缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株接受放射和化学药物治疗感受性的影响

背景:缺氧诱导因子1α是一种转录因子,缺氧环境下对哺乳动物细胞起重要的调控作用。然而缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株的放疗和化疗感受性的作用有待研究。目的:观察缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株接受放射和化学药物治疗感受性的影响。设计:观察对比实验。单位:首都医科大学附属北京朝阳医院。材料:口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5,和口腔鳞状上皮癌细胞株-6来自人口腔鳞状上皮癌细胞(由日本高知大学医学部口腔外科建株)。方法:本实验于2004-09/2006-08于首都医科大学附属北京朝阳医院完成。将口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5,和口腔鳞状上皮癌细胞株-6采用含小牛血清,左旋谷酰胺,青霉素,链霉素的改良DMEM培养液中培养。①从未处理和用30Gyγ射线,100μmol/L顺铂或100μmol/L5-氟脲嘧啶处理后的口腔鳞状上皮癌细胞株中提取细胞核蛋白。采用免疫印迹法检测缺氧诱导因子1α蛋白表达水平,同时采用定量PCR检测缺氧诱导因子1αmRNA的表达。②不同干预条件下细胞增殖抑制情况:将口腔鳞状上皮癌细胞株单细胞悬液以1×104/孔接种于96孔板中,每孔分别加入终浓度为100μmol/L的顺铂或5-氟尿嘧啶,或用30Gyγ射线处理细胞,培养48h后,采用用噻唑蓝比色法检测细胞增殖抑制情况。③不同干预条件下细胞凋亡分析:口腔鳞状上皮癌细胞株细胞用30Gyγ射线,100μmol/L顺铂或100μmol/L5-氟脲嘧啶处理24h后,用Propidi-umiodide和AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪测定凋亡细胞数(仅分析γ射线,顺铂处理组)。④质粒构建和转染:将人缺氧诱导因子1αcDNA克隆至pcDNA3.1/V5-HisTOPO表达载体。用脂质转染法将缺氧诱导因子1αcDNA暂时转染口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞。将缺氧诱导因子1αsiRNA(有义序列为5’CUGAUGACCAGCAACUUGAtt3’)暂时转染口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞,设立空白对照,同时给予细胞增殖抑制情况观察,以及细胞凋亡分析(仅分析顺铂处理组),方法同前。主要观察指标:①不同口腔鳞状上皮癌细胞株缺氧诱导因子1α的mRNA和蛋白表达情况。②不同干预条件下口腔鳞状上皮癌细胞株增殖抑制及细胞凋亡情况。③缺氧诱导因子1α过表达或缺氧诱导因子1α基因敲除的转染细胞的蛋白水平检测。④转染细胞和对照口腔鳞状上皮癌细胞株细胞增殖抑制情况和细胞凋亡分析结果。结果:①不同口腔鳞状上皮癌细胞株间缺氧诱导因子1αmRNA和蛋白表达结果:口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞缺氧诱导因子1αmRNA的相对表达水平分别为1.0,2.2,4.3和4.0。缺氧诱导因子1α的细胞总蛋白和细胞核蛋白的表达在口腔鳞状上皮癌细胞株-2和口腔鳞状上皮癌细胞株-4细胞中较弱,而在口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞中较强。②不同干预条件下口腔鳞状上皮癌细胞株细胞增殖抑制及被诱导凋亡情况:经γ射线,顺铂及5-氟脲嘧啶处理后,口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞数分别下降至(39.5±3.2)%,(39.2±1.2)%和(47.9±3.6)%,口腔鳞状上皮癌细胞株-4细胞数分别下降至(53.9±6.6)%,(54.3±1.4)%,(54.8+3.8)%。口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞数分别下降至(74.1±3.8)%,(76.5±9.1)%,(69.6±7.7)%,口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞数分别下降至(71.4±7.4)%,(84.4±8.8)%,(82.0±4.5)%。顺铂处理后,口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞的凋亡细胞数分别为(50.9±1.3)%,(67.3±2.2)%,(12.2±0.8)%和(38.6±0.9)%。γ射线处理后,口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞的凋亡细胞数分别为(21.2±1.1)%,(14.6±0.9)%,(9.7±1.0)%和(10.4±0.8)%。③不同干预条件下转染细胞增殖抑制及凋亡情况:经γ射线,顺铂及5-氟脲嘧啶处理后,转染了缺氧诱导因子1α表达载体的口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞数高于对照组(t=-4.693,-8.617,-6.721,P<0.01);转染了缺氧诱导因子1αsiRNA的口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞数低于对照组细胞(t=5.800,5.595,4.253,P<0.05～0.01)。用顺铂处理24h后,转染缺氧诱导因子-1α的口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞凋亡数为(34.0±1.9)%,低于空白对照[(49.6±3.4)%,t=6.937,P<0.01]。转染缺氧诱导因子1αsiRNA的口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞凋亡数为(27.7±2.3)%。高于空白对照[(11.4±2.1)%,t=-8.941,P<0.01]。结论:缺氧诱导因子1α表达与口腔鳞癌细胞对放、化疗感受性之间有负相关性。抑制癌细胞的缺氧诱导因子1α表达能增强癌细胞对放疗、化疗的感受性。     

