透明晶状体和老年性白内障晶状体上皮细胞水通道蛋白1的表达

目的　探讨透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞水通道蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)的表达水平。方法　收集 5例透明晶状体和 4 0例老年性白内障患者的前囊膜。应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对前囊膜下晶状体上皮细胞AQP1进行检测。结果　AQP1阳性表达在透明晶状体和老年性白内障患者前囊膜下晶状体上皮细胞的细胞膜。图像分析透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值低于透明晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值。结论　透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞的细胞膜表达AQP1,AQP1可能在老年性白内障发生发展中起一定作用。     

环杷明对实验性脉络膜新生血管的抑制及对Glil和HIF-1α及VEGF表达的影响

目的探讨环杷明（cyclopamine）对实验性脉络膜新生血管的抑制机制。方法利用倍频532nm激光（140mW,75μm,0.1s）光凝方式建立BN大鼠的脉络膜新生血管（CNV）模型。光凝后立即将模型大鼠分为4组,分别为空白对照组、磷酸盐缓冲溶液（PBS）液组、环杷明2.5mg&#183;mL-1组和环杷明4.0mg&#183;mL-1组。除空白对照组外,各组每只眼均从光凝当天开始至光凝后13d,每隔1d分别行玻璃体腔内注射PBS5μL、2.5mg&#183;mL-1环杷明5μL、4.0mg&#183;mL-1环杷明5μL。激光光凝后14d行荧光素眼底血管造影和吲哚箐绿眼底血管造影观察。取眼球标本分别行FITC-右旋糖酐标记的脉络膜巩膜铺片和病理组织学观察,以检测各组处理对CNV面积和CNV中央厚度的影响。行real-timePCR检测各组处理对Shh-Gli信号级联反应和HIF-1α-VEGF信号级联反应中Glil、HIF-1α、VEGFmRNA表达的影响。结果环杷明能显著减少实验性脉络膜新生血管的形成,并呈剂量依赖关系（P〈0.05）;同时环杷明能明显下调Glil、HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平（P〈0.05）。结论 Shh信号通路的激活与HIF-1α-VEGF信号通路共同参与了实验性脉络膜新生血管的形成。环杷明作为Shh信号通路阻断剂能成为新的抑制CNV形成的有效药物。     

NTF2对视网膜新生血管的抑制作用

目的 体外实验研究核转运因子2(NTF2)对视网膜新生血管的抑制作用.方法 以血管内皮生长因子(VEGF)刺激体外培养人视网膜血管内皮细胞,并分为转染重组腺相关病毒2-NTF2(rAAV2-NTF2)的实验组和转染等量空白rAAV2的对照组,利用流式细胞仪和Boyden小室观察NTF2对激活状态的人视网膜血管内皮细胞增殖和迁徙的作用.结果 流式细胞仪检测结果显示实验组在G1期的细胞比例为(49.57±0.43)%,对照组为(27.21±0.86)%,两者差异有统计学意义(P<0.05)./30yden小室实验检测迁徙细胞数,实验组和对照组分别为(13.85±1.5)和(34.6±2.5)(n=6,P<0.05),说明NTF2能抑制人视网膜血管内皮细胞的增殖和迁徙.结论 NTF2对视网膜新生血管具有抑制作用.     

以PBL为导向的情景互动式教学在眼科教学中的实践

分析在眼科教学中运用以PBL为导向的情景互动式教学的必要性和优势,介绍开展该教学法的具体内容,即教学内容重组、充分利用影像资源、创建特色课堂形式、实现角色互换,以及教学的具体实施过程,激发学生的学习兴趣与欲望,提高学习的主动性,培养学生的综合能力,达到理解性学习、全方位掌握所学知识的目的。     

Blockade of the sonic hedgehog signalling pathway inhibits choroidal neovascularization in a laser-induced rat model

