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101.
目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。 相似文献
102.
目的 研究非小细胞肺癌患者血清中纤维母细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor-1,FGFR1)表达意义及其与血清肿瘤标志物的相关性。方法 研究对象选取我院收治的非小细胞肺癌患者65例,并选取同期14例肺良性病变患者、25例原发性肝癌患者及35名健康体检者作为对照组,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组受试者血清FGFR1 DNA表达水平,采用电化学发光法检测肺癌患者血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、细胞角蛋白(cytokeratin-19-fragment,Cyfra21-1)以及神经特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)水平。比较各组血清FGFR1 DNA表达水平的差异并进行ROC曲线分析血清FGFR1水平诊断肺癌的准确性。采用Pearson相关性分析法分析肺癌患者血清FGFR1表达水平与CEA、Cyfra21-1及NSE的相关性。结果 单因素方差分析显示:各组血清FGFR1 DNA表达水平差异具有统计学意义(F=249.38,P<0.001);且肺癌患者血清FGFR1 DNA表达水平明显高于良性病变组(t=11.41,P<0.01)、肝癌组(t=9.09,P<0.01)及健康组(t=36.96,P<0.01);不同临床特征肺癌患者血清FGFR1 DNA表达水平具有明显差异,其中鳞癌患者血清FGFR1表达水平明显高于腺癌和其他肺癌(F=45.22,P<0.001),晚期(Ⅲ~Ⅳ)肺癌患者明显高于早期(Ⅰ~Ⅱ)肺癌患者(F=171.11,P<0.001),淋巴结转移阳性患者明显高于阴性患者(F=125.34,P<0.001)。ROC曲线分析显示:AUC=0.904>0.5具有诊断价值,最佳诊断临界值为1.79×10^5copies/μL,灵敏度为94.65%,特异性为82.76%。Pearson相关性分析显示:鳞癌患者血清FGFR1表达与CEA、Cyfra21-1及NSE均呈明显正相关(P<0.05),其中与Cyfra21-1的相关性最大(r=0.528);腺癌患者血清FGFR1表达与CEA呈弱相关关系(r=0.145,P=0.03),与Cyfra21-1、NSE均无明显相关性;其他类型肺癌患者血清FGFR1表达与CEA、Cyfra21-1及NSE均无明显相关性(P>0.05)。结论 肺癌患者血清FGFR1表达具有显著的临床意义,在肺癌的诊断中具有较高的诊断效能,另外FGFR1的表达与血清肿瘤标志物具有明显相关性,进一步表明其在肺癌的诊断、病理分型及预后的评估等方面具有重要临床意义。 相似文献
103.
104.
目的 研究老年抑郁症患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、血脂水平与认知功能之间的关系。方法 选取60例老年抑郁患者为研究组,以60例健康志愿者为对照组,测定两组血清Hcy、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL C)水平。用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评定病情严重程度,蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估患者的认知功能。结果 与对照组比较,研究组MoCA评分明显低于对照组(P<0.05),血清Hcy明显高于对照组(P<0.05),血清HDL C水平明显低于对照组(P<0.05)。相关分析显示,研究组认知功能损害程度与病情严重程度呈正相关(r=0.327,P<0.01),认知功能评估中注意与集中、记忆、执行功能评分与血清Hcy水平呈负相关(r=-0.402,P=0.01),其中执行功能评分与HDL C水平成正相关(r=0.562,P=0.008)。结论 老年抑郁症患者的认知功能损害与血清高水平Hcy和低水平HDL C水平有关,血清高水平Hcy和低水平HDL C可能是老年抑郁症患者的危险因素。 相似文献
105.
106.
硬化性苔藓(LS)是一种发病机制复杂且尚未明了的疾病,目前往往采取对症治疗的方式,但效果不理想。国内外已从不同方面对LS的机制开展研究,其中在免疫、遗传方面研究较丰富,主要涉及T淋巴细胞、炎症及纤维化相关细胞因子、人类白细胞抗原等;此外,也有研究表明LS的发生与代谢因素及微生物因素存在关联。本文综述近年来有关LS发病机制的研究,为今后治疗上的突破提供新思路。 相似文献
107.
背景:咬合治疗是对颞下颌关节紊乱的一种保守治疗方法,具有较久的治疗历史,但是其疗效也具有不少争议,患者病情极易复发.传统中医药治疗颞下颌关节紊乱取得了良好的疗效,并逐渐得到大家的关注.目的:探讨活血化瘀汤与跌打万花油热敷结合咬合板对颞下颌关节紊乱患者的治疗作用以及对患者患侧软组织张力的影响.方法:选择2017年1月至2... 相似文献
108.
109.
木通、川木通与关木通的比较鉴别 总被引:1,自引:0,他引:1
1管理现状 木通是常用中药,临床应用十分广泛.在"关木通"的肾毒性未引起重视之前,药品使用单位往往以"木通"为药斗名,关木通与川木通混用.自"关木通"中所含马兜铃酸的毒性越来越明确之后,至现在SFDA已取消"关木通"的药用标准,成方制剂中所用"关木通"以"木通"替代. 相似文献
110.
目的 探讨急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)静脉溶栓后出血转化及预后的危险因素.方法 选择2017年6月-2019年6月211例进行静脉溶栓治疗的AIS患者为研究对象,其中出血转化(hemorrhagic tromsformation,HT)的34例患者记为HT组,未出血转化的177... 相似文献