应用CRISPR/Cas9基因编辑系统对HEK293细胞系TSC1基因稳定敲除效果的实验鉴定

目的　利用成簇规律间隔短回文重复序列/ 成簇规律间隔短回文重复序列相关蛋白（clustered regularly interspacedshort palindromic repeat/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas9）基因编辑系统在HEK293 细胞系中对TSC1 基因稳定敲除,并对其敲除效果进行鉴定。方法　根据TSC1 基因的序列设计sgRNA,将sgRNA 克隆到载体lentilCRISPRv2 上,将连接产物转化至Stbl3 感受态细胞,对菌液进行测序鉴定。将鉴定成功的lentiCRISPRV2-sgTSC1 质粒转染至HEK293细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,挑选单细胞克隆进行PCR 鉴定,选取条带单一的细胞株用Western blot 鉴定TSC1 基因的表达。结果　成功构建lentiCRISPRV2-sgTSC1-1/2 重组质粒,并利用该质粒完成对TCS1 基因的定点切割,Westernblot 结果显示细胞中无TSC1 表达。结论　用CRISPR/Cas9 系统成功构建TSC1 基因敲除的稳定细胞株,为后续实验奠定了基础。     

芜湖市健康检查者空腹血糖结果

空腹血糖是诊断糖尿病的一项重要参数。国际上将空腹血糖参考值上限定为 6 11ｍｍｏｌ·Ｌ- 1〔1〕,国内大多数实验室也采用 3 89～ 6 11ｍｍｏｌ·Ｌ- 1〔2〕的空腹血糖参考值 ,1987年国内有人用邻甲苯胺法测定 4 85名部队干部、战士空腹血糖 ,其参考值为4 0 5～ 5 60ｍｍｏｌ·Ｌ- 1〔3〕。考虑到国内人群空腹血糖参考值及空腹血糖水平与年龄之间关系的资料相对较少 ,笔者用己糖激酶速率法对测定的 2 2 2 9例健康检查者空腹血糖结果进行分析 ,以了解本地区人群空腹血糖水平、参考值范围及空腹血糖与年龄之间的关系。1　材料与方法1.1　受…     

隐匿性丙型肝炎病毒感染研究进展

临床上大约有10％的肝损害患者不能找到明确的病因,随着高灵敏度RT-PCR检测技术的发展,人们已经发现一部分肝炎很可能是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染引起,而隐匿性HCV感染作为一种特殊感染形式正逐渐受到重视,其感染特点、临床特征、免疫状态、临床转归与普通慢性HCV感染有显著差异.1 隐匿性HCV感染的定义及鉴别     

腹腔镜配合胆道镜治疗胆囊结石合并胆总管结石疗效分析

目的：探讨腹腔镜配合胆道镜治疗胆囊结石合并胆总管结石的疗效,以供参考。方法将本院2012年3月~2013年2月收治的胆囊结石合并胆总管结石患者60例纳入本研究,根据随机法分组。对照组接受传统开腹手术治疗,实验组接受腹腔镜配合胆道镜治疗。对比两组手术时间、术中失血量、肛门排气时间、住院时间,随访1年期间结石复发率的差异性。结果与对照组对比,我们发现实验组手术时间较长,术中失血量较少,肛门排气时间、住院时间均较短,组间差异经统计学分析后认为有意义(P<0.05)。对比两组随访1年期间结石复发率发现,组间差异经统计学分析后认为无意义(P>0.05)。结论腹腔镜配合胆道镜治疗胆囊结石合并胆总管结石手术效果满意,创伤小,恢复快,具有更大的临床优势。     

课外科研中学员常见问题分析及对策

就学员在课外科研不同时期常见问题进行分析并提出相应的对策。在初期学员往往对科研工作充满好奇心和神秘感,要引导学员树立对科研工作意义的正确认识;选题阶段要帮助学员解决所遇到的选题困难、选题的原则把握不好等问题;确定题目后要依据实验设计的原则完成好实验设计;在实验实施阶段要做好实验的准备、树立克服困难的信心、相互沟通协作完成实验;最后应当完成好论文的总结和撰写。     