Sonic hedgehog (Shh) signaling has recently been shown to be involved in the pathological angiogenesis in response to tissue hypoxia and ischemic injury.Hypoxia/ischemia is considered to play an important role in the development of choroidal neovascularization (CNV).This study was aimed to examine the effect of blockade of the Shh signaling pathway on CNV and the underlying mechanism.A total of 64 male Brown-Norway (BN) rats were used in this study.One eye of each rat underwent laser photocoagulation.The other eye served as normal control.After the laser treatment, the 64 rats were divided into four groups (n=16 in each group):Blank control group, in which no intravitreal administration was given; cyclopamine group, recombinant Shh N-terminals protein (rShh) group and phosphate-buffered saline (PBS) group, in which cyclopamine (a Shh inhibitor), rShh (a Shh activator) and PBS were intravitreally injected into the laser-treated eyes respectively every other day for a total of four intravitreal injections immediately after the laser treatment.Fourteen days after the intravitreal administration, the changes of CNV-related variables, including positive CNV lesion percentage, CNV membrane area and CNV membrane thickness, were evaluated by fluorescein anqiography, indocyanine green angiography and pathological examinations.The mRNA and protein expression of PTCH1, Gli1, HIF-1α, VEGF and DLL4 in each group on 14 days of CNV model was detected by real-time quantitative PCR and western blot analysis, and the relationship between the Shh cascade and the HIF-1α-VEGF-DLL4 cascade in CNV was analyzed.The results showed that the CNV membrane area and the CNV membrane thickness were decreased by 62.5% and 41.9% in the cyclopamine group and increased by 85.7% and 64.3% in the rShh group in comparison to those in the blank control group (P<0.01 for each).There was no significant difference in the CNV membrane area and thickness between the blank control group and PBS group (P=0.102 and P=0.063, respectively).Real-time quant     

RNA干扰抑制DLL4基因表达对低氧诱导的脉络膜-视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管型形成的影响

研究背景： Delta-like 4 (DLL4)是近年新发现的可由低氧诱导的血管生长调控因子,属特异性表达于血管内皮细胞上的NOTCH受体的配体。最近研究表明DLL4/NOTCH信号在生理性和病理性血管新生过程中起着关键的调控作用,它可抑制新生血管的分支和出芽并促进血管的正常分化,从而阻止过度的血管新生。脉络膜新生血管(CNV)实际上也是一种有低氧参与的病理性血管新生的过程,但DLL4基因在CNV形成中的表达和作用目前报道甚少,本文研究拟在体外细胞水平观察DLL4基因在低氧培养的脉络膜血管内皮细胞中的表达规律,并通过RNA干扰技术抑制DLL4基因表达,进而评估DLL4基因对低氧诱导的脉络膜血管内皮细胞在血管新生中的生物学行为包括增殖、迁移和管型形成能力的影响。 研究方法： 以参与CNV形成的主要细胞--脉络膜视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞系）作为研究DLL4基因在CNV中表达和作用的体外细胞模型。通过200uM CoCl2化学诱导产生的低氧来模拟CNV体内的低氧环境。分别利用RT-PCR、real-time quantitative PCR和Western blot方法定性和定量检测低氧诱导下的RF/6A细胞中DLL4基因mRNA和蛋白水平的时程表达规律。设计和化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lepofectamine 2000介导DLL4 siRNA转染低氧培养12h的RF/6A细胞。利用流式细胞仪检测荧光标记的siRNA的转染效率。分5组①空白对照组;②转染液对照组;③100nmol/l DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组;④100nmol/l DLL4 siRNA-duplex1;⑤100nmol/l DLL4 siRNA-duplex2检测RNA干扰后的DLL4 mRNA和蛋白的表达水平,筛选RNA干扰抑制效率高的DLL4 siRNA-duplex用于转染低氧诱导的RF/6A细胞。进一步观察siRNA特异性干扰DLL4基因表达对DLL4-NOTCH-HES1-HEY1信号级联反应下游的关键靶基因HES1和HEY1 mRNA表达的调控。通过MTT和流式细胞周期分析技术观察RNA干扰抑制DLL4基因表达对低氧诱导的RF/6A细胞增殖能力的影响;利用transwell小室的体外细胞跨膜迁移实验,检测下调DLL4基因表达对低氧诱导的RF/6A细胞迁移能力的影响;通过Matrigel体外管型形成实验观察RNA干扰后的RF/6A细胞在低氧培养下形成小管样结构的长度,以反映细胞体外管型形成能力的变化。 研究结果：RF/6A细胞中可检测到DLL4基因的表达,且受低氧因素的诱导调控。低氧培养1h后,DLL4 mRNA和蛋白的表达水平逐渐增高,低氧培养12h时表达水平达到最高峰并持续高表达至24h。相对于DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组,DLL4 siRNA-duplex1和DLL4 siRNA-duplex2转染RF/6A细胞 48小时后低氧培养12h,DLL4基因的mRNA表达抑制率分别为91.4％和82.5％,DLL4蛋白的表达抑制率分别为86.2％和75.3％。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组三组之间的DLL4基因表达水平无显著性差异(P=0.139),DLL4 siRNA-duplex1能特异性抑制DLL4基因表达。HES1和HEY1的mRNA表达水平也相应分别下降75.1％ (P=0.004)和86.3％ (P=0.004),表明DLL4基因具有调控DLL4-NOTCH-HES1-HEY1信号级联反应的作用。 MTT结果显示：siRNA转染48h的RF/6A细胞继续低氧培养72h和96h的吸光度（A）值较scrambled 阴性对照组明显增加(P=0.031, P=0.006), 且相应的细胞周期分析显示RF/6A细胞阻滞在S期;转染DLL4 siRNA-duplex1的RF/6A细胞低氧培养8h后,迁移过膜的细胞数明显增多,为scrambled 阴性对照组的1.6倍,其细胞数差异具有统计学意义 (P<0.001)。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组之间的跨膜迁移细胞数无显著变化 (P=0.137)。转染DLL4 siRNA scrambled negative control的RF/6A细胞低氧培养24h后在体外Matrigel上多形成条索状或不连续且稀疏的小管样结构,而转染DLL4 siRNA-duplex1的RF/6A细胞可形成环形完整的网状小管样结构,且管型长度明显增加了82.3％,其差异有统计学意义 (P<0.001)。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组之间的管型长度则无明显差异(P=0.178)。 研究结论：DLL4是受低氧诱导的新生血管分支和出芽的负性调控因子。靶向DLL4基因的siRNA可抑制低氧培养的RF/6A细胞中DLL4、HES1和HEY1基因的表达水平,并促进RF/6A细胞体外增殖、迁移和管型形成。DLL4可望成为脉络膜新生血管治疗策略中的新靶点。     

