进行格拉斯哥昏迷量表(Glasgow Coma Scale,GCS)评分,同时行脑电图监测.以患者出重症监护病房时的存活情况分为存活组和死亡组,比较两组年龄、性别、高血压、糖尿病、GCS评分、SEF95和TP,并对上述因素进行多变量logistic回归分析.对预后相关指标进行接受者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析,明确qEEG对意识障碍患者死亡的预测能力.结果 共纳入109例幕上病变患者,其中存活组79例,死亡组30例.死亡组GCS评分[(5±3)分对(9±3)分,P=0.000]和SEF95(7.0±4.0对10.0±4.0,P=0.002)均显著低于存活组.多变量logistic回归分析显示,GCS评分(优势比0.100,95%可信区间0.029～0.353]和SEF95(优势比0.853,95%可信区间0.740～0.983)为近期预后的独立预测因素.ROC曲线分析显示,GCS评分和SEF95越低,患者死亡的可能性越大.SEF95＜7.75时,判断死亡的敏感性为60.O%,特异性为72.2%,阳性预测值为82.6%,阴性预测值为45.0%;当GCS评分＜8分时,判断死亡的敏感性为83.3%,特异性为73.4%,阳性预测值为82.6%,阴性预测值为45.O%.结论 SEF95有助于意识障碍患者的预后判断,有望成为重症监护病房意识障碍患者床旁预后评价的重要手段.

Abstract：

Objective To investigate the predictive value of prognosis of the 95% spectral edge frequency (SEF95) and total power (TP) in quantitative electroencephalography (qEEG) in patients with disturbance of consciousness. Methods The patients with disturbance of consciousness admitted in the neurointensive care unit (NICU) in Nanfang Hospital from January 2008 to June 2010 were included. Glasgow Coma Scale (GCS) scores were performed on admission and EEG monitoring was performed simultaneously. The patients were divided into either a survival group or a death group according to the survival status of the patients at the time of leaving NICU. The age, sex, hypertension, diabetes, GCS scores, SEF95, and TP were compared between the two groups. A multivariate logistic regression analysis was performed for the above factors. The prognostic indicators were analyzed with the receiver operating characteristic (ROC) curves and the of qEEG predictive ability of death in patients with disturbance of consciousness were determined. Results A total of 109 patients with supratentorial lesions were enrolled in the study, 79 of them were in the survival group and 30 of them were in the death group. The GCS scores (5 ±3vs. 9 ±3, P =0. 000) and SEF95 (7. 0 ±4.0 vs. 10. 0 ±4. 0, P = 0. 002) in the death group were significantly lower than those in the survival group. Multivariate logistic regression analysis showed that GCS scores (odds ratio 0. 100, 95% confidence interval 0. 029-0. 353) and SEF95 (odds ratio 0. 853, 95% confidence interval 0. 740-0. 983) were the independent predictors of recent prognosis. ROC curve analysis showed that the lower the GCS scores and SEF95 were, the greater the likelihood of death in patients. When SEF95 was ＜7. 75, the sensitivity to determine the death was 60. 0%, the specificity was 72. 2%, the positive predictive value was 82. 6%, and the negative predictive value was 45. 0%; when the GCS score was ＜8, the sensitivity to determine the death was 83. 3%, the specificity was 73. 4%,the positive predictive value was 82. 6%, and the negative predictive value was 45. 0%. Conclusions SEF95 helps determine the prognosis of patients with disturbance of consciousness, and it is expected to become an important means of bedside assessment of prognosis in patients with disturbance of consciousness in NICU.     

黎族HBV感染者其病毒基因型及C基因启动子/前C区基因突变与肝硬化和肝癌的关系

HBV感染是一个严重的公共卫生问题.在中国,慢性乙型肝炎是导致肝硬化和原发性肝癌的主要危险因素之一[1].目前,根据HBV核苷酸变异＞8％,将HBV分为A～H8种基因型[2].有研究结果显示,HBV基因型、HBV基因组前C区(PreC)第1896位核苷酸G→A(G1896A)以及其启动子(BCP) 1762位核苷酸A→T和1764位核苷酸G→A的突变(BCP A1762T/G1764A)与病毒的复制、转录、抗原表达水平以及疾病的临床过程密切相关[3-4].黎族是海南岛的原住居民,目前关于海南岛黎族肝硬化及肝癌患者HBV基因型、PreC G1896A基因突变和BCP A1762T/G1764A基因突变流行病学分布的研究鲜见报道.本研究旨在了解HBV基因型、PreC G1896A基因突变和BCP A1762T/G1764A基因突变与海南岛黎族肝硬化及肝癌患者发病机制的关系.     

