尖吻蝮蛇毒小分子多肽对人卵巢癌A2780细胞增殖和黏附的影响

目的探讨尖吻蝮蛇毒小分子多肽(K组分)对体外培养的人卵巢癌A2780细胞株的增殖抑制作用及机制。方法MTT法观察K组分对人卵巢癌A2780细胞增殖的影响;采用光镜、电镜观察细胞形态变化;荧光染色法测定和观察K组分对A2780细胞凋亡影响;采用结晶紫染色法测定K组分对A2780与FN黏附作用的影响。结果MTT显示K组分呈剂量与时间依赖性抑制人卵巢癌A2780细胞株的增殖,电镜观察给药组细胞出现明显凋亡,荧光显微镜下可见细胞形态发生改变,K组分对A2780细胞在FN基质上的黏附有一定的抑制作用,并呈浓度依赖关系。结论K组分对体外培养的人卵巢癌A2780细胞株有较明显的抑制作用,该作用与诱导细胞凋亡和抑制细胞和细胞外基质黏附的能力有关。     

蛇毒神经生长因子对体外培养鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的研究蛇毒神经生长因子（venom nerve growth factor，vNGF）对离体培养的视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）的存活和轴突再生的影响。方法采用新生大鼠视网膜神经细胞体外原代培养技术，加入不同浓度的vNGF，通过检测细胞的活力选择一个最佳浓度进行培养，行抗Thy-1．1免疫细胞化学染色，观察RGCs在体外的存活时间,比较实验组和对照组的RGCs个数、胞体直径和轴突长度。结果vNGF的最佳浓度是80μg.L，用该浓度作用于细胞，实验组与对照组细胞存活时间分别为13～14d和7～8d，轴突长度分别为（111.78±10.65）μm和（78.73±8.23）μm。阳性细胞个数分别为（224.23±3.83）个和（182.47±2.79）个。结论vNGF能促进体外视网膜神经细胞和RGCs的存活以及轴突的伸长，有视神经保护作用。     

牡蛎活性肽对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨牡蛎活性肽BPO G50—Ⅱ对人舌鳞癌Tea8113细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度BPO G50-Ⅱ作用于体外培养的人舌鳞癌Tea8113细胞,作用24、48、72h时计数拒染活细胞数,计算生长抑制率（IR）和IC50采用光镜、电镜观察48h后细胞形态及超微结构变化;荧光染色法观察BPOG50-Ⅱ作用后的凋亡情况。结果BPOG50-Ⅱ作用后IR明显降低,呈剂量与时间依赖性;24、48、72h的IC50分别为1．50、0．57、0．20g／L;电镜观察细胞出现明显凋亡,荧光显微镜下见细胞出现凋亡改变。结论牡蛎活性肽对人舌鳞癌细胞株Tea8113体外增殖具有抑制作用,可引起细胞形态学改变并能诱导其发生凋亡。     

BCL2（Ala43Thr）多态对前列腺癌PC3细胞迁移的影响

目的：：研究BCL2(Ala43Thr)多态对前列腺癌PC3细胞迁移的影响。方法：选用前列腺癌PC3细胞作为目的细胞,实验分为4组：(1)空白对照(CON)组：正常目的细胞、未感染任何病毒的细胞组;(2)阴性对照(NC)组：正常目的细胞、加阴性对照病毒感染的细胞组;(3)过表达-野生型(OE-wt)组：正常目的细胞、加目的基因 BCL2野生型病毒感染的细胞组;(4)过表达-突变型(OE-mu)组：正常目的细胞、加目的基因BCL2突变型病毒感染的细胞组。通过质粒构建和 PC3细胞转染以后进行细胞划痕实验,比较各组的迁移率,在6 h和24 h分别观察细胞形态学和测量每组的迁移距离并计算迁移率。结果：(1)从形态学上观察,4个组的细胞形态没有区别,生长良好。(2)细胞克隆形成率测定：CON 组为30%,NC 组为20%,OE-wt 组为12%, OE-mu组为14%。(3)在6 h时 OE-wt组、OE-mu组与CON组迁移率比较差异有统计学意义(P =0.004,P =0.005),但OE-wt组与 OE-mu组相比差异无统计学意义(P>0.05)。24 h 划痕均愈合,迁移率为1。结论：BCL2(Ala43Thr)过表达的野生型和突变型均对前列腺癌PC3细胞的迁移无影响。     

