HO-1/CO径路在肺缺血-再灌注损伤中的作用

目的：探讨血红素氧合酶-1（HO-1）/一氧化碳（CO）径路在肺缺血-再灌注损伤中的作用。 方法： 采用在体兔单肺原位缺血-再灌注模型。实验兔40只，随机均分为假手术对照（C）组、肺缺血-再灌注（I-R）组、肺缺血-再灌注加氯铁血红素(H)组和肺缺血-再灌注加锌原卟啉(Z)组。分别在缺血前、缺血后、再灌注1 h、2 h、3 h抽血，检测一氧化碳血红蛋白(COHb)浓度。实验结束时取肺组织检测湿干重比（W/D）、肺泡损伤率（IAR），观察肺组织超微结构的改变、HO-1的活力、表达部位及强度。 结果： 血浆COHb浓度，I-R组、H组明显高于C组，以H组为著（P<0.01）；H组、Z组显著高于、低于I-R组（P<0.01）。肺组织HO-1活力H组最高，其次是I-R组，Z组和C组最低（P<0.05和P<0.01）。I-R组、H组、Z组HO-1在肺血管内皮、部分血管平滑肌、外膜层及部分气道上皮均有阳性表达，明显高于C组，尤以H组最为明显（P<0.01）。W/D、IAR值，I-R组和Z组均明显高于C组，尤以Z组为著，H组虽较C组为高，但显著低于IR组和Z组（P<0.05和P<0.01）。肺组织形态学异常改变，以Z组为著，H组较轻。 结论： HO-1/CO径路对缺血-再灌注肺发挥积极的保护作用。     

高糖对腹膜巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的作用

目的：探讨在体外葡萄糖对SD大鼠腹膜巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达及蛋白的合成。方法:取雄性SD大鼠腹腔巨噬细胞培养，培养的巨噬细胞分为5组：(1)正常对照组；(2)30 mmol/L甘露醇组；(3)90 mmol/L甘露醇组；(4)30 mmol/L葡萄糖组；(5)90 mmol/L葡萄糖组。每组6个培养孔，24 h后提取细胞RNA及蛋白，分别做RT-PCR及Western blotting以检测腹膜巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成。结果:30 mmol/L及90 mmol/L甘露醇刺激腹膜巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成均不明显， 30 mmol/L及90 mmol/L葡萄糖能明显刺激腹膜巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成，90 mmol/L葡萄糖与30 mmol/L的葡萄糖相比更能刺激巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成。结果:葡萄糖能明显刺激SD大鼠腹膜巨噬细胞iNOS mRNA的表达及蛋白的合成。     

Wnt2信号通路重要成员在胶质瘤中的表达及其意义

近来发现Wnt信号通路对个体发育和肿瘤生成具有重要作用[1-2].为进一步探讨Wnt通路在胶质瘤中是否存在表达异常及其在胶质瘤生成中的作用,我们采用RT-PcR、组织芯片免疫组织化学染色以及蛋白印迹法,对人脑胶质瘤Wnt2通路相关因子的表达变化及其意义进行了分析.     

急慢性乙型肝炎患者血浆uPA和uPAR的检测及意义

目的研究急慢性乙型肝炎uPA和uPAR的表达，探讨肝炎发病时血液纤溶的变化及意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血浆uPA和uPAR的水平。结果急慢性乙型肝炎血浆uPA和uPAR水平与对照组比较均有意义地高于对照组（P〈0．01）；慢性乙型肝炎重度组血浆uPA和uPAR水平显著高于急性乙型肝炎组（P〈0．05），亦显著高于慢性乙型肝炎中轻度组（P〈0．05和P〈0．01）；急性乙型肝炎血浆中uPAR水平显著高于慢性乙型肝炎中轻度组（P〈0．01）；乙型肝炎急性期血浆中uPA和uPAR水平显著升高，恢复期明显回落（P〈0．05和P〈0．01），但仍明显高于正常对照组（P〈0．01）；急慢性乙型肝炎血浆中uPAR水平与凝血酶原时间（PT）（r=0．605，P〈0．01）和国际标准化比率INR（r=0．603，P〈0．01）、胆红素（TB）（r=0．649P〈0．01）呈正相关。结论急慢性乙型肝炎uPA和uPAR水平的升高，与炎症的严重程度有关，与肝细胞损伤程度有关，是肝炎发病时血液凝血和纤溶系统失衡的重要原因之一。     

广东汉族人β2-肾上腺素能受体基因Gln27Glu多态性

目的 探讨β2-AR 16位点基因多态性在广东汉族人群中的分布．方法 应用聚合酶链反应技术对122例正常人β2-肾上腺素能受体基因Gln27Glu进行扩增并进行图谱分析．并结合文献进行了不同种族间的分析比较．结果 广东汉族人群β2-AR基因27位点多态性分布频率：Gln／Gln基因型占36．88％，Gln／Glu基因型占52．46％，Glu／Glu基因型占10．66％．结论 广东汉族人群存在出β2-AR Gln27Glu基因多态性，其分布频率与英美高加索人群有一定差异．     

免疫磁性海藻酸钠载药纳米微球的制备与评价

靶向治疗系统是目前研究的热点,用微乳化-离子交联方法制备包覆阿霉素的碳包铁/海藻酸钠复合纳米微球,以水溶性碳二亚胺为交联剂,将载药微球与单抗Hab18连接,制备出了免疫磁性药物纳米微球.对该免疫磁性微球的理化性能进行了表征,同时检测了免疫磁性微球中抗体的活性和免疫磁性微球与靶细胞的体外结合情况,结果表明,免疫磁性药物纳米微球平均粒径约为171.2nm,外观为球型,铁含量为14.6%,载药量为10.8%,且具有强磁响应性和长时间药物缓释效果.同时在体外该微球能够与靶细胞特异性结合.这种免疫磁性药物纳米微球有望成为一种优良的靶向肿瘤药物载体.     

塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节

目的 研究塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus，SFV）衣壳蛋白5’翻译增强区对基于该病毒复制子的HIV Gag DNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响：方法将SFV衣壳蛋白（capsid，C蛋白）基因的5’端102bp翻译增强区插入到SFT复制子DNA疫苗载体pCMV-Rep的SFV亚基因启动子下游，得到DNA疫苗载体pCMV-RepC。将删除ATG的HIV-1 gag基因插入pCMV-RepC，使gag编码区与翻详增强区融合，得到DNA疫苗质粒pCMV-RepC-gag。同时，构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMV-Rep-gag。Western blot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALB／c雌性小鼠，ELISA检测Gag特片的抗体反应，ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5’翻译增强区增强了Gag表达水平，对体液免疫应答没有显著影响，但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反心。     

神经根撕脱后脊髓运动神经元的病理表现

目的:观察神经根撕脱后脊髓前角运动神经元的病理表现,探讨在该条件下运动神经元死亡的神经生物学机制。方法:选择成年SD雌性大鼠20只,体重200-300g,撕脱右侧臂丛C₅-T₈神经根,术后动物存活3d、5d、1周后取C₅-C₈节段脊髓,对冰冻切片行NADPH-d组化、c-jun免疫组化、中性红和HE染色。观察神经元的形态,计数脊髓前角NOS阳性运动神经元及存活运动神经元数目,以非损伤侧的前角运动神经元数目为100%,计算百分比。结果:神经根撕脱3d、5d、1周后,损伤侧脊髓前角NOS运动神经元平均阳性率分别为:0.74%±0.59%、24.83%±6.73%、51.16%±8.67%。神经元平均存活率分别为93.00%±4.32%、93.67%±5.27%、89.83%±2.65%;c-Jun从撕脱术后3d就有表达,5d后表达开始减少。运动神经元形态变化不明显。1周时偶见前角运动神经元的胞核偏位,但核膜清晰,核仁尚存,染色体固缩。结论:脊神经根撕脱1周内,脊髓前角运动神经元NOS表达递增,c-Jun表达递减,运动神经元开始死亡。NO/NOS可能通过抑制神经元损伤后的再生反应,促进脊髓前角运动神经元的死亡。     

转基因内皮细胞的构建及其在复合血管上种植的初步研究

目的:为了解决小口径(直径7mm以下)人造血管术后通畅率低下的问题,利用生物-人工复合血管,结合分子生物学手段,将转入血管内皮生长因子(VEGF165)基因的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)种植于复合血管内腔面,为解决此临床难题提供新的思路和手段。材料方法:构建VEGF165真核表达质粒pCI-neo-VEGF165,获得正确的质粒用于转染HUVEC。从中科院购买HUVEC(代号:ECV-304),用脂质体介导法将pCI-neo-VEGF165转入细胞,经G418筛选后,计数阳性克隆,以比较脂质体和质粒在不同比例情况下转染效率的高低。实验组按质粒和脂质体比例的不同分为4组:1μg/3μl;2μg/6μl;2μg/8μl;3μg/12μl。ELISA检测瞬时转染后HUVEC培养上清中VEGF的表达。再将VEGF165基因瞬时转入HUVEC,利用自己设计的旋转培养装置,将细胞均匀地粘附、种植于复合血管内腔面。复合血管是人工材料(聚酯)和生物材料(成纤维细胞长入,胶原形成)有机结合而成,是将包有聚酯网的硅胶棒埋入绵羊背部皮下组织,3个月后取出,抽去硅胶棒而得到的。结果:脂质体转染效率以2μg/8μl组阳性克隆数最多;ELISA测定瞬时转染后HUVEC培养上清中VEGF的表达量为532·5±43·1pg/ml。使用旋转培养装置的细胞均匀地粘附于复合血管,未使用者细胞积聚于血管腔面下部;转入和未转入VEGF165基因的HUVEC在复合血管内腔面覆盖面积百分比分别为69·9%±3·5%、43·7%±2·5%,有明显改善。结论:转入VEGF后可促进HUVEC在复合血管上生长,旋转培养装置有利于细胞的均匀粘附。     

SARS患者血清IL-8、IL-12和TGF-β1的检测及意义

目的 :探讨SARS患者血清IL 8、IL 12和TGF β1在SARS冠状病毒感染致病中的作用。 方法 :应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 2 8例SARS冠状病毒感染患者双份血清IL 8、IL 12和TGF β1的水平。实验数据采用两样本均数t检验法。结果 :2 8例SARS冠状病毒感染者血清IL 8水平、病程第 2周IL 12水平比正常健康对照组明显降低 (P <0 0 5 )。SARS冠状病毒感染者血清TGF β1水平与对照组比较无明显差异 (P >0 0 5 )。 结论 :IL 8和IL 12在SARS冠状病毒的致病与免疫过程中可能起降低细胞免疫功能作用