抑制GSK-3β减轻大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤的作用

目的:评估糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）抑制剂TDZD-8减轻大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)的作用,并探讨此作用是否与其下调NF-κB、抑制炎症有关。方法: 取健康雄性SD大鼠60只,随机分为缺血/再灌注(I/R)组、I/R+TDZD组、I/R+载体(Vehicle,V)组及假手术（Sham）组。大鼠局部心肌缺血30 min,再灌注3 h。用TTC染色计算心肌梗死面积,HE染色及ELISA法评估心肌组织中中性粒细胞浸润及炎性因子(TNF-α和IL-6)的变化;用Western blot测定心肌组织中NF-κB、GSK-3β磷酸化的水平。结果: TDZD-8能明显降低心肌梗死的面积和心肌组织中性粒细胞浸润、抑制NF-κB激活以及心肌源性TNF-α和IL-6的浓度(P<0.01)。结论: GSK-3β抑制剂TDZD-8能够减轻MIRI,其作用可能与其抑制NF-κB的激活及炎症反应有关。     

计算机技术定量分析三尖瓣返流患者右室收缩和舒张功能的研究

本研究对３０例三尖瓣返流患者同步进行了多普勒超声心动图和右心导管检查，应用计算机软件程序对三尖瓣返流频谱曲线进行微分处理。结果表明，两种技术测量的右室压力最大上升速率、右室心肌最大生理缩短速度、右室压力最大下降速率以及右室心肌松驰时间常数均高度相关（ｒ分别为０．９３，０．８６，０．９４，０．９５），表明三尖瓣返流压差法能够无创性估测右室收缩和舒张功能，应用计算机软件程序能够使测量方法简便、准确。     

恶性疟原虫杂合113肽抗原基因在减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261中的初步表达

我们先前已经将人工合成的恶性疟原虫杂合１１３肽基因克隆到表达载体ｐＷＲ４５０－１中，获得了重组质粒ｐＷＲＡＢ。现将ｎＷＲＡＢ先转化到ＬＢ５０００修饰后，再转化到疫苗菌ＳＬ３２６１，得到重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡＢ）。ｐＷＲＡＢ在ＳＬ３２６１中以β－半乳糖苷酶一杂合多肽抗原ＡＢ融合蛋白（ＧＺ－Ａｍ形式表达，表达量约１３．３％。免疫双扩散发现从ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡＢ）中纯化的ＧＺ－ＡＢ可与抗ＧＺ－ＡＢ抗体反应，滴度为１：１６。蛋白质印渍技术（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）显示在ＧＺ－ＡＢ相应位置处出现特异条带。上述结果初步说明ＳＬ３２６１表达的ＧＺ－ＡＢ具有抗原性。连续传代ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡＢ）未见质粒ｐＷＲＡＢ丢失及明显的毒性，为恶性疟口服活疫苗的制备打下了基础。     

免疫酶染色法检测人血清中抗幽门螺杆菌抗体的效果评价及应用

幽门螺杆菌与胃炎、消化性溃疡有着非常密切的关系,但诊断方法仍以胃镜采样然后进行培养涂片、尿素酶试验为主;或使用需要一定设备的ＥＬＩＳＡ方法进行检测,难以在一般有消化系统症状的患者中使用,给Ｈ．ｐ感染的诊断和治疗带来了困难。本文对不需特殊设备的ＩＥＳＴ用培养涂片和ＩＥＬＩＳＡ方法进行了比较和应用。我们应用免疫酶染色法（ＩＥＳＴ）对９０名作胃镜检查者血清中抗幽门螺杆菌（Ｈ．ｐ）抗体ＩｇＧ进行了检测。其Ｈ,ｐ感染的检出率为７４．４％,高于细菌培养和镜检的检出率。灵敏度为９４．９％,特异度为６４．５％。各项指标均优于ＩＥＬＩＳＡ方法。在ＩＥＳＴ抑制试验中,幽门螺杆菌与大肠杆菌空肠弯曲等无明显交叉反应,显示了其特异性,同时该法简便,经济,不需特殊仪器且易被受检者接受,值得推广应用。     

成人型多囊肾病多器官损害205例临床分析

为了解成人型多囊肾病的遗传性疾病的情况，分析了我院２０５例成人型多囊肾病患者的临床表现，男性１０７例，女性９８例，年龄１０～７１岁。２０５例患者来自１８０个家系，其中１３８例有确切的家族史。本病多器官受损表现结果为：双肾多发性囊肿为１００％、多囊肝（１１９例，占５８％）、胰腺囊肿２例、脾脏囊肿３例、心脏瓣膜病变２５例、颅内动脉瘤３例及卵巢囊肿３例等。     

老年慢性肺心病患者免疫功能的动态观察

本文对２５例老年肺心病患的免疫指标检测结果表明，与健康老年人相比，发作期患者ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及ＣＤ４／ＣＤ８均显著低下。提示动态观指标对判断临床状态及为患者提供免疫提供治疗有一定的价值。