尖吻蝮蛇毒抗凝与纤溶组分对动物血栓的溶栓效应

目的:观察尖吻蝮蛇毒类凝血酶与纤溶酶单用与合用对动物血栓的溶栓作用。方法:①实验于2005-01/06在广西医科大学药理学实验室完成。选用新西兰兔120只,雌雄不拘。②取家兔96只,随机分为4组:对照组,纤溶酶组,类凝血酶组,纤溶酶 类凝血酶组,每组24只,每组于实验30,60,120,240min4个时间点各6只。③建立家兔肺栓塞模型:麻醉后固定,耳缘静脉取血1mL,并与凝血酶水溶液混合制备血栓,分一侧颈外静脉,将制好的血栓注入,然后加注20mL生理盐水,于30,60,120,240min后分别将纤溶酶0.7mg/kg,类凝血酶4μg/kg,纤溶酶0.7mg/kg 凝血酶4μg/kg耳缘静脉注射于纤溶酶组,类凝血酶组,纤溶酶 类凝血酶组。24h后处死兔,取出肺中栓子称重,计算相对溶栓率[(溶前血栓湿重-溶后血栓湿重)/溶前血栓湿重×100%]。④将其余24只家兔随机分为4组:对照组,纤溶酶组,类凝血酶组,纤溶酶 类凝血酶组,每组6只。建立家兔动脉血栓模型:麻醉家兔后,分离左侧的颈总动脉和右侧颈外静脉,取一端长7cm的聚乙烯管,中间内置一根6cm已称重的4号手术线。以肝素(5×104U/L)浸湿管壁后插入左颈总动脉和右颈外静脉之间。开放血流,15min后,取出手术线称重,减去原线质量即为药前血栓湿重。然后将纤溶酶0.7mg/kg,类凝血酶2μg/kg,纤溶酶0.7mg/kg 凝血酶2μg/kg分别静脉注射于纤溶酶组,类凝血酶组,纤溶酶 类凝血酶组,于给药后15,30,60,120min分别测定聚乙烯管中的手术线质量,血栓湿重=总质量-丝线干重。⑤计量资料差异比较采用t检验。结果:新西兰兔120只均进入结果分析。①家兔肺栓塞溶栓率:纤溶酶组,类凝血酶组,纤溶酶 类凝血酶组明显高于对照组(t=16.895～35.441,P<0.01)。②家兔动脉血栓湿重:纤溶酶组,类凝血酶组,纤溶酶 类凝血酶组明显低于对照组(t=2.899～10.561,P<0.01)。结论:尖吻蝮蛇毒类凝血酶与纤溶酶有协同溶栓作用。     

广西北部湾近江牡蛎降糖作用的研究

目的 研究广西北部湾近江牡蛎(Crassostrea rivularis)降血糖作用.方法 采用牛胰蛋白酶酶解方法制备牡蛎活性肽,经超滤分离,得到分子量小于5 000 Da的牡蛎活性肽,采用氨基酸分析仪测定氨基酸组成,用苯酚-硫酸法测定糖原含量;用四氧嘧啶制作小鼠糖尿病模型,共设6个组,即正常对照组、模型对照组、阳性药物组及牡蛎酶解活性肽高、中、低剂量实验组,实验周期为14 d,实验结束时,各组小鼠经眼球取血后处死,取出肝脏和肾脏称重并计算脏器指数,采用酶法、分光光度法测定小鼠血糖(FBG).结果 牡蛎酶解活性肽氨基酸总量为44.30%,糖原26.12%;低﹑中、高剂量组小鼠的血糖水平均显著低于糖尿病模型对照组(P<0.01).结论 牡蛎酶解活性肽营养丰富,具有良好的降糖效果.     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤溶酶的急性毒性实验

目的研究无出血活性纤溶酶（Non-hemorrhagic fibrinolytic enzyme，NHFLE）的急性毒性，评价其安全性。方法尾静脉注射给药，观察记录给予NHFLE后昆明种小鼠的急性毒性反应。结果NHFLE的半数致死量（LD50）为28．84mg／kg。结论急性毒性实验证实该药毒性低，临床应用安全性好。     

牡蛎不同提取方法中糖原含量的比较

目的 通过含量测定,筛选适宜的牡蛎糖原提取方法。方法采用比色法,以苯酚-硫酸溶液为显色体系,检测波长为490nm。结果葡萄糖进样量线性范围为10～80μg（r=0．9988）,平均回收率97．74％,RSD=0．91％（n=6）。水提法获得的样品糖原含量最高,为48．46％;经Sephadex G-50凝胶柱层析收集第Ⅱ峰,其冻干品的糖原平均含量为26．12％。结论比色法方法简便、准确、重现性好,可用于牡蛎中糖原含量测定：     

尖吻蝮蛇毒小分子多肽的分离及抗血小板聚集作用

目的从尖吻蝮蛇毒中分离纯化一种抗血小板聚集小分子多肽,研究其理化性质以及对ADP、胶原、凝血酶诱导的血小板聚集反应的影响。方法经SephadexG-75凝胶过滤,超滤,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析法分离纯化蛇毒组分,采用高效液相鉴定纯度,用SDS-凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子量,用比浊法测定其抗血小板聚集活性。结果从尖吻蝮蛇毒中分离相对分子质量约为7862u等电点为4.29的组分,该组分能抑制由ADP、胶原、凝血酶诱导的血小板聚集并成剂量依赖性。结论此法成功地从尖吻蝮蛇毒中纯化出抗血小板聚集组分。该组分与去整合素比较相似,可能属于去整合素家族。     

广西眼镜蛇蛇毒细胞毒素的抗肿瘤作用

目的 了解广西眼镜蛇毒细胞毒素(CTX)的抗肿瘤作用。方法 采用MTT法检测CTX对人鼻咽癌细胞株(CNE)、淋巴瘤细胞株(YAC)、S180癌细胞株、人宫颈癌细胞株(HELA)和卵巢癌细胞株(Ho8990)体外细胞毒作用，同时应用动物移植性肿瘤的体内试验法，观察CTX对S180载瘤小鼠(S180)和CNE的抑瘤作用及其生命延长率。结果 CTX对上述体外培养的肿瘤细胞有明显的细胞毒效应，作用24h的半数抑制浓度分别为1．04，0．50，1．82，1．76和1．05μg／ml；CTX对小鼠肿瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为12％～37％，呈明显量效关系。结论 CTX对体外培养的癌细胞株有较强的抑制作用，对小鼠移植性瘤有一定抑制作用。