己烯雌酚对小鼠H22肝癌细胞肺转移的作用

目的:探讨己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)对小鼠H22肝癌细胞在小鼠体内造成肺转移的影响及其机制.方法:将100只小鼠随机分为注射生理盐水对照组(A组),注射芝麻油对照组(B组),注射不同剂量DES用药组(C、D、E组).采用尾iv H22肿瘤细胞的方法制作肿瘤转移模型.观察动物肺转移灶及组织切片.采用硝酸还原酶法测定昆明小鼠血清中一氧化氮(NO)含量.采用TYXN-91智能血液凝集仪测定用ADP诱导的血小板聚集率.并进行出血时间测定.结果:C、D、E组小鼠肺表面转移灶数目分别为6.1±2.5,6.1±5.2,4.9±2.2较A、B组(7.3±3.5,8.5±3.7)有不同程度的明显减少(P＜0.05).与A、B组相比,用药组(C、D和E组)血清NO含量有明显升高(P＜0.05),血小板聚集率明显降低(A,B,C,D,E组分别为(31±19)%,(37±17)%,(12±6)%,(14±13)%,(13±12)%(P＜0.05),出血时间明显延长(P＜0.05).结论:DES可能通过促进NO释放,降低血小板聚集功能来抑制肿瘤转移.     

GALEN-III/CTV型彩色电视生物显微镜常见故障排除及保养

0　引言　GALEN III/CTV型彩色电视生物显微镜系国际LE ICA仪器集团与南京江南光学仪器有限公司合作的产品 .用GALEN III型生物显微镜作为图像的输入 ,采用高清晰度的CCD摄像装置将微观图像转化为视频信号 ,2 5英寸的平面直角彩色电视机作为收监两用机来显示图像 ,并且使用光标发生器来操作画面 ,其光标框可在画面上指示任何目标和读数 .本产品真正实现了光、电、机一体化设计 ,同时具有操作简单、使用方便的特点 ,可供多人同时对微观图像进行观察、讨论、研究、分析 ,广泛应用于高等院校、研究院所、卫生医疗结构作科研、教学之…     

改良式虹膜根部离断修复术的临床应用

眼球遭遇顿挫伤或爆炸伤时,极易发生虹膜根部离断。当离断范围超过5mm时,又极易形成双瞳,引起畏光及单眼复视等。我院采用改良式虹膜根部离断修复术对虹膜根部离断患者进行治疗,取得了良好的效果,现报道如下。     

EPHB6受体型酪氨酸蛋白激酶对ERK信号通路的调控效应

目的:探讨促红细胞生成素产生肝细胞B6(EPHB6)对于胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路的作用.方法:以非小细胞肺癌细胞系A549作为研究对象,采用Western Blot法检测ERK的磷酸化水平及通路检测(PathDe-tect)法检测ERK下游分子和Ets结构域蛋白1(Elk-1)转录因子的活性.结果:A549细胞中EPHB6的表达导致ERK的磷酸化.相反,siRNA干涉EPHB6的表达可以逆转ERK的磷酸化.并且,EPHB6导致的ERK磷酸化与Elk-1转录因子脱偶联.结论:表明EPHB6对于ERK信号通路具有调控作用.     

LDL—C直接测定法与Friedewald公式计算法结果对比研究

目的对直接测定法测定血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）与Friedewald公式（F公式）计算的结果进行对比观察。方法在美国Dimension型全自动生化分析仪上对585份标本直接测定TC、TG、HDL—C、LDC-C,同时运用公式法计算出每份标本的LDL—C,按TG〈1．13mmoL／L、1．13～2．25mmol／L、2．26～3．39mm01／L、3．40～4．52mmol／L、〉4．52mm01／L分为5个组。另按TC≤6．2mm01／L、TC〉6．2mmoL／L分为两组进行统计分析。结果直接测定法虽然与公式法有良好的正相关,但TG水平在1．12～2．25mmol／L、3．39—4．52mmol／L、〉4．52mmol／L时,两方法结果差异均有统计学意义,在不同的TC水平下,两方法结果也存在显著性差别。结论两种方法测定结果存在偏差,可能会对同一份标本给出不同的结果．建议对于以治疗和监测心血管病为目的的患者,最好采用直接测定法。