RCS大鼠视网膜色素变性过程中内源性干细胞激活的初步研究

目的研究遗传性视网膜色素变性大鼠(Royal College of Surgeon's rat,RCS rat)在视网膜变性发展过程中是否有内源性视网膜干细胞(retinal stem cells,RSCs)激活.方法RCS-p (视网膜含色素的变性大鼠)按出生后视网膜变性的发展状况分为变性早期(RCS 15 d)、中期(RCS 30 d)、晚期(RCS 90 d)3个时相点,分别采用相应时期的RCS-rdy p (视网膜含色素的正常大鼠)作为对照组(control groups,C15 d,C30 d,C90 d),每组4只8眼,对各组视网膜切片进行免疫荧光组织化学(抗Chx10)实验,以鉴定视网膜干细胞;进一步采用Western blot检测各组视网膜神经上皮总蛋白中Chx10表达.结果①各正常组及变性15 d大鼠视网膜各层抗Chx10免疫荧光检测均为阴性,变性中、晚期视网膜光感受细胞层部位Chx10免疫荧光阳性;②Western blot检测各变性组视网膜神经上皮总蛋白中Chx1O均有表达,但变性中期Chx10表达显著高于早期和晚期(P＜0.05).结论 RCS大鼠变性过程中视网膜感光细胞层出现视网膜干细胞激活.     

培养大鼠视网膜神经节细胞的形态学与电生理学特性

目的比较不同培养天数大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)形态学特性与电生理功能,探讨其形态与功能的最佳培养时期。方法采用出生后0dLong Evans大鼠,取视网膜培养神经节细胞,分别于培养后第1d、4d、7d3个时间点观察细胞形态,并行膜片钳全细胞记录研究其静息膜电位(resting membrane potential,RMP)和动作电位(action potential,AP)的阈值、幅度及波宽。结果共记录到53个RGCs,根据AP类型RGCs分为单峰型(39个)、瞬变型(11个)和持续型(3个),其中以单峰型为主(占73.6%)。培养1d RGCs不易诱发AP,多数细胞需增加刺激强度后方可诱发出AP;培养4d时绝大多数RGCs给予20PA的刺激即可诱发出AP;培养7d时虽较容易诱发AP,但由于此时细胞存活状态较差,部分细胞(共记录28个细胞,其中8个不能诱发AP)给予不同强度的刺激,均不能诱发出AP。不同培养时期的RGCs静息膜电位和AP的特性无显著差异。结论随着培养时间的延长RGCs形态逐渐趋于成熟,但电生理功能仍处于幼稚状态;培养4d的RGCs形态和电生理状态最好。     

某院2006年至2010年10种恶性肿瘤患者的统计分析

目的探讨本地区恶性肿瘤发病特点,为更有效地开展肿瘤防治工作提供依据。方法对2006年至2010年我院收治的恶性肿瘤病例资料运用Excel软件进行统计处理。结果 5年间经我院治疗的10种恶性肿瘤患者共计5345例,其中肿瘤病种构成前5位的分别是肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌和肝癌,占肿瘤患者总数的80.6%。统计结果表明恶性肿瘤发病年龄集中在50岁以上。结论本地区人口恶性肿瘤发病率呈上升趋势,肿瘤发病存在年龄、性别差异。依据肿瘤发病特征对高危人群做好防治工作是降低发病率,提高生存率的关键。     

家庭访视对慢性阻塞性肺病患者生活质量影响

  目的  分析上海浦东地区慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重期住院患者抗菌药物的药物流行病学特征,为促进临床合理用药提供参考依据。  方法  方便抽样上海市浦东新区某2所三级甲等医院,自2014年1月1日 — 2017年1月1日COPD住院患者中随机抽取3 000例,获得COPD急性加重期患者的信息,提取其抗菌药物使用的药物流行病学信息。  结果  COPD急性加重期患者1 784例,其中男性920例（51.57 %）,女性864例（48.43 %）,年龄（77.5 ± 12.4）岁;COPD急性加重期住院患者使用例次最多的抗菌药物类别为头孢菌素类,5 891例次（46.82 %,5 891/12 581）;使用例次最多的抗菌药物为头孢哌酮钠舒巴坦钠,875例次（6.95 %,875/12 581）;药物利用指数最大的为左氧氟沙星（2.06）,最小的为利奈唑胺（0.49）;药物利用指数接近于1的分别为头孢唑肟钠（0.91）,亚胺培南/西司他丁钠（0.99）,利福平（0.99）,环丙沙星（1.08）,比阿培南（1.10）。  结论  上海浦东地区COPD急性加重期住院患者抗菌药物利用较合理,但仍存在不足,还需进一步提高合理用药水平。     

