新型一体式软性人工角膜支架植入碱烧伤兔角膜的组织病理学观察*****☆

背景：前期实验制备的聚甲基丙烯酸羟乙酯人工角膜具有优良的光学性能和良好的亲水性,在植入家兔皮下和正常角膜组织实验中显示了良好的生物相容性,并具有抗撕裂强度。
　　目的：进一步评估新型一体式聚甲基丙烯酸羟乙酯人工角膜多孔支架材料在碱烧伤角膜中的生物愈合过程及组织病理学特点。
　　方法：氢氧化钠碱烧伤新西兰兔角膜3个月后,形成带新生血管和角膜白斑的动物模型。将孔隙性聚甲基丙烯酸羟乙酯人工角膜材料植入烧伤后的角膜板层间,分别于植入后2,8,16,28周进行苏木精-伊红染色、天狼猩红染色、免疫组织化学染色、扫描电镜及透射电镜观察。
　　结果与结论：组织病理学显示,材料植入后2周炎症反应轻微,所有标本中均无钙化现象,聚甲基丙烯酸羟乙酯材料孔隙中有成纤维细胞长入并有胶原沉积,随着时间推移,孔隙逐渐被填满;到16周时,与角膜组织能形成稳定的连接;28周时,材料孔隙几乎被新生组织完全充填,细胞数量减少,主要由成熟纤维构成。扫描电镜显示新生组织长入材料孔隙之中,与角膜结合紧密;透射电镜下见迁徙入材料内的角膜细胞胞浆富含粗面内质网等细胞器,显示旺盛的合成功能;其周围有胶原、蛋白多糖等细胞外基质的沉积,并且显示出从新生到成熟的动态变化。结果证实植入碱烧伤兔角膜层间的聚甲基丙烯酸羟乙酯孔隙性材料能够允许角膜细胞迁徙、增殖,分泌沉积细胞外基质,形成新的组织,达到材料与组织的稳定连接,显示了较好的生物相容性。     

某三级甲等医院眼科2015-2019年角膜移植手术病因及术式变化分析

背景 角膜疾病是常见的可逆性致盲疾病,角膜移植手术是治疗角膜盲的主要方法,是目前成功率最高的移植手术,根据手术方式,可分为穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)、板层角膜移植术(lamellar keratoplasty,LKP)、深板层角膜移植术(deep lamellar keratoplasty,DLKP)和角膜内皮移植术(endothelia keratoplasty,EKP).随着角膜移植手术技术的不断发展及显微手术精密性的增加,成分角膜移植手术方式逐渐代替PKP应用于临床中.目的 探讨患者接受角膜移植手术的病因、手术方式及其变化趋势.方法 对2015年1月-2019年12月于本院眼科行角膜移植手术患者的人口学资料、手术原因及手术方式进行回顾性分析.结果 2015年1月-2019年12月本院接受角膜移植手术患者共计667例722眼.其中,男性451例(67.6％)492眼,女性216例(32.4％)230眼,年龄最小4个月,最大92岁,平均(43.8±20.1)岁,18～59岁的中青年患者453例(67.9％).患者来自全国各地,北京市周边省市地区265例,占39.7％.病因分析:最常见为感染性角膜病变共167眼(23.1％),其中以病毒性角膜炎最多共79眼(47.4％);其次为再次手术111眼(15.3％)、角膜白斑108眼(15.0％)、眼外伤98眼(13.6％)、圆锥角膜83眼(11.5％)、大疱性角膜病变79眼(10.9％)、角膜变性与营养不良51眼(7.1％)、角膜肿瘤及其他25眼(3.4％).5年中眼外伤比例增长最明显.所有角膜移植手术中,PKP 227眼(31.4％),LKP 190眼(26.3％),DLKP 182眼(25.2％),EKP 73眼(10.1％),各术方式的手术量趋于平衡且每年手术总量变化不大,PKP稍有下降趋势,LKP和EKP有上升趋势,DLKP趋于平稳.结论 感染性角膜炎是角膜移植手术的主要原因,PKP仍为主要的手术方式,LKP手术量增加,EKP普遍应用于临床中.     