正常成年人眼眶脂肪体积随年龄变化的磁共振成像定量分析

目的利用磁共振成像（MRI）研究不同年龄段正常成年人眼眶脂肪体积的变化,探讨正常成年人眼眶脂肪体积随年龄变化的趋势。方法调查研究。召集我院144例（男女各半,288眼）成人健康体检志愿者,按年龄分组（1组,18～35岁;2组,36～50岁;3组,≥51岁）平均入组不同年龄组男、女各为24例,行眼眶MHI扫描并测量眼眶脂肪体积,经标准化处理后,分析不同性别及年龄段正常成年人眼眶脂肪体积变化。采用单因素方差分析、独立样本t检验、Spearman等级相关进行数据分析。结果男性各年龄组之间眶脂肪体积差异无统计学意义（F=0．787,P〉0．05）,女性各年龄组之间眶脂肪体积差异无统计学意义（F=1．183,P〉0．05）,男、女2组眼眶脂肪体积比较差异无统计学意义（t=1．029,P〉0．05）,眼眶脂肪体体积与年龄之间无相关性（r=-0．087,P〉0．05）。结论正常成年人眼眶脂肪体积随年龄增长无明显变化,男、女性别之间无明显差异。     

眼科门诊儿童患者干眼流行病学特征分析

目的:研究眼科门诊儿童患者干眼发病率,分析干眼发病与儿童年龄、视觉显示终端使用及结膜炎的相关性。方法:顺序统计眼科门诊儿童患者(7~13岁)128例,采用改良的眼表疾病指数(OSDI)调查表及泪膜破裂时间(BUT)评价干眼患病率及严重程度。结果:本组儿童总体干眼患病率为19.5%,其中7~10岁组儿童64例,干眼患病率为15.6%;11~13岁组儿童64例,干眼患病率为23.4%。7~10岁组儿童OSDI平均为1.55±0.61,11~13岁组儿童OSDI平均为2.15±0.83,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。7~10岁组儿童BUT平均为12.05±3.25s,11~13岁组儿童BUT平均为10.05±2.97s,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。每天使用视觉显示终端超过2h组儿童干眼患病率为43.3%,对照组为12.2%;近3mo曾患结膜炎组儿童干眼患病率为26.3%,对照组为8.3%;组间OSDI及BUT差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:相当一部分儿童患者合并干眼,其发生与患儿年龄、过度使用视觉显示终端及罹患结膜炎相关。     

获得性双眼旋转性斜视的治疗与转归

目的 探讨双眼旋转性斜视发病病因、临床特点、治疗效果及预后.方法 用同视机、双马氏杆等检查诊断双眼旋转性斜视患者10例,根据病因不同采用不同治疗方法.结果 2例由颅内病变引起者转至相应科室治疗原发病;8例脑外伤引起者,4例经药物及物理保守治疗,半年后基本恢复正常双眼单视功能;3例经保守治疗半年后行双上斜肌矢状移位术;1例因种种原因未能进一步治疗.结论 近年来该病发病有增多趋势,加强对该病的认识很有必要;部分患者经药物和物理等治疗可以临床治愈;双上斜肌矢状移位术也可取得令人满意效果.