冻存复苏后大鼠视网膜干细胞的增生及分化特性

目的研究视网膜干细胞冻存复苏后的成活率及再培养后的增生分化特性。方法对胎龄17 d Long Evans的大鼠眼视网膜干细胞进行分离与体外培养。利用无血清培养基短期体外培养大鼠胚胎来源的视网膜干细胞，将传代三代后的视网膜干细胞以冻存液［体积分数为80%的改良基础培养基（DMEM）/F12，10%牛血清白蛋白（BSA），10%二甲基亚砜（DMSO），碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）20 ng/ml］于液氮中冻存，于1、2、4、8、12、16周分别复苏，计数活细胞比例进行再培养，并进一步诱导分化，采用免疫细胞荧光化学方法检测视网膜干细胞的增生及分化特性。结果不同的冻存时间对冻存后细胞存活率的影响无显著差异(P＞0.05)，再培养生长良好，具有视网膜干细胞特异性标志，并可进一步诱导分化为视网膜各种类型的细胞。结论大鼠视网膜干细胞的冻存复苏并不影响其原有的增生及分化特性。(中华眼底病杂志, 2007, 23: 94-97)     

双链小片段干扰RNA抑制缺氧条件下乳鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α表达

目的　构建含缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)小片段干扰RNA(siRNA)靶序列的U6启动子表达框结构 ,观察其对缺氧条件下乳鼠心肌细胞HIF 1α表达的影响。　方法　分离培养乳鼠心肌细胞 ,分为常规培养液对照组、RNA干扰 (RNAi)组 (转染无效干扰序列Ⅳ )、RNAi抑制组 (转染有效干扰序列并按下游引物不同分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组 )。设计、合成 3对 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ )含HIF 1α编码基因片段(正、反义 )和 1对 (Ⅳ )随机序列 (正、反义 )的PCR下游引物。PCR法构建U6启动子表达框及相应正、反序列表达框 ,同时转染心肌细胞。每组每时相点 5皿细胞。于缺氧 1h后 ,用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定其蛋白水平表达 ,免疫组织化学法检验干扰效果。缺氧 6h后采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测HIF 1αmRNA的表达。　 结果　筛选出的最佳抑制片段为Ⅱ组序列。缺氧 1h,对照组、RNAi组心肌细胞HIF 1α蛋白水平显著增高 ,Ⅰ、Ⅱ、ⅢRNAi抑制组HIF 1α蛋白水平较对照组明显降低 ,其中Ⅱ组降低最为显著 (P <0.0 1);缺氧 6h,RNAi组心肌细胞HIF 1αmRNA水平较常氧条件下明显增高 (P <0.0 1);RNAi抑制Ⅱ组未见明显增高 (P >0.0 5 )。　 结论　构建的HIF 1αⅡ组表达框能有效地抑制缺氧乳鼠心肌细胞HIF 1α表达     

Effects of chloramphenicol preconditioning on oxidative respiratory function of cerebral mitochondria in rats exposed to acute hypoxia