眼瘢痕性类天疱疮10年经历诊治一例

患者女,71岁。2004年2月因“双眼干涩、疼痛、异物感”,先后至多家医院就诊,均诊断为“结膜炎”或“角膜炎”,给予双眼局部药物治疗（具体不详）,症状未见好转。2011年1月患者至北京同仁医院就诊,明确诊断为“双眼瘢痕性类天疱疮”,给予环孢素眼液点眼治疗1年余,患者自觉治疗好转,但双眼视力逐渐下降,2012年5月就诊于北大人民医院.     

领扣型人工角膜治疗高危移植角膜盲的多中心临床研究

目的评价领扣型人工角膜移植术治疗高危移植角膜盲的有效性和安全性。方法病例系列研究。前瞻性连续收集2019年7月至2020年1月在山东第一医科大学附属眼科医院、解放军总医院眼科医学部、中山大学中山眼科中心、复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科和温州医科大学附属眼视光医院就诊且符合条件、拟行领扣型人工角膜移植术的高危移植角膜盲患者。术后随访12个月, 观察患者的术后视力, 以视力≥0.05为标准计算脱盲率并评定治疗的有效性;记录术后并发症情况、人工角膜在位情况, 以评定手术的安全性。结果 37例(37只眼)患者纳入研究, 男性32例, 女性5例;年龄范围为27～72岁。角膜移植手术后角膜植片混浊21只眼(56.8%), 眼部化学烧伤8只眼(21.6%), 眼部热烧伤5只眼(13.5%), 不明原因角膜混浊2只眼(5.4%), 角膜融解穿孔1只眼(2.7%)。2只眼于术后3个月退出研究, 35只眼完成术后6个月随访, 31只眼完成术后12个月随访。术后6个月83.8%术眼视力≥0.05, 术后12个月81.8%术眼视力≥0.05。合并青光眼11只眼, 术后12个月6只眼视力≥0.05。术后12个月...     

软性一体式PHEMA人工角膜植入碱烧伤兔角膜的电镜观察

目的 研究与评估新型软性一体式PHEMA人工角膜与碱烧伤兔角膜生物愈合的电镜特点。方法 制备兔角膜碱烧伤模型后,将软性一体式PHEMA人工角膜植入,分别于4周、8周、16周和24周后取裙边组织进行扫描电镜和透射电镜检查。结果 4周时,即有新生组织长入孔隙之中,材料与角膜组织结合紧密;迁徙入材料内的角膜细胞胞浆富含粗面内质网等细胞器,显示旺盛的合成功能;其周围有胶原、蛋白多糖等细胞外基质的沉积,并且显示出从新生到成熟的动态变化。结论 新型人工角膜的孔隙支架材料,能够允许角膜细胞及周围组织迁徙、增殖并分泌沉积细胞外基质,从而达到材料与组织的生物愈合。     

无内皮移植的角膜后弹力层剥除术治疗Fuchs角膜内皮营养不良1例

1例主诉为双眼进行性视力下降的患者就诊于眼科,入院诊断为双眼Fuchs角膜内皮营养不良（FECD）;左眼黄斑裂孔;右眼人工晶状体眼。患者及家属在沟通后同意行左眼无内皮移植的角膜后弹力层剥除术（DWEK）。术后1年复诊左眼角膜透明,可见中央直径4.0 mm后弹力层缺失边界,裸眼视力0.1,矫正不提高,说明DWEK对于轻度...     

