B7家族新成员:ICOS-L

B7家族的经典分子包括B7．1和B7．2，主要表达在抗原递呈细胞的表面，并通过与其配体CD28、CIIA-4的结合在T细胞的生长、分化、活化、死亡中起着重要作用。继CD28家族的ICOS—L发现以后，ICOS的配体-B7家族的一个新成员也随之确定，由于该分子是由几个实验室分别独立发现的，而现在对该分子尚无统一命名，故本文暂用ICOS-L表示。     

血红素加氧酶—1 cDNA在COS—1细胞内的表达

通过构建表达质粒ｐｃＤＮＡ３ＨＯ１，并在ＣＯＳ－１细胞中的瞬时表达，证实分离的ｃＤＮＡ编码血红素加氧酶－１，以探讨ＨＯ－１在新生期黄疸中的作用机制。实验中构建含编码ＨＯ－１ ｃＤＮＡ的表达型质粒ｐｃＤＮＡ３ＨＯ１，培养ＣＯＳ－１细胞，表达型质粒ｐｃＤＮＡ３ＨＯ１转染ＣＯＳ－１，收集细胞，超声破膜，超速离心得到微粒体颗粒，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）鉴定和酶活性检测，结果显示：ＨＯ     

癌细胞表面表达人绒毛膜促性腺激素的免疫荧光检测

目的筛选可供体外和动物体内肿瘤抑制试验的候选癌细胞株。方法通过间接免疫荧光法，用兔抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)多克隆免疫球蛋白(IgG)和小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白(IgG)，对人结(直)肠癌细胞(HCT15、HCT116、KM12、WiDr、LoVo、LS-174)、前列腺癌细胞(PC3)、小细胞肺癌细胞(A549)的细胞表达hCG情况进行检测。结果被检的8个癌细胞株均对兔抗hCG多克隆免疫球蛋白(IgG)呈阳性反应。其中4株结(直)肠癌细胞(HCT115、HCT116、Lo-Vo、LS-174)和小细胞肺癌(A549)能被小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白染色。结论这5株能与小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白结合的细胞株都适用于以后的肿瘤杀伤试验。     

人绒毛膜促性腺激素β亚基羧基端37肽四聚体基因在E.Coli中的表达

人绒毛膜促性腺激素β亚基 (h CGβ)羧基端 1 0 9～ 1 45残基组成的 3 7肽 (h CGβ-CTP3 7)是 h CG分子所特有的片段 ,并存在 h CG的特异表位 (抗原决定簇 )。为提高h CGβ-CTP3 7肽的免疫原性 ,本研究构建 h CGβ-CTP3 7四聚体 c DNA,克隆入载体p QE60 ,获得含 (h CGβ-CTP3 7) 4 c DNA的表达质粒 p QE60 -(h CGβ-CTP3 7) 4 ,在大肠杆菌X-Blue中进行表达 ,得到 h CGβ-CTP3 7四聚体。Western blotting结果表明 ,该四聚体分子量约为 2 0 k Da,并能与抗 h CG抗体结合 ,且结合能力比 h CGβ-CTP3 7二聚体强。因此 ,我们设想 h CGβ-CTP3 7四聚体可能成为生育调节疫苗免疫原而具有潜在的应用价值     

猪卵透明带-3α蛋白在大肠杆菌中表达的研究

通过原核表达系统获得研制ＺＰ疫苗的靶抗原。方法：用ＰＣＲ方法删除猪卵透明带－３αｃＤＮＡ５’端非编码区碱基顺序。在扩增的该基因５’端小片民双酶切３‘端大片段在ＡｐａＩ位点相连后,通过双酶切位点将读框完整的目标的基因定向插入ｐＢＶ２２１表达质粒ＰＲＰＬ启动子下游的多克隆区。     

大鼠血红素加氧酶-1变异体对血清胆红素水平的影响

新生儿高胆红素血症是临床常见病症,传统疗法只能清除已经形成的胆红素,至今尚无一条有效途径能起到早期预防和治疗的作用。微粒体血红素加氧酶-1 (Heme Oxygenase-1, HO-1) 是血红素氧化降解为胆绿素的限速酶,抑制HO-1活力则能有效降低血清胆红素水平。本实验采用定点突变法以构建变异体大鼠HO-1 cDNA（25位组氨酸→丙氨酸,His25Ala）,检测变异体HO-1活力,并在酶促反应系统内加入与野生型HO-1等量的变异体HO-1,测定胆红素含量,以评价变异体HO-1的抑制作用,为临床防治新生儿高胆红素血症提供一条新途径。　　一、材料与方法　　1.剪切的野生型大鼠 HO-1 cDNA表达型质粒的构建：BamHI酶切表达型质粒pcDNA3后形成的粘性末端经DNA聚合酶I填平（Klenow大片段）。     

hCG嵌合肽(CP1)基因的化学合成和原核系统表达

鉴于人绒毛膜促性腺激素 (ｈＣＧ)疫苗研究的现状和现代疫苗发展的趋势 ,我们提出了研制ｈＣＧ嵌合肽免疫原的生物工程路线 ,其优点是可以任意组合多种广谱Ｔ细胞表位 (ＴＣＥ)和靶抗原的三个线性Ｂ细胞表位 (ＢＣＥ) ,从而在无需特殊佐剂的情况下达到抗体生成水平高、中和性及亲和性强、无ＭＨＣ限制的目的。通过生物合成所设计ｈＣＧ嵌合肽 ,也便于工厂化生产并降低疫苗成本。ｈＣＧ嵌合肽设计 :选用外源ＨＢｓＡｇ19 3 3基金项目 :国家自然科学基金资助项目(39870 856)作者单位 :2 0 0 0 32上海市计划生育科学研究所 (徐万祥 ,邱德义 ,廖…     

The preparation of rat heme oxygenase-1 mutant to reduce the level of bilirubin

Objective　To prepare rat heme oxygenase-1 (HO-1) mutants and to determine the activity and inhibition of this mutated enzyme. Methods　pcDNA3HO1 containing truncated native rat HO-1 cDNA and pcDNA3HO1Δ25 carrying mutated rat HO-1 cDNA (His25Ala) were constructed, respectively. COS-1 cells transfected with pcDNA3HO1 and pcDNA3HO1Δ25 were collected and their activities were analyzed. Results　Native rat HO-1 was highly expressed in transfected cells and its activity was 13?688-15?600 U/mg protein per hour. However, the enzyme activity of mutated HO-1 declined and the value was 1948-2160 U/mg protein per hour. When an equal amount of mutant was added to the enzyme reaction system, the level of bilirubin decreased by 42%. Conclusion　The His25Ala mutant reduced the formation of bilirubin, suggesting that the mutant could competely bind the heme with native enzyme.     

Expression of the Gene Encoding the Tetraploid of Carboxyl-terminal Peptide of β-hCG Containing Thirty-seven Amino Acid Residues in E. coli

Human chorionic conadotropin (hCG) is a glycoprotein secreted by the trophoblast during early pregnancy and plays an important role in the maintenance ofearly pregnancy"'. Immuno--contraception directed against hCG is an effective meanso f fertility regulation. The worldwide interests have centred on developing immunocontraceptive vaccines against hCG, such as the prototype anti--hCG vaccine, advanced prototype anti--hCG vaccine, optimized anti--hCG vaccine and oral anti--hCGvaccine. Eve…