维甲酸和Shh因子联合诱导神经干细胞分化为胆碱能神经元及其体内移植的实验研究

目的 探讨维甲酸和Shh因子联合诱导大鼠神经干细胞(NSCs)分化为胆碱能神经元的可行性. 方法 分离、培养和鉴定大鼠的NSCs,联合应用维甲酸和Shh因子诱导NSCs分化,应用胆碱能细胞特异抗体VAChT作组化鉴定,通过流式细胞仪计数诱导后胆碱能神经元的比例;并将其注射到大鼠脊髓,观察体内存活情况. 结果 维甲酸和Shh因子联合诱导NSCs可以产生较高比例的VAChT阳性细胞,阳性率达77.26%±0.99%,明显优于对照组:移植体内的细胞可以存活并具有一定迁移能力. 结论 应用维甲酸和Shh因子联合诱导NSCs能产生较高比例的胆碱能神经元,可以为修复脊髓损伤提供新的细胞来源.     

离子与脊髓损伤

脊髓损伤后,组织中钙、镁、钾、钠等离子的浓度发生改变,同时,这些离子失衡又加重脊髓损伤。研究脊髓损伤后组织中离子浓度的变化规律,对脊髓损伤的救治具有重要意义。本文就此作一综述。     

膜片钳实验软件Pclamp在单位放电中的应用

应用膜片钳实验系统及其软件Pclamp 6．0,采集和分析脊髓神经元单位放电信号,并与其它方法进行对比,发现Pclamp是一种准确可靠的分析软件,可用于单位放电的记录和分析。     

大鼠脊髓缺血损伤后神经微丝及胶质纤维酸性蛋白的改变

目的神经微丝（ＮＦ）和胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）分别为神经细胞和胶质细胞特异的中间丝蛋白。着重探讨大鼠脊髓缺血损伤后ＮＦ和ＧＦＡＰ的改变及其可能的病理意义。方法利用ＮＦ和ＧＦＡＰ的单抗，借助于免疫组化、图像分析等手段，对大鼠腹主动脉再灌流缺血模型损伤脊髓神经细胞ＮＦ６８染色强度及胶质细胞数进行定性定量研究。结果伤后１天，ＮＦ的变化不明显；伤后３天，ＮＦ染色明显降低；７天达最低水平，并持续至２１天；２８天基本恢复至伤前。而胶质细胞数与正常相比，伤后１，３，７天无明显变化；至伤后１４天明显增加，并随时间而增加；至２８天达高峰。结论脊髓损伤后ＮＦ的降低与创伤性脑损伤中ＮＦ的变化相似，提示亦具有扩散性轴突损伤的存在。而胶质细胞的增生可能参与脊髓损伤的修复过程。     

Cl^-通道在溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨Cl-通道在溶血磷脂酸(LPA)引起的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法采用细胞计数和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验,并结合激光共聚焦显微镜上测定细胞内Ca2 浓度等技术,研究不同Cl-通道阻断剂对LPA促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。结果Cl-通道阻断剂DIDS(二异硫氰酸二丙乙烯二磺酸,0.01~0.1mmol/L)可浓度依赖式的抑制溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖,其他Cl-通道阻断剂如5-硝基苯丙氨基苯甲酸(NPPB)、4乙酰氨基4异硫氰酸2,2二磺酸(SITS)、二苯丙氨基2,2二羧酸(DPC)(浓度均为10-7~10-3mol/L)和速尿(浓度均为10-5~10-3mol/L)等均无此作用,且DIDS对电压依赖性钙通道没有直接的影响。结论溶血磷脂酸可以开放DIDS敏感的Cl-通道,且该通道可能在溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖的调控上起一定的作用。     

噪声来源及解决在膜片钳实验中的作用

膜片钳实验将电生理实验推向了分子水平，其记录的信号是皮安级的通道电流，因此，排除噪声在膜片钳实验中极其重要。结合工作实践，分析膜片钳实验中噪声的原因及种类，介绍常用的解决措施。     