下肢深静脉血栓合并肺动脉栓塞的临床诊治分析

目的：探讨下肢深静脉血栓合并肺动脉栓塞的临床诊治方法及效果。方法：回顾性分析我院2000年1月～2006年6月期间收治的下肢深静脉血栓合并肺动脉栓塞的诊断、治疗经过及一个月的随访结果。结果：32例患者进行肺动脉造影术8例，肺动脉导管裂栓术3例，经导管肺动脉内溶栓7例，植入下腔静脉滤器30枚，经下肢静脉溶栓30例；死亡2例，其中1例死于肺动脉造影时，另1例死于溶栓后脑出血。结论：（1）肺动脉栓塞缺乏特异性的临床表现，容易误诊，应加强认识。（2）心电图、血气分析、D-二聚体、16层CT、肺血流灌注扫描、下肢静脉彩色超声、肺动脉造影等检查都具有各自的有优缺点，应合理应用。（3）肺动脉介入治疗及溶栓治疗都能安全有效地治疗肺动脉栓塞。（4）下腔静脉滤器预防下肢静脉血栓引起的肺动脉栓塞的疗效肯定。     

体外循环下晚期肺癌左全肺切除手术2例

1997年 2月和 1998年 7月 ,我们在全麻体外循环下为 2例肺癌病人成功地实施了左侧全肺切除术。现报道如下。例 1　男 ,5 4岁。胸部ＣＴ扫描提示 ,左肺上叶一直径约4 9ｃｍ肿块 ,呈分叶状 ,与纵隔分界不清 ,周围肺野可见点片状影 ,纵隔居中 ,右肺未见异常。气管镜检查见左肺上叶升支外侧壁桑椹样物 ,取活检 ,病理报告为肺腺癌。例 2　男 ,31岁。胸部ＭＲＩ扫描提示左侧主支气管截断 ,呈鼠尾状 ,并可见不规则软组织肿块影 ,Ｔ1Ｗ、Ｔ2Ｗ均呈高信号 ,病灶紧邻左肺动脉 ,压挤并包裹左侧肺动脉 ,纵隔内可见肿大淋巴结。气管镜检查见左主支气管内…     

祝贺鲁子惠先生百岁寿辰

在庆贺鲁子惠先生百岁寿辰之际,作为鲁先生的学生我心情非常激动.鲁子惠先生是我国老一辈神经生理学家,心理学家和神经解剖学家之一,中国科学院上海脑研究所研究员.他是河南开封人,生于1899年7月19日.早年丧父.家境清寒,在小学时代曾因贫穷几度辍学,但他刻苦自学,不怕困难,有奋发图强的信念,在学期间成绩优异,受到老师的赞扬.1925年就受到他的老师汪敬熙先生的赏识被遴选为这位著名的生理心理学家的助手,一起工作达二十年之久,先后帮助汪先生在广州中     