J2对同种异体穿透性角膜移植模型大鼠CD4+和CD8+T细胞免疫功能的抑制

BACKGROUND: J2 takes functional domain (MHC CD4-D1/) of complex conjugate of CD4 molecule and MHC class II molecule as a target, and is a small molecule compound obtained by computer screening from a chemical data containing hundreds of thousands of organic compounds. In the previous study, J2 was used in mouse models of skin transplantation and keratoplasty by oral and intraperitoneal injection. Results verified that J2 could prolong the survival time of grafts, and suppress occurrence of rejection. To better play the role of a drug targeting and to reduce systemic toxicity, J2 will be further utilized in local treatment of keratoplasty rejection. OBJECTIVE: To investigate the inhibitory effect of new immunosuppressive agent J2 on CD4+ and CD8+ T cell immune functions in rat models receiving allogenic penetrating keratoplasty. METHODS: Allogeneic penetrating keratoplasty model was established using the adult female Wistar rats as donors and Sprague-Dawley rats as recipients. Group A: normal Sprague-Dawley rats were injected with 0.05 mL placebo subconjunctivally. Surgery rats were randomly divided into three groups. Group B: allograft rats were injected with 0.05 mL placebo subconjunctivally after autologous keratoplasty. Group C: allograft rats were injected with 0.05 mL placebo subconjunctivally. Group D: allograft rats were injected with 1% J2-nanosuspension 0.05 mL subconjunctivally. The distribution of T cell subsets in peripheral blood was detected using flow cytometry at 3 days, 1, 2 and 3 weeks after transplantation and compared among groups.  RESULTS AND CONCLUSION: There was no significant difference in total CD3+ T cells, CD4+ T cells, CD8+ T cells and CD4+/CD8+ in peripheral blood lymphocytes in group B at various time points. At 3 days and 1 week after surgery in group C, no significant difference in total CD3+ T cells, CD4+ T cells and CD8+ T cells was detected. At 1 and 2 weeks, the number of total CD3+ T cells, CD4+ T cells and CD8+ T cells increased, showing significant differences (P < 0.05). In group D, no significant hyperplasy was found in CD4+ T cells and CD8+ T cells at 1 and 2 weeks. The horizontal comparison of the same time point: the total CD3+ T lymphocytes of group D was significantly less than group C at 3 days, 1 and 2 weeks after operation (P < 0.05), whereas there was no significant difference at 3 weeks between the group D and group C. The number of CD4+ T lymphocytes in group D was less than in group C at 3 days and 1 week, but with no significant difference. The ratio of CD4+/CD8+ had no significant difference in group D compared with group C at 3 days, 1 and 3 weeks. J2 inhibits T lymphocyte proliferation and then inhibits T cell-mediated corneal allograft rejection.       

小分子化合物J2抑制小鼠角膜移植术后排斥反应的研究

目的 探讨新型药物J2抗同种异基因小鼠角膜移植术后排斥反应的作用及其机制.方法 实验研究.采用随机分组设计的研究方法.建立以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体的角膜移植实验模型,其中供体38只,受体100只,随机分为A、B、C、D 四组,每组25只.A组为BALB/c小鼠白体原位角膜移植,B、C及D组均采用C57BL/6-BALB/c同种异体角膜移植,术后采用腹腔注射给药,自手术当日开始,A组、B组给予安慰剂,C组给予CsA 10 mg/kg体重,D组给予J215 mg/kg体重,每天1次,连续给药12 d.观察各组植片生存指数变化,苏木素-伊红染色及冰冻切片免疫组织化学观察角膜植片病理改变;分别在术后1、2、3及4周行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测角膜植片中细胞因子的表达.各组间植片存活时间差异采用One-Way ANOVO分析进行比较,两组之间比较采用SNK法.结果 B组角膜植片平均存活时间为(18.88±4.19)d,D组发生排斥时间明显延迟为(33.62±6.S0)d,两组比较差异有统计学意义(q=8.33,P=0.00),而D组与C组比较差异无统计学意义(q=0.85,P=0.60).组织学检查证实,术后21 d,B组见大量细胞浸润,而D组与C组植片未见明显的细胞浸润.免疫组织化学检测显示安慰剂组角膜植片大量CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润,J2组与CsA组植片仅有少量的CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润.RT-PCR结果显示,在正常小鼠角膜未见IL-10和IFN-γ基因表达;异基因移植组从第1周开始表达各种基因,第3周表达明显增强;而J2组与CsA组从第1周开始表达,第2、3周表达减弱,第4周表达强于前3周.结论 J2通过拮抗CD4与主要组织相容性抗原(MHC)Ⅱ分子结合抑制CD4+T淋巴细胞激活,从而具有抗小鼠角膜移植排斥作用.