Experimental study on the apoptosis of the astrocytes and the oligodendrocytes induced by Ca^2＋ reperfusion

OBJECTIVE: To investigate the apoptosis rules of the astrocytes and oligodendrocytes induced by Ca(2+) reperfusion. METHODS: The apoptosis of purified cultured astrocytes and oligodendrocytes induced by Ca(2+) reperfusion and the relationship between the development of the cell apoptosis and post-reperfusion time was observed. RESULTS: Both the astrocytes and oligodendrocytes were obviously in a time-dependent fashion, and the apoptosis ratios of the oligodendrocytes (39.73%+/-4.16%) were higher than the astrocytes (19.64%+/-4.67%) 24 hours after Ca(2+) reperfusion. The TUNEL positive cells were 13.6+/-1.82 and 21.4+/-1.95 at every visual field of astrocytes and oligodendrocytes respectively 24 hours after Ca(2+) reperfusion. CONCLUSIONS: The astrocytes and oligodendrocytes are similar wi th the development rules on apoptosis and have different susceptiveness to the situation.     

Protective effect of adenovirus-mediated BDNF gene expression on spinal axon following in rats after spinal cord injury

The routine treatments of spinal cord injury are palliative in Practice at Present. Their goal is only to preventthe secondal injeq and the complications, and then thepatients to adapt new life style under palalysis condition.The sprouting and the Plasticity of the neims in foe centlal nervous system (CNS) Of malnlnals has been ProVedll]. It is wen known that the neurntrOPhins facilitatethe renovation and regenerahon of the ne~ns in CNS after injuries. HoweVer the c~ive effect Of the ne…     

不同培养条件对神经干细胞分化的影响

目的:观察在不同血清浓度的诱导条件下神经干细胞定向分化为两类不同神经细胞的情况。方法:通过无血清培养的方法,将原代培养所获得的神经干细胞克隆经传代纯化后,分别接种在加入NeuralBasal,DMEM/F12+50g/L胎牛血清以及DMEM/F12+100g/L胎牛血清3种不同的培养基的培养皿中,7d后进行NF-200,GFAP免疫双标染色,在显微镜下随机选取20个视野,记数神经元和胶质细胞的比例。并进行统计学处理。结果:在无血清、50g/L以及100g/L胎牛血清浓度下,神经元与胶质细胞的比例分别为:65%:35%,45%:55%,33%:67%。在无血清和低血清浓度下,所分化的胶质细胞为原浆型星形胶质细胞,而在高血清浓度下则分化为纤维型星形胶质细胞。结论:血清浓度的高低决定了神经干细胞分化为神经元和胶质细胞的比例,并且对所分化的胶质细胞的种类也有影响。在无血清条件下神经干细胞趋向于向神经元分化。     

大鼠脑内囊出血后脊髓缝隙连接蛋白Cx32和运动诱发电位的变化及意义

目的　观察大鼠脑内囊出血后皮层运动传导束功能改变以及脊髓灰质中细胞缝隙连接的改变及可能意义。方法　制备大鼠右侧内囊出血模型 ,应用电生理学方法检测运动诱发电位 ,同时采用免疫组织化学方法观察脊髓组织中缝隙连接蛋白Cx32的表达变化。结果　动物内囊出血后经右侧皮层刺激的MEP波幅较左侧显著降低 (P <0 .0 1 ) ,且经右侧皮层刺激的MEP潜伏时显著延长 (P <0 .0 1 )。脑出血后 1和 2周 ,脊髓左侧灰质中Cx32表达明显增加 ,而脊髓前角几乎没有表达 ;相反右侧脊髓灰质中未能观察到其表达。结论　大鼠脑内囊出血后引起皮层运动传导通路的电生理改变 ,而该出血侧通路所支配的对侧脊髓灰质中细胞表达Cx32明显增加 ,这可能是皮质脊髓束损害后脊髓γ环功能亢进的原因