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背景:葡萄糖调节蛋白78是存在于内质网上最多的分子伴侣蛋白,具有保护细胞对抗细胞调亡的作用。目的:构建携带并正确表达外源性人葡萄糖调节蛋白78基因的重组真核表达载体,建立葡萄糖调节蛋白78基因稳定转染的人视网膜色素上皮细胞系。方法:扩增人葡萄糖调节蛋白78全长编码序列,将该目的基因与真核表达载体PEGFP-N1进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,以PCR方法鉴定阳性克隆,并进行测序和分析比对,获得融合蛋白表达质粒载体pEGFP-grp78。通过阳离子脂质体介导将重组质粒pEGFP-grp78转染入体外培养的人视网膜色素上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达细胞系。结果与结论:体外培养的人视网膜色素上皮细胞株作为真核细胞表达系统,经荧光显微镜和RT-PCR方法检测,G418筛选的稳定转染细胞系中GFP大量表达,葡萄糖调节蛋白78mRNA的表达量是正常视网膜色素上皮细胞的4倍左右,表示脂质体介导的pEGFP-grp78质粒成功转染视网膜色素上皮细胞,并高效稳定表达葡萄糖调节蛋白78。 相似文献
12.
目的 观察葡萄膜炎患者黄斑水肿的光学相干断层扫描(OCT)图像特征及与临床的关联,探讨频域OCT在葡萄膜炎性黄斑水肿定性和定量分析中的应用价值.方法 连续临床病例横断面研究.对河南省眼科研究所在2009年4月至2011年3月就诊的葡萄膜炎并黄斑水肿169只眼进行频域OCT检查,分析黄斑水肿的类型及各参数与视力的相关性,并与FFA结果对比分析.结果 (1)黄斑水肿分型:囊样水肿占43.19%,弥漫性水肿占34.91%,单纯神经上皮脱离占10.06%,11.83%同时出现3种改变;囊样水肿发生率最高.(2)光感受器内外节连接体断裂者54只眼(31.95%),玻璃体后脱离者33只眼(19.53%);存在明显玻璃体视网膜牵拉者15只眼(8.88%),黄斑前膜者33只眼(19.53%).(3)囊样水肿组平均黄斑厚度高于弥漫性水肿组,两组视网膜厚度均与视力呈负相关;连接体断裂组视力较完整组低;存在黄斑前膜组视力较低.(4) OCT与FFA对黄斑水肿的检出一致率为86.39%.结论 葡萄膜炎所导致的黄斑水肿其形态可表现为多种不同的类型,OCT可以对这些改变进行有效观察,其中有些改变与视力密切相关. 相似文献
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目的 观察缺氧、氧化应激对体外培养的视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞增殖的影响及GRP78表达的变化。方法 体外培养人RPE细胞,采用CoCl2诱发细胞缺氧模型、H2O2诱发氧化应激模型。实验分为量-效关系组:细胞分别经浓度为100μmol?L-1、200μmol?L-1、400μmol?L-1、800μmol?L-1的CoCl2、H2O2作用12h,用MTT法检测细胞增殖情况;时-效关系组:在CoCl2浓度为200μmol?L-1、H2O2浓度为400μmol?L-1的基础上,分别选取药物作用8h、12h、16h3个时间点收集细胞,采用免疫细胞化学染色检测GRP78蛋白的表达情况。结果 量-效关系组:不同浓度CoCl2组RPE细胞活性与空白对照组相比均明显下降(均为P<0.05);400μmol?L-1及800μmol?L-1H2O2组细胞存活率较空白对照组均明显下降(均为P<0.05)。时-效关系组:空白对照组GRP78表达阳性细胞率为(5.4±30)%;CoCl2作用8h、12h、16hGRP78阳性细胞率分别为(342±71)%、(54.4±9.1)%、(34.7±6.8)%;H2O2作用8h、12h、16hGRP78阳性细胞率分别为(37.8±71)%、(57.4±5.1)%、(42.5±3.9)%。经统计学分析,CoCl2、H2O2处理8h后,RPE细胞中GRP78表达均较空白对照组明显升高(均为P<001),作用12h时GRP78的表达量最高,作用16h时GRP78的表达量又有下降。结论 GRP78可以作为RPE细胞缺氧、氧化应激的生化标志物,GRP78的表达变化与细胞应激状态有一定依赖关系。 相似文献
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背景:葡萄糖调节蛋白78是存在于内质网上最多的分子伴侣蛋白,具有保护细胞对抗细胞调亡的作用。
目的:构建携带并正确表达外源性人葡萄糖调节蛋白78基因的重组真核表达载体,建立葡萄糖调节蛋白78基因稳定转染的人视网膜色素上皮细胞系。
方法:扩增人葡萄糖调节蛋白78全长编码序列,将该目的基因与真核表达载体PEGFP-N1进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,以PCR方法鉴定阳性克隆,并进行测序和分析比对,获得融合蛋白表达质粒载体pEGFP-grp78。通过阳离子脂质体介导将重组质粒pEGFP-grp78转染入体外培养的人视网膜色素上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达细胞系。
结果与结论:体外培养的人视网膜色素上皮细胞株作为真核细胞表达系统,经荧光显微镜和RT-PCR方法检测,G418筛选的稳定转染细胞系中GFP大量表达,葡萄糖调节蛋白78 mRNA的表达量是正常视网膜色素上皮细胞的4倍左右,表示脂质体介导的pEGFP-grp78质粒成功转染视网膜色素上皮细胞,并高效稳定表达葡萄糖调节蛋白78。 相似文献