丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因NS5ATP13的克隆化研究

目的 应用微矩阵(microauray)技术，结合生物信息学(bioinformatics)技术筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)的反式激活基因，阐明授性HCV感染、肝纤维化及肝细胞癌(HCC)的等相关疾病的发病机制。方法 根据HCV-H病毒株序列设计、合成序列特异性的引物。以含有全长HCV—H株cDNA的pBRTM-3011质粒DNA作为模板，进行多聚酶链反应(PCR)扩增，获得的HCVNS5A编码基因片段克隆到TA载体中进行核昔酸序列的测定，构建真核表达载体PcDNA3．1(-)-NS5A。以pcDNA3．1(-)-NS5A转染肝母细胞瘤细胞系HepG2，提取总RNA，逆转录为cDNA后进行表达谱基因芯片分析。应用分子生物学技术，结合生物信息学技术，克隆HCVKDA反式激活作用的新的靶基因。结果 构建了真核表达载体pcDNA3．1(-)-NS5A，经过限制性内切酶作图分析和核苔酸序列分析证实正确无误。以PcDMA3．1(-)-NS5A转染HepG2后提取总MA，逆转录后进行表达谱基因芯片技术分析。应用分子克隆技术结合生物信息学技术克隆NS5A反式激活的新型靶基因，命名为NS5ATP13，在GenBank中登录，登录号为D21262。Ns5ATP13基因的编码序列全长为2103个核苷酸(nt)，编码产物由700个氨基酸残基(aa)组成。结论 丙型肝炎病毒NS5A基因产物具有显著的反式激活作用。微短阵技术是分析基因表达谱变化的自动化和高通量技术。应用这些技术，发现了HCVKDA反式激活作用的新的靶基因，将为进一步研究HCVNS5A反式激活作用的分子生物学机制及HCV相关疾病发病机制奠定基础。     

“6E”模式下健康教育在四肢软组织缺损皮瓣修复中的应用

目的：探讨“6E”模式下健康教育在四肢软组织缺损创面皮瓣修复患者中的应用效果。方法：选取2020年4月-2022年4月笔者医院收治的92例四肢软组织缺损创面皮瓣修复患者为研究对象，随机分为干预组和对照组各46例，对照组给予常规护理，干预组在对照组基础上给予“6E”模式下健康教育。比较两组患者干预前后认知偏差问卷（Cognitive bias questionnaire,CBQ）评分、焦虑自评量表（Self-rating anxiety scale,SAS）、抑郁自评量表（Self-rating depression scale,SDS）评分、应对方式问卷（Medical coping modes questionnaire,MCMQ）评分、自我护理能力测定量表（Exercise of self-care agencyscale,ESCA）评分及创面恢复美观程度优良率。结果：干预前，两组患者CBQ、SAS、SDS、MCMQ及ESCA评分组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。干预后，两组各量表评分均优于干预前，且干预组优于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；干预组...     

事业让我选择了暂时不要孩子

我和老公结婚5年了,一直都没要孩子。前几年结婚的时候都是租的房子。两个人都是从农村出来的,经济条件有限,为了在城里买套房子,打拼了好几年才住上属于自己的房子。也不是没想过要孩子,实在是条件太差,还房子的贷款都是大笔钱,家里已经没什么积蓄了,再添个孩子,实在没有能力和精力了。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活基因2的克隆化研究

目的 应用抑制性消减杂交技术(SSH)及生物信息学技术(bioinformcs)筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式激活新型靶基因，进一步阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCVNS3蛋白表达质粒pcDNA3．1(-)-NS3转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照，提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术，结合生物信息学技术，克隆HCvNS3反式激活作用的新的靶基因。结果 对于所获基因片段序列分析表明，其中之一为新型基因片段，从HepG2细胞提取总RNA，以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列，并测序证实，因其可以被NS3蛋白反式激活，故命名为NS3TP2，在GenBank中注册，注册号为AYll6970。NS3TP2基因的编码序列全长为1299个核苷酸(nt)，编码产物由432个氨基酸残基(aa)组成。结论 HCVNS3是一种典型的病毒基因组编码的具有反式激活作用的蛋白，而抑制性消减杂交(SSH)是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术。通过这种技术，发现了HCVNS3反式激活作用的新的靶基因，这一发现，为进一步研究HCVNS3蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。     

强脉冲多波长强光治疗婴儿体表草莓状毛细血管瘤

草莓状毛细血管瘤为较小而突出皮肤表面的结节样肿物 ,颜色鲜红或暗红 ,其皮肤表皮增厚并有皱褶 ,瘤体柔软 ,有一定压缩性 ,多在生后 1～ 2周内出现 ,6～ 12个月或较长时间内有不同程度增长 [1] 。 1999年12月～ 2 0 0 0年 11月 ,我们选择不同能量的 5 70 nm和5 90 nm波长强脉冲光源治疗婴儿皮肤草莓状毛细血管瘤 2 3例 ,效果良好 ,并发症少 ,无瘢痕 ,是较手术和冷冻治疗较理想的治疗方法 ,报告如下。1　临床资料　　 1999年 12月～ 2 0 0 0年 11月间收治 2 3例婴儿体表草莓状毛细血管瘤。接受第 1次治疗时年龄 12天～1岁 ,平均 4 .3个月。…     

反向聚合酶链反应检测肝细胞癌中乙型肝炎病毒DNA整合

目的应用反向聚合酶链反应(inverse polymerase chain reaction,IPCR)法检测肝细胞癌(HCC)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA整合.方法提取手术切除石蜡包埋人肝癌组织中DNA,根据IPCR原理,选用HBV DR1区无酶切位点的限制性内切酶酶切,通过连接反应形成环化DNA分子,以此作为模板进行PCR扩增得到已知序列的旁侧序列.琼脂糖凝胶电泳观察PCR扩增产物片段.结果 19例HCC标本中有14例检出整合型HBV DNA,2例同时存在游离型HBV DNA.结论 IPCR可以准确测定肝细胞中HBV DNA的整合.该方法为研究HBV DNA在肝细胞中的整合机制提供一简单、快速、经济途径.     

抑制性消减杂交技术原理及应用

0 引言抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)技术是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术。其原理是以抑制性多聚酶链反应(PCR)反应为基础的cDNA消减杂交技术。通过合成两个不同的接头,连接于测试cDNA片段的5’末端,达到选择性扩增差异性表达的cDNA片段,抑制非目的cDNA的扩增。该技术与其他消减杂交技术相比具有假阳性率低、敏感性高、效率高等优点而得到广泛应用, 1 抑制性消减杂交技术产生的背景高等真核生物细胞中约含有4-10万个不同的基因,但在生物体的发育过程中只有15％的基因得以表达。这