To investigate the roles of chloramphenicol (CAP) preconditioning in the oxidative respiratory function of cerebral mitochondria in rats exposed to acute hypoxia during acute hypoxia by observing the changes of mitochondrial oxidative respiratory function and cytochrome C oxidase (COX) activity. Methods: Adult male Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control (C), medication (M), hypoxia (H), and medication plus hypoxia (MH). Rats in groups M and MH were administered by peritoneal injection of CAP (50 mg/kg) every 12 h for 7 d before decapitation, but those in groups H and MH were exposed to a hypobaric chamber simulating 5 000 m high altitude for 24 h. The rat cerebral cortex was removed and mitochondria were isolated by centrifugation. Mitochondrial respiratory function and COX activity were measured by Clark oxygen electrode. Results: Compared with Group C, Group H showed significantly elevated state 4 respiration (ST4), decreased state 3 respiration (ST3), and respiratory control rate (RCR) in mitochondrial respiration during acute hypoxic exposure. ST3 in Group MH was significantly lower than that in Group C, but was not significantly different from that in Groups H and M, while ST4 in Group MH was significantly lower than that in groups C and H. RCR in Group MH was higher than that in Group H, but lower than that in Group C. COX activity in Group H was significantly lower than that in Group C. In Group MH, COX activity increased and was higher than that in Group H, but was still lower than that in Group C. Conclusion: Acute hypoxic exposure could lead to mitochondrial respirator3 dysfunction, suggesting that CAP preconditioning might be beneficial to the recovery of rat respiratory function. The change of COX activity is consistent with that of mitochondrial respiratory function during acute hypoxic exposure and CAP-administration, indicating that COX plays an important role in oxidative phosphorylation function of mitochondria from cerebral cortex of hypoxic rats.     

598例复治涂阳痰培养和药敏结果分析

目的：通过对598例复治涂阳痰培养和药敏结果分析,了解复治涂阳患者的分枝杆菌的菌种分布及复治患者耐药情况,指导临床医生合理选择抗结核药物和治疗方案。方法：对598例复治涂阳痰培养和药敏数据进行分析。结果：598例复治涂阳痰共分离结核分枝杆菌535株,非结核分枝杆菌29株。结核分枝杆菌复合群对6种抗结核药物的耐药率：链霉素26．9％、异烟肼35％、利福平30．7％、乙胺丁醇15．5％、氧氟沙星12．9％、卡那霉素1．5％;MDR耐药率为23．2％;XDR耐药率为1．1％。结论：复治涂阳患者的耐药率比较高,需根据药敏结果合理选择治疗方案。部分复治涂阳患者为NTM病,应引起临床医生的重视。     

硬脑膜上微电极植入并记录家猫视皮层电活动

目的 建立初级视皮层区硬脑膜上柔性微电极阵列记录视皮层电活动的方法,比较黑白棋盘格图形和黑白闪烁刺激在诱发视觉诱发电位(visual evoked potential,VEP)方面的差异.方法 成年健康家猫5只,静脉持续麻醉,肌松、呼吸机人工通气,采用自行设计的柔性微电极阵列,微创植入并固定于视皮层定位区的硬脑膜上.比较无视觉刺激和有视觉刺激的视皮层电活动,验证是否能记录到VEP;给予闪光和图形视觉刺激,记录和比较视觉诱发电位的峰值和潜伏期.结果 通过微创手术将微电极阵列植入并固定在视皮层定位区的硬脑膜外;在硬脑膜外微电极阵列可记录到有效VEP;黑白棋盘格图形刺激与黑白闪烁刺激相比,前者诱发的VEP谷峰值显著高于后者(P<0.01),而诱发的VEP波谷潜伏期较后者长(P<0.05),且波峰潜伏期则显著长于后者(P<0.01).结论 在视皮层定位区硬脑膜外首创的微创植入并固定柔性微电极阵列的方法 适用性、重复性好,黑白棋盘格图形刺激优于黑白闪烁刺激,经硬脑膜外利用微电极阵列记录诱发电位是可行的.     

微量刃天青显色法快速测定结核分枝杆菌MIC及菌型鉴定

目的 用刃天青显色法快速测定结核分枝杆菌(MTB)MIC及菌型初步鉴定,并确定抗结核药物折点浓度.方法 用30株国家结核参比实验室熟练度测试质控菌株和64株临床分离菌株为试验菌株,在96孔培养板中,用Middlebrook 7H9液体培养基将抗结核药物进行连续双倍稀释后,加入一定浓度菌液,用刃天青显色法测定MIC.根据...