参附注射液作用机制的计算机系统生物学分析

目的:参附注射液是传统中药红参与附子的复方制剂,临床主适应症为充血性心力衰竭、缺血性脑卒中等。以缺血性脑卒中为导向,采用系统生物学和实验研究方法,对参附注射液调节生物学网络的分子机制做一阐释。方法:以参附注射液的28个成分出发,分别从TCMGene DIT数据库系统和Agilent literature search系统中挖掘参附注射液中成分作用的蛋白质数据,并辅助以Pharmmapper反向对接靶标,构建参附注射液多成分-蛋白网络,在Genecards,BIND,Bio GRID,Int Act,Mint等数据库中挖掘蛋白之间关联,建立蛋白相互作用网络。提取显著性差异蛋白子网络一个,并对其中通路以Western blot蛋白印迹方法加以验证。结果:参附注射液成分与55个蛋白有连接,构成53个无孤立结点的蛋白相互作用网络。应用Cluster One模块对蛋白相互作用网络富集分析,提取显著性差异P0.05的子网络1个,子网络中含有关键蛋白15个,经Biocart信号通路映射,涉及NF-κB信号通路,AKT信号通路,Toll样受体信号通路,MAPK信号通路等。采取Western blot方法对富集指数P值最小的NF-κB信号通路进行验证,发现参附注射液在缺血1 h再灌注24 h的MCAO模型上对NF-κB p65和IκB-α的磷酸化表达有明显下调作用。结论:采用计算机系统生物学和实验验证方式初步阐释了参附注射液主要化合物防治疾病的分子机制,并以分子生物学实验方式对所预测的信号通路进行验证,为中药复方的系统研究提供参考。     

新生儿颅内出血与缺氧缺血性脑病诊断的研究

本文报告了新生儿颅内出血111例,缺氧缺血性脑病51例,对临床表现及主要实验室检查做了观察和分析。出院140例中的113例,获得了2岁半以内的近期追踪结果。死亡33例,残废35例,总的致死致残率高达41.98％。根据研究结果提出了诊断和分型标准;提出了预后不良指标。并对新生儿颅内出血及缺氧缺血性脑病的关系进行了探讨。     

中医中药治疗甲状腺结节108例

1975年底至1980年5月,我们于门诊应用中药治疗甲状腺结节患者共173例。现将病史记录完整并连续服药满30天者之108例作一小结。大多数先由外科检查,认为需要手术治疗(其中9例为甲状腺腺瘤手术后复发,需要再次手术者),因患者有顾虑而转来,或因同时患有其它疾病(如高血压、心脏病等),不宜手术者。一、一般资料男性34例,女性74例。50岁以上者28例,40～49岁者33例,30～39岁者21例,20～29岁者23例,20岁以下者3例。本病发展缓慢,开始时结节小,一般无自觉症状,及至结节逐渐增大,才有     

腹腔镜胆囊切除术后并发症的观察与护理

目的观察患者接受腹腔镜胆囊切除术后发生的并发症,总结护理经验,探讨护理策略。方法回顾性分析我院于2010年6月至2012年12月收治的93例接受腹腔镜胆囊切除术患者的临床护理资料。结果本组93例接受腹腔镜胆囊切除术患者中,发生术后并发症13例,其中,全麻术后呼吸道梗阻1例,胆汁瘘1例,胆道损伤1例,术后出血1例,皮下气肿1例,肩背部酸痛3例,恶心、呕吐5例。结论密切观察患者的病情变化,提供细致周到的护理服务,能够有效控制腹腔镜胆囊切除术后并发症的发生率,减轻患者的痛苦,提高治疗效果,促进患者身体健康的恢复。     

丹红注射液对多柔吡星所致Lewis肺癌小鼠心肌损伤保护作用的研究

摘 要 目的：研究丹红注射液（DH）对抗肿瘤药物多柔吡星（DOX）所致小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法: 通过腋下注射Lewis肺癌细胞建立小鼠实体瘤模型,随机分为4组：模型对照组、DOX组、DH组、DH+DOX组。实验结束,颈臼处死小鼠,无菌分离心肌和肿瘤组织,肿瘤称质量,比色法检测心肌组织中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK)、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）的活性及丙二醛（MDA）的含量;流式细胞仪检测心肌细胞内的细胞凋亡、活性氧（ROS）和线粒体膜电位（△Ψm）。结果: 与模型对照组相比,DOX和DH+DOX组中肿瘤质量显著下降（P<0.01）,且DH对DOX的抗肿瘤作用无显著影响;小鼠心肌组织中LDH和CK活性、细胞凋亡显著增加（P<0.01）。与DOX组相比,DH+DOX组心肌组织中LDH和CK活性、细胞凋亡显著降低（P<0.01）,且△Ψm、SOD、CAT与GPx的活性显著增加（P<0.05或P＜0.01）,MDA含量和ROS生成减少（P<0.01）。结论:腹腔注射DH不影响DOX的抗肺癌作用,但对于DOX介导的心肌损伤具有保护作用,其机制与DH抑制心肌组织氧化应激和稳定△Ψm有关。